GC_MS法检测汤料中罂粟生物碱提取条件探讨

2784中国卫生检验杂志2010年11月第20卷第11期 ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,Nov2010;Vol20 No11

化学测定方法

GC/MS法检测汤料中罂粟生物碱提取条件探讨

李凤贞,区文凯,莫嘉延

(广东省佛山市高明区疾病预防控制中心,广东佛山 528500)

[摘要] 目的:建立GC/MS检测汤料中罂粟生物碱最佳提取条件。方法:以气质联用中SIM模式进行离子提取,以罂粟壳加入正常的火锅汤底作阳性样品,模拟各种汤底组成中罂粟壳的加入方法,用三种组合的有机溶剂分别作萃取液,定性检测汤料中的可待因、吗啡、蒂巴因、罂粟碱、那可汀等生物碱。结果:在同等的罂粟壳加入量中,加入到无油稀汤底中的罂粟壳生物碱响应值最高,最易检出;用氯仿+乙醇(9+1)作萃取液,罂粟生物碱提取效果最好;以可待因作为检出指标,检测灵敏度最高。结论:以气质联用中SIM模式,用氯仿+乙醇(9+1)作萃取液,选取怀疑添加了罂粟壳的无油稀汤底进行样本检测,罂粟生物碱的检出率最高。[关键词] 气质联用仪;汤料;罂粟生物碱;提取

[中图分类号] O657.63 [文献标识码] A

[文章编号] 1004-8685(2010)11-2784-03

TheextractingconditionofPoppy!salkaloidinsoudstockbyGC/MS

LIFeng-zhen,OUWen-kai,MOJia-yan

(GaomingDistrictCenterforControlandPrevention,Foshan528500,China)

[Abstract] Objective:Todevelopthebestextractingconditionofpoppy!salkaloidinsoupstockbyGC/MS.Methods:Toqualitativeanalyzecodeine,morphine,thebaine,paparerine,noscapineinsoupstockbyextractingselectedionsandchromato graph!sRTofpoppy!sshellthroughaddingpoppy!sshelltothehotpotsoupaspositivesample,andsimulatingeachkindofsoup!scompositionofAddingpoppy!sshell,makingtheextractedliquidseparatelywiththreekindofcombination!sorganicsolvents.Results:Thepoppyshellalkaloidresponsevaluewasthehighestinthenon-oilthinsoupofaddingthesamequantityofpoppyshel.lConclusion:Thepoppyalkaloiddetectionrateishighestthroughselectingthatsuspectedpoppyshell!snon-oilthinsoupassampleandchloroform+ethylalcohol(9+1)asextractingsolvent.[Keywords] GC/MS;Soupstock;Poppyalkaloid;Extraction 罂粟是两年生草本植物,每年初冬播种,春天开花。其花色艳丽,初夏罂粟花落,约半个月后果实接近完全成熟之时,用刀将罂粟果皮划破,渗出的乳白色汁液经自然风干凝聚成粘稠的膏状物,颜色也从乳白色变成深棕色,用烟刀刮下来这些膏状物就是生鸦片。收取鸦片后的罂粟壳中仍含有一定量的吗啡、可待因、罂粟碱、那可汀等生物碱成分。由于罂粟壳具有止咳镇痛等药用价值,在中药配伍中也常用到。但部分不法商家为了谋取更大的利益,在各种食物特别是火锅汤料或酱汁中加入罂粟壳。该实验以罂粟壳作为阳性标准样品,采用气质联用仪中离子提取模式,可以快速、灵敏、准确地检测火锅汤底中的罂粟生物碱。1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

AgilentGC6890N-5973i气质联用仪;Agilent7683自动进样器;湘仪TDZ5-WS多管架自动平衡离心机;氯仿:HPLC级;乙醇:优级纯;盐酸:分析纯;浓氨水:分析纯;罂粟壳:购自

[作者简介] 李凤贞(1974-),女,本科,主管技师,主要从事理

化检验。

中药房,经中药粉碎机碎成粉状,备用;萃取液:氯仿+乙醇(9+1);汤料材料:花椒、八角、小茴、砂仁、草果、甘草、丁香、沙姜等制作火锅汤底的中药经中药粉碎机粉碎。1.2 方法

1.2.1 普通火锅稀汤底的制作 称取10g1.1汤料,加入1500ml纯水中,加热煮沸30min,过滤除渣,即得香浓的火锅汤底。1.2.2 阳性火锅汤底的配制 量取1.2.1的汤500m,l加入0.100g粉状罂粟壳,即得阳性火锅汤底。

