十三、十四周实验安排

实验二 紫外分光光度法测定苯甲酸钠的含量

（标准曲线法）

一、目的

1．掌握紫外分光光度计定量操作方法。

2．掌握标准曲线法定量计算方法。

二、提要

标准曲线法定量分析，即用已知量的标准物质，配制一系列浓度的标准溶液，在相同的条件下进行测定，以仪器的响应值（UV-Vis法中为吸光度A）为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线。利用此曲线或它的回归方程，可以计算样品溶液中该组分的含量。

Ai a bCi

式中a与b分别为标准曲线的截距与斜率。

苯甲酸钠的紫外吸收光谱在229nm处有最大吸收。制备系列浓度的苯甲酸钠标准溶液，以229nm为检测波长，测定其吸光度，计算回归方程；可测定苯甲酸钠样品溶液中苯甲酸钠的含量。

三、仪器与试剂

紫外分光光度计；

苯甲酸钠/0.04MHCl储备液（100μg /ml）；0.04mol/L HCl水溶液；样品溶液

三、方法

1 检测波长的选择 以0.04mol/L HCl溶液为参比溶液，于紫外－可见分光光度计上测定苯甲酸钠标准溶液的吸收光谱（200~320nm），确定苯甲酸钠含量测定的测定波长（λ 229nm）。

2苯甲酸钠标准曲线的绘制 配制浓度为2、4、6、8、10 μg/ml苯甲酸钠/0.04MHCl溶液。以0.04mol/L HCl溶液为参比溶液，测定系列浓度的苯甲酸钠/0.04M HCl溶液在229nm处的吸光度，计算其回归方程。

3 测定 以0.04mol/L HCl溶液为参比溶液，测定样品溶液的吸光度值( n=3 )，根据回归方程计算样品溶液中苯甲酸钠的含量（X，RSD%）。

四、思考题

1．制备标准曲线的目的是什么？

2．为什么要用/0.04MHCl溶液为参比溶液进行测定？

实验八 高效液相色谱法定量分析

（外标一点法）

一、目的

练习高效液相色谱仪的使用。

二、提要

外标法可分为外标一点法、外标二点法及标准曲线法。当标准曲线截距为零时，可用外标一点法定量。在药物分析中，为了减小实验条件波动对分析结果的影响，采用随行外标一点法，即每次测定都平行测定对照品与样品溶液。

三、仪器与试剂

1．高效液相色谱仪；

2．ODS柱（4.6mm×150mm，5µm）；

3．甲醇（色谱纯）；纯净水；

4．检测器：紫外检测器，检测波长254nm；色谱工作站。

5．混合样品：苯，甲苯，萘，联苯的甲醇溶液

6. 萘对照品（50μg/ml）

四、操作步骤

1．色谱条件 C18反相键合硅胶填充柱；流动相：甲醇：水（85：15）；检测波长：254nm；流速：1ml/min。

2．平衡色谱柱，分别吸取对照品溶液与供试品溶液，进样20µl，测定萘的色谱峰面积，并计算混合溶液中萘的含量。

五、思考题

1．外标一点法主要误差来源是什么？

2．紫外检测器的优缺点分别是什么？

实验九 固体样品红外透射光谱的测定

一、目的

1． 掌握固体样品的常规制样方法。

2． 了解红外光谱仪的工作原理及一般操作使用。

3． 对测定物质的红外光谱图进行解析。

二、提要

不同的样品状态(固体、液体、气体及粘稠样品)需要相应的制样方法。制样方法的选择和制样技术的好坏直接影响谱带的频率、数目和强度。

（1）液膜法：样品的沸点高于100℃可采用液膜法测定。黏稠的样品也采用液膜法。这种方法较简单，只要在两个盐片之间，滴加1~2滴未知样品，使之形成一层薄的液膜。

（2）液池法：样品的沸点低于100℃ 可采用液池法。选择不同的垫片尺寸可调节液池的厚度，对强吸收的样品用溶剂稀释后再测定。

（3）糊状法：需准确知道样品是否含－OH基团(避免KBr中水的影响)时采用糊状法。这种方法是将干燥的粉末研细，然后加入几滴悬浮剂在玛瑙研钵中研磨成均匀的糊状，涂在盐片上测定。常用的悬浮剂有石蜡油和氟化煤油。

（4）压片法：粉末样品常用压片法。将研细的粉末分散在固体介质中，并用压片装置压成透明的薄片后测定。固体分散截至一般是金属氯化物(如KBr)，使用时要将其充分研细，颗粒直径最好小于2μm (因为中红外区的波长是从2.5μm开始的)。

（5）薄膜法：对于熔点低，熔融时不发生分解、升华和其他化学变化的物质，可采用加热熔融的方法压制成薄膜后测定。

三、仪器与试剂

1． 付利叶变换红外光谱仪；

2． 压片机、模具、样品架；

3． 玛瑙研钵、钢铲、镊子、红外灯；

4． KBr(光谱纯或分析纯)、苯甲酸。

四、实验内容与步骤

取2~3mg苯甲酸及对氨基酚分别与200~300mg干燥的KBr粉末在玛瑙研钵中混匀，充分研磨后，用不锈钢铲约取70~90mg 压片。

五、思考题

1．用压片法制样时，研磨时不在红外灯下操作，对测定的谱图会有什么影响?

实验十 气相色谱法测定乙酸乙酯中苯的含量

（内标两点法）

一、目的

1．掌握气相色谱仪的使用。

2．学会内标法定量分析方法。

二、提要

内标法是选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，以待测组分和对照物质的响应信号对比，测定待测组分的含量。

在药物分析和中药制剂分析中，校正因子多是未知的，可利用内标对比法进行含量测定。内标对比法是在标准溶液和样品溶液中加入内标物，并使内标物在标准溶液和样品溶液中的浓度相同；将两种溶液分别以相同体积进样，由下式计算出样品溶液中待测组分的含量：

(Ci%)样品 (AiAs)样品(AiAs)标准 (Ci%)标准 （5-1）

本实验是以甲苯为内标物，测定样品中苯的含量。

三、仪器与试剂

（1）气相色谱仪（FID检测器）；

（2）微量注射器；

（3）对照品溶液：苯/乙腈溶液（80mg/ml）; 内标溶液：甲苯/乙腈溶液（60mg/ml）

（4）样品溶液（含有苯的乙酸乙酯）

四、操作步骤

1． 色谱条件

色谱柱：甲基苯基柱(25m×0.32mm×0.52μm)；温度：柱温70℃，检测室250℃，气化室250℃；载气流量：1.2ml/min（N2）；分流比1:30，进样量0.4µl。

2． 溶液的制备

精密量取苯对照品溶液0.1 ml和甲苯内标溶液0.2 ml，置5ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液1；精密量取苯对照品溶液0.3 ml和甲苯内标溶液0.2 ml，置5ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液2。

精密量取样品溶液0.2 ml和甲苯内标溶液0.2 ml，置5ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

3. 测定 分别按照上述色谱条件对标准溶液和供试品溶液进样测定，根据色谱峰面积、采用内标两点法计算样品中苯的含量。

五、思考题

1． 内标法的优点和缺点是什么？

2． 如果自行设计实验，如何确定样品的稀释倍数？