银杏叶有效成分的提取工艺(2)

银杏叶有效成分的提取工艺

至干,置干燥箱中干燥3h(105 ),置干燥器冷却,称

重,计算。结果见表2。

2 2 2 总黄酮醇苷的含量的测定 按2005版!中国药典 方法测定。

2 2 2 1 色谱条件 分析柱:SinoChromODS-BP柱(4 6mm#200mm,5 m);流动相:甲醇-0 4%磷酸溶

-1

液(55 45);检测波长:360nm;流速:1 0mL min;柱温:35 。

2 2 2 2 对照品溶液的配制 分别取槲皮素、山奈素和异鼠李素对照品,置五氧化二磷减压干燥器中干燥过夜,精密称定,加甲醇制成浓度分别为31 g -1-1-1mL、28 g mL、19 g mL的混合对照品溶液。2 2 2 3 供试品溶液的的制备 取提取液,合并,过滤,浓缩,定容至1000mL,精密量取50mL(约相当于5g生药),浓缩至粘稠状(60 ),加甲醇20mL超声溶解,移入250mL烧瓶中,加25%的盐酸5mL,水浴回流30min,放冷,精密转移至50mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀滤过即得。

2 2 2 4 测定法 分别取对照品溶液和供试品溶液过滤后进样,进样体积10 L,测定,分别计算槲皮素、山奈素、异鼠李素的含量,按%总黄酮醇苷的含量=(槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量)#2 51&计算总黄酮醇苷的含量。结果见表2。

2 2 3 萜类内酯的含量的测定 按2005版!中国药典 方法测定。

2 2 3 1 色谱条件 分析柱:SinoChromODS-BP柱(4 6mm#200mm,5 m);流动相:正丙醇-四氢呋喃

-1

-水(1 15 84);流速:1 0mL min。

2 2 3 2 对照品溶液的配制 精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压真空干燥24h的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C对照品适量,加50%甲醇制成每1mL含1 05mg、0 95mg、0 96mg、0 52mg的混合对照品溶液,摇匀即得。

2 2 2 3 供试品溶液的制备 按2005版!中国药典 方法测定。取银杏叶的乙醇提取液,合并,过滤,浓缩,定容至1000mL,精密量取15mL(约相当于1 5g生药),浓缩至粘稠状(60 ),加甲醇50mL,称定重量,超声处理20min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液20mL,回收甲醇,残渣加水,置水浴中温热使溶解,置分液漏斗中,加2%盐酸2滴,摇匀,用乙酸乙酯萃取4次(15mL、10mL、10mL、10mL),合并提取液,用5%醋酸钠溶液20mL洗涤,醋酸钠溶液,用乙酸乙酯10mL洗涤。合并乙酸乙酯提取液及洗涤液,再用水洗各2次,每次20mL,合并水洗液,用乙酸乙酯10mL洗涤,合并乙酸乙酯液,回收至干,残渣用甲醇溶解并移至5mL量瓶中,加甲醇至刻度、摇匀,即得。

2 2 2 4 测定法 分别取对照品溶液和供试品溶液过滤后进样,对照品溶液进样5 L、20 L,供试品溶液进样20 L,测定,用外标两点法对数方程分别计算白

果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的含量,按%萜类内酯的含量=白果内酯含量+银杏内酯A含量+银杏内酯B含量+银杏内酯C含量&计算萜类内酯的含量。结果见表2。

表2 正交试验结果

试验号

123456789k1k2k3R

A111222333

因素BC123123123

123231312

干膏收

总黄酮醇

萜类内酯含量(%)0 210 340 290 380 310 360 420 470 511.8402.0932.3930.553

综合评分

1 511 932 282 662 032 152 202 241 98

D率(%)苷含量(%)16 170 4823312231

7 639 1311 017 698 528 539 017 522.1232.0672.1370.070

0 660 850 760 930 750 810 620 681.9672.1902.1700.223

1.9072.2802.1400.373

2 3 正交试验结果 正交试验结果见表2,方差分析

结果见表3。

表3 方差分析

方差来源

ABCD

SS0.2130.0080.0920.460

自由度2222

F26 6251 00011 50057 500

﹥0 05﹤0 05P﹤0 05

F(0 05)(2,2)=19,F(0 01)(2,2)=99。

2 4 单因素条件试验 分别对表2中的干膏收率及总黄酮醇苷、萜类内酯含量直观分析,结果见表4。

表4 正交试验直观分析结果

指标

k1

k2k3R

总黄酮醇苷的含量

k1k2k3Rk1

萜类内酯的含量

k2k3R

A7 6439 0738 3531 4300 6630 8130 7030 1500 2800 3500 4670 187

B8 5708 1108 3900 4600 6830 7370 7600 0770 3370 3730 3870 050

C7 9008 7208 4500 8200 6170 7000 8630 2460 3470 4100 3400 070

D7 1278 2278 7172 5900 6970 7400 7430 0460 3430 3730 3800 037

干膏收率

2 4 1 干膏收率 分别以醇浓度(A)、溶媒用量(B)、提取温度(C)、提取时间(D)为横坐标,以干膏收率(k1、k2、k3)为纵坐标作图,结果见图1。

2 4 2 总黄酮醇苷含量 分别以提取浓度(A)、溶媒用量(B)、提取温度(C)、提取时间(D)为横坐标,总黄酮醇苷含量(k1、k2、k3)为纵坐标作图,结果见图2。2 4 3 萜类内酯含量 分别以提取浓度(A)、溶媒用量(B)、提取温度(C)、提取时间(D)为横坐标,以萜类内酯含量(k1、k2、k3)为纵坐标作图,结果见图3。