Ficoll密度梯度离心法分离猪外周血单个核细胞条

目的 探讨猪外周血单个核细胞(PBMC)最佳分离条件,为寄生虫免疫学研究提供有效的方法。方法使用猪淋巴细胞分离液,在不同离心转速和时间条件下分离猪PBMC,观察所得云雾状PBMC层的厚度,计算细胞得率及细胞活力,以确定猪淋巴细胞分离液分离猪PBMC的最佳实验条件。同时采用文献报道的人淋巴细胞分离液分离猪PBMC的分离条件(1500r／min,30min)分离猪PBMC,比较两者分离PBMC

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中国血吸虫病防治杂志 2 0 0 7年第 1第 3 9卷期 C i JS hsoC nrl 0 7Vo.9 N . hn c i o t 0, 11, o 3 t o2

[章编号] 1 0—6 1 20 ) 30 9— 4文 0 56 6 (0 7 0—1 20

论著

Fcl密度梯度离心法分离猪外周血 iol单个核细胞条件的探讨张素华，林丹丹，张关娟，陈雪松，徐进梅，单昊，吴观陵，海玮吴[要]目的摘的方法。方法

探讨猪外周血单个核细胞 (B P MC)佳分离条件，寄生虫免疫学研究提供有效最为使用猪淋巴细胞分离液，不同离心转速和时间条件下分离猪 P MC,察所得云在 B观

雾状 P MC层的厚度，算细胞得率及细胞活力， B计以确定猪淋巴细胞分离液分离猪 P MC的最佳实 B验条件。同时采用文献报道的人淋巴细胞分离液分离猪 P MC的分离条件 ( 0/ n,O n分 B 150rmi 3 ) mi

离猪 P M C, B比较两者分离 P MC效果。结果 B~

使用猪淋巴细胞分离液 (度 1 1 0n/L )在 2密 . 1 g, O

2 5℃室温下以 15 0r 0/mi(径 1 m)心 3 n接着低温 ( n半 5c离 Omi, 4℃ ) 0/mi心 1 n 15 0r n离 0mi,

洗涤 2次，样获得的猪 P MC效果最好。这 B同样条件下，用人的淋巴细胞分离液分离猪 P M C,仅 B不所得细胞沉淀中混杂细胞如红细胞及其他细胞碎片较多，而且 P MC细胞得率及活力也不好。论 B结本实验提出了获得大量有活力的猪 P MC的方法和条件。 B

[键词]猪；周血单个核细胞 (B ) i l密度梯度离心法；寄生虫学；免疫学关 外 P MC;Fc l o[图分类号] R5中 3[献标识码] A文

An e p o a i n o h o ii ns f r i o a i e i he a l o x l r to f t e c nd to o s l tng p r p r lb o d mo nu l a e l r m g S b o d u i g Fi o l d ns t r d - no c e r c ls f o pi’ l o s n c l e iy g a i e e r f g tO

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- src][ btat O jcie T x lr h etcn io oaigtep r h rl lo n n c a A bet oepoeteb s o d ini lt h ei ea bo dmo o ul r v t s n p ec l P M C) r m i’ b o d i r e o p o i e a fe t e m e h d f r p r st mmu o o y el s( B fo p g S l o n o d r t r vd n e f c i t o o a a i i v e n lg . M e h d PB Cs fo p g S b o d we e io a e t i’ l mp o y e s p r t n me i m ( M ) to s M r m i’ l o r lt d wi p g S y s h h c t e a a i d u o LSa i e e t r t to p e s f r d fe e t p r d,t e t ik e s o l u l e P t d f r n o a i n s e d o i r n e i s h h c n s fc o d i BM C l y r wa b f f o k a e s o— s r e n h il fo t i e BM C a d t e ra tvt r a u a e .S mu t n o sy,P e v d a d t e y ed o b an d P n h i c iiy we e c c l t d i la e u l BM Cs f o pg S b o d we e io a e t u a S n e h o d t n e o t d b r v o s p p r r m i’ l o r s l t d wi h m n L M u d rt e c n ii s r p re y p

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( 0 /mi 3 n)a dt eioaigef in ywa o a e t h t f i’ M.Re ut 1 5 0r n,Omi n h lt fi e c sc mp rd wi ta g SLS s n c h op s ls Th e trs l wa o t i’ LS ( e st 1 1 0n/ )b is e tiu igt e smpe t eb s e ut sg twi pgS M d n iy: . 1 g L h yfrtc n rfgn h a lsa 1 5 0r 0/mi (a is 1 m)fr3 n tsa o m e ea u e 2一2 n r du: 5c o Omiue tr o tmp rt r ( O 5℃) olwe ywa hn ,flo db s ig t e cl p l t wi t Ha kSme im t1 5 0 r mi o 0 miu e t4 h el el st c wi D— n’ e e h du a 0 / n fr 1 n tsa C.P BMC t a h twe e io a e t u n L r s l t d wi h ma SM r m i’ b o d u d r t e s me c n ii n we e i u e a d mi e h fo p g S l o n e h a o d t r mp r n x d o wi t e e l u h a e e l a d o h r c l d b i,a d b t h il f o t i e BM C a d t o h r c ls s c s r d c l n t e e l e rs n o h t e y e d o b an d P h s n t e ra tvt r o h i c i i we e l w. C n l s o Th s s u y o f r d a me h d t e a g u n iy o c i e y o cu in i t d fe e t o o g t a l r e q a t fa t t vPBM C.

[ e od] Pg eih rl lo n n cer e P MC) Fc ld n i rde t e ti g— - yw rs K i P r ea bodmo o ula l B p c l(; i l e s yga i nr u a o t nc fto in;Pa a iol y;I m uno o r st og m l gy

[金项目]国家自然科学基金重点项目(0 3 6 0基 340

0)[作者单位]南京医科大学病原生物学系、苏省现代病原生物学重点实验室 (江南京 2 0 2 ) 1 0 9[作者简介]张素华 ( 9 1 )女，士研究生。研究方向：血吸虫感染的分子免疫学 18一，硕*通讯作者电话： 2—6 6 7 3 E mal h ie@ nmu d .c 0 58 8 2 9— i: aw i j .e u n