1.2.3 样品的制备和提取 固体汤料:称取约10g汤料,加入500ml纯水;液体汤体:直接量取500ml汤。将上述样品和阳性火锅汤底用盐酸(1+1)调pH1~2,加热,煮沸30min,放冷后,4000r离心5min,取上清液加入40ml石油醚抽提,弃去石油醚层后,滴加浓氨水调pH8.5~9.5,加20.00ml萃取液振摇,静置分层。萃取液过无水硫酸钠脱水后,准确吸取10.00ml萃取液于60 水浴挥至近干,以萃取液定容到1m,l以0.22 m滤膜过滤后待测[1]。1.2.4 GC/MS条件 进样口:300 ,脉冲不分流,脉冲压力:137.9kPauntil1.00min。程控升温:70 (保持1min)30 /min260 (mi.n源:70eV度:

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230 ;四极杆温度:150 ;进样口温度:300 ;接口温度:300 ;采集方式:SIM;溶剂延迟:9min,进样量:1 l。2 结果与讨论

2.1 三种不同萃取液萃取效果的比较

由于罂粟生物碱能与酸结合成盐类,碱化时即能游离析出。游离的生物碱很难溶于水或几乎不溶于水,能溶于乙醇、醚、氯仿、戊醇、乙酸乙酯、苯等[2]。在该实验中,选用氯仿+乙醇(9+1)、乙腈+乙醇(9+1)、乙酸乙酯+乙醇(9+1)分别作萃取液,直接称取0.5g罂粟壳加入萃取液,分别作超声30min和浸泡10h处理,在实验中选择灵敏度最高的可待因作对比,结果:在超声30min和浸泡10h中,氯仿-乙醇萃取液提取的可待因峰高和峰面积都最高,而乙酸乙酯-乙醇萃取液提取的可待因峰高和峰面积都最低,在超声30min处理中,三种萃取液的提取效果差异不大,而在浸泡10h处理中,则以氯仿-乙醇萃取液的提取效果最好,故该实验中选择氯仿-乙醇(9+1)作萃取液。色谱图如图1所示,结果如表1所示。

表1 三种萃取液萃取可待因效果比较

可待因(超声30min)可待因(浸泡10h)

萃取液名称氯仿+乙醇(9+1)乙腈+乙醇(9+1)乙酸乙酯+乙醇(9+1)

峰高718746800857221

峰面积156514514639041226583

峰高434161173159111892

峰面积860811334780682112509

[1]

吗啡、罂粟碱、蒂巴因的响应值很低(罂粟碱的响应值一直很低,可能与该罂粟壳原有罂粟碱含量有关)。造成这样的原因可能有两个:(1)在1.2.3的处理中,在酸性介质下,石油醚除了提取杂质和油外,还将一部份的吗啡、蒂巴因提取了;(2)在pH8.5~9.5时,部份吗啡、罂粟碱、蒂巴因没有形成游离态,不能被萃取液提取出来,故导致碱化后萃取的响应值偏低。但用10g以上的固体汤料加入0.1g罂粟壳直接抽提时,由于汤料成份复杂,汤浓度高,杂质太多,反而会造成罂粟生物碱难以检出的情况,即使使用SIM模式,也难以很好地排除杂质对生物碱的干扰,且对毛细管柱造成较严重的污染,所以固体汤料中罂粟生物碱的提取也应按1.2.3进行,而不使用直接萃取,并以灵敏度最高的可待因作为检出指标。

表2 在不同基质中罂粟生物碱的提取效果

可待因

罂粟壳和基质组成

峰高

0.1g罂粟壳+500ml纯水#

0.1g罂粟壳+10g粉碎汤料+500ml纯水

6641033732

峰面积峰面积响应值比较1686796#是%的30.8%800002

是#的47.4% 是%的14.6%

0.1g罂粟壳+500ml普通火锅稀汤底%

255338

5482520%响应值最高4041752&是%的73.7%

0.1g罂粟壳+500ml普通火锅稀汤底+50ml食用油&179904

图1 氯仿+乙醇(9+1)萃取罂粟生物碱色谱图

(萃取液10m,l罂粟壳0.5g,浸泡10h)

2.2 基质效应

制备4种样品:#0.1g罂粟壳+500ml纯水; 0.1g罂

粟壳+10g粉碎汤料+500ml纯水;%0.1g罂粟壳+500ml普通火锅稀汤底;&0.1g罂粟壳+500ml普通火锅稀汤底+50ml食用油。四种样品按1.2.3进行前处理和生物碱的提取,以灵敏度最高的可待因峰面积作对比,结果:在%组成中可待因响应值最高,是#组成响应值的3倍多;但极浓的汤底 组成由于太多杂质的干扰,又降低可待因的响应值;在含油的&组成中,可待因的响应值也受到一定程度的抑制。具体结果见表2。

