白芍总甙对大鼠酒精性肝损伤保护作用的实验研

第 l卷第 1 3期 21 00年 3月

湖北职业技术学院学报J URNAL OF HU IP Y EC O BE OL T HNI NS I U E CI TT T

NO. 1 VOL. 3 1 MAR. 01 2 0

[文章编号]17 _87 (O O O l5 5 6 1 l8 2 1 ) 1 O—0

白芍总甙对大鼠酒精性肝损伤保护作用的实验研究李莲(湖北职业技术学院医学院，北孝感 420 )湖 30 0

[摘要]目的：探讨白芍总甙对实验性大鼠酒精性肝损伤的保护作用及其作用机制。方法：D大鼠随 s机分为 3组：型组 (组 )生理盐水对照组 (组 )白芍总甙处理组 (模 M、 N、 B组 )每组 l, O只。M组大鼠予5 6白酒连续灌胃 4周制造酒精性肝损伤模型； B组在白酒灌胃基础上给予白芍总甙 0 4/0 g体重灌 .mg10胃； N组予生理盐水灌胃。第 4周末处死大鼠后检测血清 A、 S一G、O MD水平， I A T、 T S D、 A光镜下观察

肝组织细胞形态学改变，用免疫组化方法测定肝细胞核中 N F—K B的表达。结果：模型组大鼠血清 A T L、 A T一G、 A水平明显升高； S、 T MD白芍总甙处理组大鼠血清 AL、 S 一G、 A轻度升高，明显低 T A T、 T MD但于模型组，生理盐水对照组相比无显著性差异。模型组大鼠血清 S D水平明显降低，与 O白芍总甙处理组与生理盐水对照组血清 S D水平明显高于模型组。模型组肝细胞脂肪变性、死、 O坏炎性细胞浸润等改变均较白芍总甙处理组及对照组明显。白芍总甙处理组 N F—K的表达低于模型组。结论： B白芍能改善肝

功能，实验性大鼠酒精性肝损伤具有保护作用，对其机制可能与降低脂质过氧化水平，高抗氧化酶活性，提抑制 N F—K B的活化有关。

[关键词]白芍总甙；酒精性肝损伤；脂质过氧化[中图分类号] 5 5 R 7[文献标识码] A

0前言

病率呈逐年上升的趋势，精已成为继病毒性肝炎酒

酒精性肝病 (looi le i ae A D)因长后导致肝损害的第二大病因_, a hl vr s s, L是 c ci d e 2实验研究与临床流]

期大量饮酒引起的中毒性肝脏疾病，包括轻症 A D行病学证明，酒对肝炎病毒

感染过程有促进作 L饮( i loocle jr, I、 ml a hl vrnuyMA )酒精性脂肪肝 (J用。酒精中毒者免疫功能降低， d c i i i a— 对感染的抵抗力降

ch i f t le, F )酒精性肝炎 (l hl ea低。酒精性肝病已日益成为危害国人健康和导致医 olc ay i rA L、 o t v a oochp- c iti, H)酒精性肝纤维化 ( ch l e a c f r—疗费用增加的重要因素。因此，找一种有效的预 is A、 t l a o oi h pt bo c ii寻

s,H、精性肝硬化 ( chl ihs, C)防和治疗酒精性肝病的方法对促进国人健康，轻 i A F)酒 s l a ooccr oi A 5 i r s减种类型。嗜酒者中， 2 3可发展为酒精性肝病。社会经济负担具有重要意义。约/ 据统计，界上有 10世 50万— 20 00万人酗酒，中其关于酒精性肝病的发病机制，目前尚未完全阐

1%—2%的人有不同程度的酒精性肝病。A D是明，普遍认为脂质过氧化损伤以及免疫损伤等在 0 0 L但西方国家导致肝硬化的最主要原因…,在我国，着 A D的发病过程中起主要作用。4有鉴于此，氧化随 L[ 抗

人们生活水平的提高，酒精消费量的增多，L的发疗法成为近 3 AD 0年来酒精性肝病治疗的研究重点，但

[收稿日期】0 0— 3— 4 2 1 0 0[作者简介】李莲 ( 92一)女， 18,湖北孝感人，医学硕士，湖北职业技术学院教师、医师，主要研究肝脏疾病。

1 05

李莲：白芍总甙对大鼠酒精性肝损伤保护作用的实验研究至今还未能找到有效的防治药物。 电泳仪和垂直电泳槽冰箱德国西门子美国 Bo a司 i—R d公

白芍总甙 ( t l oi s f aoi T P是从 ta g cs e o pen,G ) ol u d a( aoioi)芍药内酯甙 (lio n、 penfr、 l n a ff )羟基芍药甙 bli

白芍干燥根部提取的有效成分』主要含芍药甙 115动物模型制作及分组， ..

