结核杆菌TBPCR荧光扩增检测说明书(4)

置室温解冻后13000rpm离心5min。向所设定的n个

反应管中分别加入步骤1中处理过的样本、阴性对照、

强阳性对照和临界阳性对照上清液各2ul，盖紧PCR

反应管管盖

【使用Roche毛，转移至检测区。将反应管排好置于荧光PCR检测仪细管时，将毛细上，记录样本摆放顺序。

管连同Roche专 4．PCR扩增（检测区）

用金属反应管套 4.1. 循环条件设置使用PE Gene Amp

放在离心机中，7700/5700/7000荧光PCR检测仪时循环程序设置如于2000rpm离心下： 37℃：5min；94℃：1min； 95℃：5sec，60℃：

10sec】 30sec，40个循环。反应体系为40ul。使用Bio-Rad

iCycler荧光PCR检测仪时循环程序设置如下： 37℃：

5min；94℃：1min； 95℃：5sec，60℃：30sec，42

个循环。反应体系为40ul。使用Roche LightCycler荧

光PCR检测仪时循环程序设置如下: 37℃：3min；

93℃：1min； 93℃：5sec，60℃：40sec，40个循环。

反应体系为20ul。循环程序设置均应在扩增开始前样

本设定时，将待检样本和对照品设定为“UNKN”。

4.2. 仪器检测通道选择 PE7700和iCycler属多荧光

检测仪，荧光信号收集时设定为Fam荧光素。荧光信

号收集设在60℃。 Roche LightCycler荧光PCR检测