蕙兰的无菌播种及根状茎培养技术研究(4)

（一）种子萌发和预处理

一般认为，兰属植物八成熟果实的种子的萌发率较高，即蒴果由绿色转变为黄棕色并且尚未开裂的时候，进行无菌播种效果最佳。但具体合适的萌发时期，因种而异。本试验表明，授粉后120d左右的蕙兰种子萌发率最高，可达2.7%。李哖（1992）认为，墨兰应采用授粉后150d的果实，建兰则为190d。

兰花虽然种子细小，但数目众多。对于种子难以萌发的地生兰属植物而言，通过合适的预处理方式，提高种子的萌发率，是获取充足后续实验材料的有效手段。段金玉（1982）等报道，未经处理的地生兰种子，在播种后6～9个月内，萌发率最大不超过3%，最小的不足1%。本试验结果表明，0.1mol·L-1的NaOH溶液对种子进行浸泡处理的方式，并非适用于所有的兰属地生种，尚需要探索能显著提高蕙兰种子萌发率的合适预处理方式。

（二）根状茎培养

与附生类兰花不同，大多数地生兰属植物由种子产生的原球茎并不直接分化成幼苗，而要经历一个根状茎阶段。而根状茎阶的增殖率主要受培养基类型、植物生长调节剂的浓度、组合和比例的影响（Arditti和Ernst,1993）。其中细胞分裂素、如BA、TDZ等被证实对许多兰花的植株再生最为有效（Seeni和Latha,1992;Nayak等，1997），但在本实验中，蕙兰对BA的浓度差异并不敏感，这也许是由于根状茎中内源激素的影响。此外，在培养过程中发现，蕙兰根状茎的发育并不同步，因为继代时需要对根状茎进行切割，从而导致培养体系中始终存在着发育阶段差异悬殊的分生组织、发育程度不同的根状茎和少量不同叶龄数的幼芽。将幼芽切下转入1/2MS+NAA2.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L+0.5%AC的培养基中，不久幼苗即生根，60d后苗高10厘米，有3～5条根。若不转换培养基，幼苗也可以继续生长，但叶幅狭细且较瘦弱。据Shimasaki和Uemoto（1990）的报道，NAA/BA比值低，导致寒兰的根状茎形成许多原球茎，但原球茎发育成小植株的过程缓慢，NAA/BA比值高，则使根状茎产生异常细长的幼苗。本次对蕙兰根状茎的研究也获得了类似的结果。

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