ELISA法检测HIV抗体弱阳性外部对照室内质控血清的

ELISA法检测HIV抗体弱阳性外部对照室内质控血清的制备和保存

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现代检验医学杂志第２４卷第５期２００９年９月ＪＭｏｄＬａｂＭｅｄ，Ｖ０１．２４，Ｎｏ．５。Ｓｅｐｔｅ．２００９

表明，ＨＣＶｃｏｒｅ区ＤＮＡ疫苗的免疫反应与机体的保护性免疫密切相关。所以我们认为，ＨＣＶ核心蛋白基因可以作为ＨＣＶ预防和治疗性疫苗研制的首选靶基因进行研究。参考文献：

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收稿日期：２００９－０７—２２修回日期：２００９—０８一１９

ＬａｇｇｉｎｇＬＭ，ＭｅｙｅｒＫ，ＨｏｆｔＤ，ｅｔａ１．Ｉｍｍｕｎｅ

ｓｐｏｎｓｅ

ｔＯ

ｐｌａｓｍｉｄＤＮＡｅｎｃｏｄｉｎｇ

ｔｈｅｈｅｐａｔｉｔｉｓ

Ｃ

ＥＬＩＳＡ法检测ＨＩＶ抗体弱阳性外部对照室内质控血清的制备和保存

周炳烨（郑州市第三人民医院检验科，郑州４５００００）

摘

要：目的

制备ＥＬＩＳＡ法检测ＨＩＶ抗体室内质控血清并探讨其保存方式。方法

对ＨＩＶ抗体阳性混合血清进行倍比

两种保存方式的

稀释，选Ｓ／ＣＯ值２～３之间的稀释度制备室内质控，分装后分别保存于４℃和一２０℃冰葙中备用。结果

质控血清连续测定３ｍｏ并绘制质控图，一２０℃冻存质控品结果稳定，４℃保存质控品，第一月稳定，第二、三月出现明显失控。结论

自制ＨＩＶ抗体弱阳性血清作为室内质控是可行的。

关键词：Ｅｌ。ＩＳＡ；ＨＩＶ；室内质控；外部对照；倍比稀释

中图分类号：Ｒ４４６

文献标志码：Ａ

文章编号：１６７１—７４１４（２００９）０５—００８—０２

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉＳＳＩＩ．１６７１—７４１４．２００９．０５．００３

１．２．２用ＨＩＶ抗体阴性健康人血清对少量ＨＩＶ抗体阳

性混合血清进行倍比稀释并对不同稀释度血清进行双份平

应用第三代ＥＬＩＳＡ试剂盒对ＨＩＶ抗体进行检测是初筛及确证实验室的常用方法，该法以基因重组和多肽抗原包被和标记，有良好的特异度和敏感度。实际工作中，为保证检测质量，实现试剂的高特异度和高敏感度，提高检测结果的重复性，消除和减少随机误差，必须在检测过程中加入适当的外部对照室内质控品。我院ＨＩＶ初筛实验室根据经验和实际需要进行自制，取得了满意的效果。１材料与方法１．１材料

行检测，选取Ｓ／Ｃ０值为２～３的稀释度为最适稀释度。

１．２．３

根据最适稀释度和年需求量进行配制，分装和保

存。其中一２０６Ｃ保存分装量为３～５ｄ用量，４℃保存分装量

为一个月使用量。

１．２．４严格按照操作规程对制备好的质控血清进行２０次重复测定，求其均值（＿），标准差（ｓ）和变异系数（ＣｑＺ％），作

为绘制质控图的初始数据。

１．２．５将分装好的室内质控品分别保存于一２０℃和４℃环境中，每天随日常工作对两种质控品分别做双份测定，求均值绘制质控图并根据实际情况对数据进行修正。２结果①对不同稀释度血清进行检测后发现其Ｓ值有

良好的浓度梯度，在１：４０００

１：８

１．１．１试剂盒：上海科华人类免疫缺陷病毒抗体（１＋２）诊断试剂盒（双抗原夹心酶联免疫法），上海科华生物工程股

份有限公司，批号：２００８０６２３，有效期：２００９．０６．２２。

１．１．２仪器：芬兰雷勃ＷｅｌｌｓｃａｎＫ３酶标仪，郑州安图生物工程公司ａｎｔｈｏｓｆｌｕｉｄｏ洗板机．

１．２１．２．１

’

０００稀释度范围内，Ｓ／

方法ＣＯ值在１．７３～３．２６范围内，根据情况选定１：７０００作为最适稀释度。②稀释完成后，对其进行２０次重复测定，其

ｓ／ｃＯ值为２．１６～２．９２，均值（ｊ士ｓ）为２．５６３土０．２０６，批内

收集无污染、溶血、黄疸和脂血的新鲜ＨＩＶ抗体阳

性血清１０份和ＨＩＶ抗体阴性健康人血清足量，５６℃灭活

３０ｍｉｎ，３０００

ｒ／ｒａｉｎ离心１５ｍｉｎ，去除纤维蛋白沉淀物后

ＣＶ（％）为８．０３，符合质控需要．⑨对两种保存条件下的室内质控品进行三个月的连续测定并绘制Ｌｅｖｅｙ—Ｊｅｎｎｉｎｇｓ质

备用。

作者简介：肭ＪＪ：ｇ＃（１９７９－－）．男，检验师，专业方向：免疫学技术ｔＴｅｌ：１５８３８２８５８０８，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｕｂｉｎｇｙｅ００１（鱼１６３．ｃｏｍ．