快速检测西尼罗病毒胶体金免疫层析试纸条方法(3)

JOURNALOFINSPECTIONANDQUARANTINE检验检疫学刊Vol.20No.22010年第2期

3mm/条,干燥避光保存。2.2.8　样品处理液的制备

在5mmol/LPH8.0的PB溶液中加入1%NP40、0.25%脱脂奶粉,即为样品处理液。2.2.9　检测及结果判读

μL,在制备好的层析条的样品垫上手工加样6015min后,检测带和指控带都出现红色为阳性,只有

指控带出现红色为阴性,检测带和指控带均不显色,则为试剂失效,需换新的试纸条重测。2.2.10　对试纸条灵敏度评价

将WNVNS1蛋白免疫兔血清用样品处理液从1:10开始倍比稀释,用试纸条检测1:10、1:100、1:1000、1:10000稀释度的样品。

将ELISA1:10,1:100,1:1000稀释,A

图21

:1:1000。

3.3.2　将Focus公司的WNVIgGELISA试剂盒中的阳性血清以样品处理液1:10,1:100稀释后检测,结果见图3。并将该阳性血清1:10,1:100,1:1000稀释后用ELISA试剂盒检测,将两种方法检测的灵敏度结果进行比较

。

试剂盒检测。

2.2.11　用试纸条对ELISA试剂盒中的阴性血清进行检测,将检测结果与美国Focus公司商品化的ELISA试剂盒比较,对试纸条特异性进行评价。3　结果

3.1　最适标记胶体金PH值的确定

结果表明胶体金颜色未改变的最低pH值为7.0,因此胶体金标记WNVNS1蛋白的最适PH

为7。

3.2　最低蛋白稳定量结果

分光光度计测定结果,以OD值为纵坐标,蛋白质用量为横坐标做一曲线,见图1

。

图3　试纸条灵敏度检测2

结果显示:该试纸条检测试剂盒中阳性血清的

检测效价为1:10,ELISA试剂盒检测该阳性血清的

图1　分光光度计测定最低蛋白稳定量曲线图取曲线与横轴接近那一点的蛋白用量即为最小蛋白质稳定量,在此基础上再加20%即为稳定胶

μg/mL的NS1抗原体金蛋白质实际用量,即选择12

加入量作为实际最小蛋白标记量较为合适。3.3　试纸条灵敏度检测

3.3.1　将WNVNS1抗原免疫兔血清以样品处理

检测效价为1:100;试纸条的检测效价比ELISA试

剂盒的检测效价低一个滴度。3.4　试纸条特异性检测

将88份健康人血清和WNVIgGELISA试剂盒中的阳性和阴性血清用样品处理液1:10稀释后,用试纸条和ELISA试剂盒分别检测,结果见表2。表2结果显示:试纸条检测89份阴性血清,有9份检出阳性,特异性为89.89%,假阳性率为10.11%;用ELISA试剂盒检测89份阴性血清,结果

液1:10、1:100、1:1000稀释后检测,结果见图2

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