南方医科大学 正交试验法优化啤酒花中黄酮成分(3)

/上海，抽滤装置，恒温箱，加样枪（10μl-200μl，100μl-1000μl），标记笔，旋转蒸发器。

5、实验材料及试剂

大鼠6只（体重200～250g雌雄各半），啤酒花150g，乙醇（浓度分别为30%，45%，60%），无水乙醇，10%的Al(NO3)3溶液，5%NaNO2的溶液，4%的NaOH溶液， 3.8%枸缘酸钠，ADP，PH7.4的磷酸盐缓冲液。 5.1 试剂的配制

5．1．1配制浓度分别为30%，45%，60%的乙醇各400ml，10%Al(NO3)3溶液15ml，5%NaNO2的溶液15ml，4%的NaOH溶液120ml，3.8%枸缘酸钠10ml，PH7.4的磷酸盐缓冲液；之后将ADP溶于PH7.4的磷酸盐缓冲液，配制为2 umol/L的ADP溶液10ml。

5．1．2大鼠乙醚麻醉下，断颈取血，3.8%枸椽酸钠抗凝处理。1000r/min，离心5min，取富含血小板血浆（PRP）存于冰箱备用。

5.2 材料的处理

啤酒花样品去除茎叶后，充分粉碎。

6、实验操作步骤

6．1 提取条件优化方法

对影响啤酒花黄酮类化合物提取的4个因素（乙醇含量、 料液比、 提取时间、 提取温度）的 3 水平进行正交试验，筛选出一个最佳组合。 6．2 啤酒花总黄酮的提取流程

有机溶剂浸提:称取8.00 g样品，加入一定量乙醇溶剂，用加热回流装置提取一定时间后过滤，将滤液定容为100 mL。 6．3 总黄酮测定方法

从定容滤液中精密量取6mL，置于25mL烧杯中，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10 mL，摇匀，