微生物学第四章 2015

微生物学

微生物学 之 微生物的生长

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第 四 章 微 生 物 的 生 长

第一节

微生物的分离和纯培养第二节 微生物的生长繁殖

第三节微生物生长的环境因素

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第 四 章 微 生 物 的 生 长

微生物的分离和纯培养一、无菌技术

二、获得纯培养的方法 用固体培养基分离纯培养

用液体培养基分离纯培养单细胞(单孢子)分离

选择培养分离二元培养物

三、微生物的保藏技术

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无菌技术

在微生物研究及应用中，不仅需要 通过分离纯化技术从混杂天然微生 物群中分离出特定微生物，且还必 须随时注意保持微生物纯培养物的 “纯洁”,防止其他微生物的混入。

分离、转接及培养纯培养物时防止 被其他微生物污染的技术被称为无 菌技术，它是保证微生物学研究正 常进行的关键。

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第 四 章 微 生 物 的 生 长

微生物培养常用器具及灭菌 试管、玻璃烧瓶、平皿等是最为 常用的培养微生物的器具，在使 用前必须先行灭菌，使容器中不 含任何生物。

培养微生物的营养物质[称为培养 基(culture medium)]可以加到器皿 中后一起灭菌，也可在单独灭菌 后加到无菌的器具中。

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最常用的灭菌方法是高压蒸汽 灭菌，它可杀灭所有生物，包 括最耐热的某些微生物的休眠 体，同时可以基本保持培养基 的营养成分不被破坏。

有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。

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第 四 章 微 生 物 的 生 长

为防止杂菌，特别是空气中杂菌 污染，试管及玻璃烧瓶都需采用 适宜塞子塞口，通常采用棉花塞， 也可采用各种金属、塑料及硅胶 帽，它们只可让空气通过，而空 气中其他微生物不能通过。 平皿是由正反两平面板互扣而成， 这种器具是专为防止空气中微生 物污染而设计。

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第 四 章 微 生 物 的 生 长

接种操作 用接种环或接种针分离微生物，或在 无菌条件下把微生物由一个培养器皿 转接到另一个培养容器进行培养，是 微生物学研究中最常用的基本操作。 因打开器皿就可能引起器皿内部被环 境中的其他微生物污染，因此微生物 实验的所有操作均应在无菌条件下进 行：在火焰附近进行熟练无菌操作， 或在无菌箱或操作室内无菌的环境下 进行操作。

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纯培养：微生物学把从一个细胞或同一个细胞群繁殖得到的子代，称纯

培养或纯种。纯培养的类型： 菌种纯(菌落纯):是分离菌落而 得到的； 菌株纯(细胞纯):是分离单个细 胞得到的。

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用固体培养基分离纯培养 稀释倒平板法

涂布平板法 平板划线

分离法 稀释摇管法

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用固体培养基分离纯培养

不同微生物在特定培养基上形成的 菌落或菌苔一般都具稳定特征，可 成为对该微生物进行分类、鉴定的 重要依据。大多数细菌、酵母菌， 以及许多真菌和单细胞藻类能在固 体培养基上形成孤立菌落，采用适 宜的平板分离法很易得到纯培养。

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所谓(培养)平板，是指熔化

的固体培养基倒入无菌平皿， 冷却凝固后，盛有固体培养基 的平皿。 固体培养方法可将单个微生物

分离和固定在固体培养基表面

或里面。

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固体培养基，可使每个孤立活

微生物体生长、繁殖形成菌落， 形成的菌落便于移植。 最常用的分离、培养微生物的

固体培养基是琼脂固体培养基 平板。Koch建立的平板分离微 生物纯培养的技术简便易行， 100多年来一直是各种菌种分离 的最常用手段。

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稀释倒平板法待分离材料用无菌水作一系列稀释，取 不同稀释液少许，与熔化且冷却至50℃ 左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入

灭过菌培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌平板，保温培养一定时间，可 能出现在平板表面的单个菌落，该菌落 可能是由一个菌体繁殖形成。随后挑取 该单个菌落，或重复以上操作数次，便

可得到纯培养。

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涂布平板法

在微生物学研究中更常用的纯种分 离方法是涂布平板法。其做法是先 将已熔化的培养基倒人无菌平皿， 制成无菌平板，冷却凝固后，将一 定量的某一稀释度的样品悬液滴加 在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将 菌液均匀分散至整个平板表面，经 培养后挑取单个菌落。

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Pour plate

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Pour plate

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平板划线分离法

用接种环以无菌操作沾取少许待 分离的材料，在无菌平板表面进行 平行划线、扇形划线或其他形式连 续划线，微生物细胞数量将随着划 线次数增加而减少，并逐步分散开 来，如果划线适宜，微生物能一一 分散，经培养后，可在平板表面得 到单菌落。

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