2.3 罂粟壳前处理不同,生物碱响应值不同

直接萃取罂粟壳提取的生物碱,除了可待因响应值最高外,吗啡、蒂巴因、那可汀也有一定高的响应值。而阳性样品按1.2.3处理后提取的生物碱,虽基质组成不同,生物碱的响应值也不同(基质组成如表2中#、 、%、&,色谱图如图2、图3、图4、图5所示。),但它们有一个共同的特点:可待因的响

碱,是那,(下转第页)

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2.6 加标回收率实验

本实验分别对三种不同Al浓度含量的样品进行了加标回收率实验,其回收率在92%~98%范围内。结果见表4。

表4 加标回收率实验结果

样品本底含量( g)面粉

0.38

加标量( g)

1.020.0

馒头

2.46

2.020.0

桃酥

12.93

10.020.0

测量值1.3019.784.3422.0622.4332.33

回收率(%)

929794989597

3 结论

铝现在已经被明确定为食品污染物,国家标准已经对食品中的铝限量做出了明确规定,但是随着食品科技以及检测技术的飞速发展,现行的铬天青S-分光光度法越来越不能满足食品日常检测的需要。本文采用石墨炉原子吸收光谱法灵敏度高,精密度和准确度好,操作简单,分析速度快,尤其适合大批量样品测定,值得在食品日常监督中推广。

[参考文献]

[1]苏志明.警惕食品中的铝[J].中国质量技术监督,2005,(10):47.

[2]GB2762-2005.食品中污染物限量[S].中华人民共和国标国家

标准.北京:中国标准出版社,2005,(6):4.[3]史宁.食品中加工膨松剂的应用[J].食品与健康,2002(2):48.[4]唐焕文,谢佩意,胡万达.铝的神经毒作用机理研究进展[J].中

国职业医学,2001,28(3):42.[5]王劲.铝的生物学作用研究概况[J].卫生研究.2002,31(4):320.

[6]申冬杰.铝与人体健康[J].广东微量元素科学,2003,10(11):13-14.

[7]樊桂红.对国标2003中面制品中铝含量测定方法的改进[J].科

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[10]李述信.原子吸收光谱分析中的干扰及消除方法[M].北京:北

京大学出版社,1987:314-317.

(收稿日期:2010-07-07)

2.7 方法的检出限

根据测量得出的面制食品中铝标准系列浓度-吸光度校准曲线,并连续测量11次空白溶液的吸光度,然后计算4倍11次测量值的标准偏差,得到本分析方法的检出限为4.6 g/L,按本实验条件,面制食品中铝的最低检出浓度为0.047mg/kg。2.8 线性范围

分别取浓度为0.0、5.0ng/ml、10.0ng/ml、20.0ng/ml、30.0ng/ml、40.0ng/ml、50.0ng/ml、60ng/ml的铝标准系列,按仪器工作条件,采用自动进样器依次对各标准点进行测定,由仪器自带软件计算标准曲线的相关系数,结果表明线性范围在0~60ng/ml时相关系数为0.9997。

(上接第2785页

)

离子而避免其他杂质离子的干扰。罂粟生物碱选择的特征离子为:可待因(299、229、162、115);吗啡(285、162、215、115);

蒂巴因(311、296、242、42);罂粟碱(338、324、308、154);那可汀(220、205)[3]。(注:加横线的数字是该物质最高丰度特征离子)。3 结论

图5 0.1g罂粟壳+500ml普通火锅汤底+50ml食用油

按1.2.3处理后的生物碱色谱图

由于罂粟生物碱纯品标准难以从一般途径进行购买,市

场中不法商家在食品中加入的生物碱也是以添加罂粟壳或罂粟籽进行的。在实验中,以气质联用中SIM模式,用氯仿+乙醇(9+1)作萃取液,选取怀疑添加了罂粟壳的无油稀汤底进行样本检测,以可待因为检出指标,可灵敏地确证汤料中是否添加了罂粟类物质。

[参考文献]

[1]刘奋,戴京晶,林弈芝,等.GC/MS法测定掺入食品中罂粟壳残留

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[3]谢增瑞.串联质谱检测复杂基质中的吗啡[J].质谱学报,2004,25

(增刊):103-104.

(收稿日期:2010-08-18)

2.4 石油醚的作用

按1.2.3样品提取的过程中,样品液经酸化后,罂粟类生

物碱溶于水,形成盐类。用石油醚将不溶于水的油类和不溶于水的非极性有机物提取出来,减少杂质对罂粟生物碱离子提取的干扰。石油醚与乙醚同是非极性溶剂,在此步骤起的作用大致相同,但在很多文献上选用的乙醚,因其沸点为34.5 ,极易挥发,即使在排毒柜内操作,也极易挥出,空间污染大,而在该实验中选用的石油醚,沸点在60 ~90 ,比乙醚的挥发性大大降低,并能在不影响检测的前提下减少对工作人员的化学污染。2.5 生物碱离子的提取

采用SIM模式和分时段离子提取,可以较好地选取目标