南方医科大学 正交试验法优化啤酒花中黄酮成分(6)

流。其中，1、4、6号为一组，2、8、9号为一组，分别、依次用三孔电热恒温水浴锅对这两组进行冷凝回流；3、5、7号为一组，分别用三

孔电热恒温水浴锅对该组进行冷凝回流。结束后进行抽滤，取滤液备用。

6．5．2 将全部提取液加入100ml容量瓶中，用对应浓度的乙醇溶液定容到100ml，摇匀，从中精密量取6mL，置于25mL烧杯中，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10 mL，摇匀，放置15分钟，转移到25ml容量瓶中，再加相应浓度乙醇至刻度定容。

6．5．3 将上述溶液加入比色杯中，以相应浓度乙醇为空白对照，立即按照分光光度法，在510nm波长处测定其吸光度，并将结果记录入表四中

6．5．4 将提取液置于旋转蒸发装置中，蒸去溶剂即可得黄酮提取物，烘干待用。 6．6 黄酮类化合物抑制血小板凝集性质试验

6．6．1 黄酮的配制:黄酮配为1g/L，取黄酮10毫克,溶解在10毫升的乙醇中,震荡充分溶解，用双层滤纸过滤，备用。

6．6．2 取12只试管，编为6组，每组做同一只大鼠的血清实验，按下表加入试剂

血浆

黄酮溶液 900μl -

乙醇（对应浓度） ADP溶液 - 900μl

100μl 100μl

试管A（实验组） 1ml 试管B（对照组） 1ml

6．6．3 将上述试管置于恒温箱（39摄氏度）中10分钟，然后取出，放到分光光度仪中690nm处测定溶液的透光率，以此来判断血小板的凝集情况。并将结果填到表5中。

7、结果与分析

7．1 正交试验结果分析

根据表 4 的数据计算出各因素的一水平试验结果总和、二水平试验结果总和、三水平试验结果总和，再取平均值(各自被3除)。最后计算极差。极差是指这一列中最好与最坏的之差，从极差的大小就可以看出哪个因素对黄酮含量影响最大，那个影响最小。找出在何种条件下黄酮含量最高。最后作一直观分析的结论。

表4 数据记录及分析

试验号

1 乙醇含量 （ % ）

2 料液比

3 提取时间

4 提取温度 /（ ℃ ）

试验结果 A510nm

（ g : ml） （ min ）