胸腺五肽纳米粒的制备及其处方优化(2)

TP-5）为胸腺生成素Ⅱ胸腺五肽（thymopentin，

的免疫活性中心，它能提高T细胞的免疫能力，双向调节机体失衡的免疫功能，抗感染、抗肿瘤疗效显5的剂型只有冻干粉针，著。目前市场上TP-剂型单患者顺应性差。近年来，蛋白质多肽类药物的肺一，

部给药系统因具有良好的顺应性而成为热点

［1］

天津市光复精细化工研究所）；甲醇（色烷（分析纯，

谱纯，安徽时联特种溶剂股份有限公司）；超纯水；异丙醇（分析纯，天津市富宇精细化工有限公司）；KH2PO4、NaOH（分析纯，天津市福晨化学试剂厂）。

，其

2

2．1

方法

胸腺五肽纳米粒的制备

在表面活性剂卵磷脂与冻干保护剂乳糖的存在

中气雾剂因无创、轻便，便于携带、药物密封在耐压容器内可避免氧化分解等优点而广泛被病人与医务人员所接受

［2－3］

。5溶于叔丁醇-下，将TP-水的混合溶剂中，溶解完全后，置于冷冻干燥机中进行冻干，最后将冻干物进行纯化处理以得到纯药物纳米粒。具体步骤如下：称5、取适量TP-乳糖放入西林瓶中，加入超纯水溶解作为水相；再称取适量卵磷脂放入50mL塑料离心管中，加入叔丁醇溶解形成有机相；在涡旋或者搅拌下，将水相缓慢加入有机相中，形成淡黄色澄清透明液。用液氮将所得溶液速冻成固体，在冷冻干燥机上（真空度25Pa、冷阱温度－55℃）冻干36h除去水与叔丁醇，得到被卵磷脂包裹的纳米粒（即冻干产物）。将冻干产物转移入5mL塑料离心管中，用5和适量异丙醇混悬（由于卵磷脂溶于异丙醇而TP-乳糖不溶于异丙醇），用离心机在25℃离心（转速12000r·min－1）2min，倾去含有表面活性剂的上收集含纳米粒的沉淀。再反复用异丙醇离心清液，

洗涤2次以去除残留的卵磷脂，即获得高度纯化的TP-5纳米粒。2．2

处方优化

为了进一步得到具有良好特性如粒径较小且分TP-5含量高的纳米粒，5制本文对影响TP-布均匀、

备处方的诸多因素进行了考察。在预实验的基础上，经过单因素考察，选取了对纳米粒性质影响较大，且作用效果不易预测的3个因素：水的用量（X1，mL）、mg）、TP-5的用量卵磷脂的用量（X2，（X3，mg）作为自变量（乳糖与叔丁醇的量分别固定为15mg与3．0mL），以所得的纳米粒的粒径（Y1，nm）、PI）（Y2）为因多分散系数（polydispersityindex，Expert8．0．5软件包（Stat-Ease变量，采用Design-Inc．，Minneapolis，USA）中的星点设计进行多元线性回归和二项式拟合，用效应面法优选处方条件，并进2。行预测分析。因素水平设计、实验设计见表1、因所制得纳米粒为纯药物纳米粒，所以未选取载药量及包封率作为实验考察的因变量。2．3

粒径及PI的测定

5依照星点设计表，按“2．1”项下方法进行TP-

由于大部分蛋白质多肽类药物在氢氟烷（HFA）抛射剂中的溶解度很小，所以药物一般以微粒的形式混悬于抛射剂中除

［5－6］

［4］

。与一般的微粒相比，

纳米粒可以躲避巨噬细胞的吞噬及黏膜纤毛的清

［7］

，增大药物在肺部的沉积率，从而提高药物

用于肺部给药系统的纳米粒的制的疗效。近年来，

备方法比较多，如高压均质法、微乳模板法、纳米沉淀法等

［8－9］

，但这些方法都存在很多的缺陷，如制备

工艺较复杂、对蛋白质多肽的结构破坏可能性大、能耗大、使用毒性有机溶剂等。

为了克服以上方法的不足，本文受本实验室溶菌酶纳米粒制备方法

［10］

的启发，首次将加有表面活

5纳米粒性剂与乳糖的叔丁醇-水混合溶剂用于TP-的制备，简化了制备流程，避免了使用可能会破坏蛋白质多肽结构的高速剪切法，且降低了能量消耗。由于叔丁醇的凝固点、低共熔温度、蒸气压均较高

［11］

，且毒性较低，所以将叔丁醇与水结合起来可

［12］

以极大地改善冻干效果进行处方优化。

。为了获得满意的TP-5

［13－16］

纳米粒粒径及其分布，采用了星点效应面设计

1仪器与材料

ChristAlpha1-4LSC型冷冻干燥机（博劢行仪

器有限公司）；MettlerToledoEL型电子天平［梅特；AnkeTGL-16C离勒-托利多仪器（上海）有限公司］12DTD超声波心机（上海安亭科学仪器厂）；SB25-清洗器（宇波新芝生物科技股份有限公司）；UKMarlvenZetaszierNano-ZS90粒度检测仪（英国马尔10Avpplus高效液相色谱文仪器有限公司）；CBM-SPD-20A紫外检测器，LC-20A输液仪（日本岛津，

SIL-20A自动进样器）。泵，

TP-5原料药（批号20100601，成都凯捷生物医药科技发展有限公司）；乳糖（美华生物技术股份有限公司）；卵磷脂（LipoidE80，药用级，德国）；叔丁醇、异辛