实验四--食品中大肠菌群的测定

实验四 食品中大肠菌群的测定

一、实验目的 掌握大肠菌群的原理及其检验方法，以判 别食品的卫生质量 了解MPN测定法在食品卫生检验中的意义

二、实验原理 大肠菌群是指一群在一定培养条件下可发酵 乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴

性无芽孢杆菌。 该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指

标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。

最近似数测定法(MPN)是指对未知样品做连

续的10倍稀释，选择3个连续的10倍稀释液，每种稀释液接种3管装有培养基的试管中培养，根

据LST初发酵试验以及BGLB发酵证实实验，证实大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告 每g(mL)样品中大肠菌群的最可能数。 食品中大肠菌群数以每g(mL)样品中大肠菌群 的最可能数来表示，即为大肠菌群MPN值。

三、实验器材(一)培养基 月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤(LST)培养基

煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)培养基(二)实验材料 市售饮料 (三)其他 三角瓶，试管，培养皿，移液管

(四)仪器超净工作台，电子天平，高压蒸汽灭菌锅

四、实验准备(一)配制培养基和试剂(以中央台为单位)

1、配制生理盐水：1000mLNaCl 8.5g 水 1000mL

分装： 3个三角瓶(含玻珠)中，225mL/个

9支试管，3支/组，9mL/支

灭菌：

121~126℃灭菌20min

2、月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤(LST)培养基：300mL 分装到27个已装有杜氏小管试管中，10mL/个 包扎(3支一捆),112~115℃灭菌30min

胰蛋白胨

6g

NaCl

1.5g

乳糖KH2PO4 水

1.5g0.825g 300mL

K2HPO4十二烷基硫酸钠 pH 6.8

0.825g0.03g

3、煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)培养基：150mL 分装到12个已装有杜氏小管试管中，10mL/个 包扎，112~115℃灭菌30min

蛋白胨 牛胆粉溶液 水

1.5g 30mL 150mL

乳糖 0.1%煌绿水溶液 pH 7.2

1.5g 2mL

牛胆粉溶液制法：将3g牛胆粉溶于30mL水中，调pH至7.0~7.5 BGLB制法：先将蛋白胨、乳糖溶于约100ml水中，加入牛胆

粉溶液30mL,调节pH,再加入0.1%煌绿水溶液，最后用水补

足到150ml,用纱布过滤后，再分装到试管中。

(二)其它器具(每个组准备)移液管 10mL 1mL 1支/组 10支/组

五、实验步骤1、样品处理：

以无菌操作，先用酒精棉球擦拭样品表面，用无菌剪刀将包装剪破，量取检样25mL放 入225mL灭菌生理盐水当中，充分振荡，混 合均匀，制成10-1稀释度样品 2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4

3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液， 用无菌移液管分别吸取1mL到LST发酵液试管 中，每个稀释度做3个平行(共9管)。 4、37℃培养48h 5、观察LST管中小倒管里是否有气泡。

如有气 泡，则继续按照下述要求实验；如无气泡，则

是大肠阴性管(-)

6、如LST小倒管中有气泡，则按照无菌操作要

求，用接种环将产气LST发酵液接种到BGLB试管中，一只产气LST发酵液对应一只BGLB

试管。7、37℃培养48h 8、观察BGLB小倒管中是否有气泡，如有气泡， 则记为大肠阳性管(+);如无气泡，则记为 大肠阴性管(-)。

大肠菌群计数检验流程

LST产气(+)

LST不产气(-)

小导管里无气泡

0

将产气的试管内 样品接种到 BGLB肉汤

9、根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表，报 告样品中大肠菌群MPN值。 阳性管数 0.10 0 0.01 0 0.001 0 95%可信限

MPN<3.0

下限 -

上限 9.5

01 3

00 3

10 3

3.03.6 >1100

0.150.17 420

9.618 -

五、实验结果与分析阳性管数 0.001

0.01

0.0001

LST发酵管 BGLB证实管 经查MPN表，样品中大肠菌群数为 分析 MPN/g(mL)

六、思考题1、MPN是什么意思？MPN法的定义是什么？ 2、大肠菌群的概念是什么?它与E.coli是什么关系？

3、大肠菌群的食品卫生学意义是什么？4、我国食品微生物检验指标有哪些？