大鼠随机分为 3组，每组 1 0只，分别为酒精性

( yrxl ao ioi )苯甲酰芍药甙 ( e zy—肝损伤模型组 (组

)白芍总甙处理组 ( h doy—p en r、 l f n b nol M, B组 )生，

penfr ) aoioi等化合物。有关药理及 l l n临床研究发现，理盐水对照组 ( N组 )。造模方法参考有关文献[ 1 1 T P具有抗炎、 G免疫调节、氧化、痛等作用，抗镇临床—

1]采用白酒灌胃法， 2,以红星二锅头 5。 6白酒每日

常用于治疗类风湿性关节炎以及防治老年病 -]早晨灌胃 1次， 7。 每次 15 l10 .m/0 g体重， 4周，共制造

白芍在中国历代医家运用的处方中就具有“血敛酒精性肝损伤模型；养白芍总甙处理组在白酒灌胃基阴，柔肝止痛，平抑肝阳”的功效]现代实验研究显础上给予白芍总甙 4 mslO, 0/O g体重灌胃，日 2次；每 示，白芍总甙对四氯化碳 ( C4诱导的小鼠化学性对照组只予生理盐水灌胃。其余条件相同。于 4 C 1)周

肝损伤及人血清白蛋白诱导的免疫性肝纤维化均具后断颈法处死大鼠，经下腔静脉取血，标本离心，分有保护作用。。。目前关于白芍对酒精性肝损伤的装血清待测肝功能；取肝左叶小块肝组织存放于一保护作用的研究尚未见报道。本实验在建立大鼠酒 8。 0冰箱。.精性肝损伤的模型基础上，白芍总甙进行给药，以观 1 2方法

察模型组和白芍处理组大鼠在肝脏病理学、清学 12 1检测大鼠血清 A T A T -—G血 .. L、S、 y T水平

采用

及免疫组化等方面的改变，从而证明白芍对酒精性速率法以全自动生化分析仪测定。

肝损伤的保护作用，并探讨其作用机制。1材料和方法1 1实验材料 .

122检测大鼠血清 S D、 D .. O M A含量大鼠血清 S D含量检测采用黄嘌呤氧化酶法， O M A的检测采用硫代巴比妥酚法( B )具体步骤 D TA,

111实验动物 ..112实验药物 ..

S大鼠 3 D 0只，性，质量按试剂盒说明书进行操作。雄体123大鼠肝组织病理形态学检查 ..取肝左叶组织，0甲醛固定，蜡包埋，p 1%石 5, m

10— 5克， 5 2 0由同济医学院动物实验中心提供。

白芍总甙 ( G )朗生医药公司 T P 钠稀释

切片，常规 H E染色，光学显微镜下观察肝

组织病理124免疫组化 s .. P法检测肝组织 N F—K 6 B p5蛋

临用前用双蒸水溶解，再加 0 5 .%羧甲基纤维素形态学变化。

白酒

北京产红星二锅头 5。 6购于市场南

白的表达

1 13主要试剂 ..

①切片置烤箱中 6℃, rn 0 1a。 5i②切片脱蜡至水，.%过氧化氢封闭内源性 15过氧化物酶，.m lL B 0 1 o P S洗 5 i 3次。/ mn×

丙二醛 ( a nidhd M A)剂盒 m l da eye, D试 o l京建成生物工程研究所

超氧化物歧化酶 (ue ied m t eS D) spmxd i ua,O试 s s剂盒南京建成生物工程研究所免疫组化试剂盒 ( P法 )北京中山生物技术 s有限公司

③ 00m l . 1 o L柠檬酸钠缓冲液微波修复，/封闭非特异性过氧化物酶。

④N F—K 6 Bp5抗体 1 10:稀释，￣孵育 l。 0 3C 7 h

⑤生物素化的二抗 3℃孵育 3 mn 7 0 i。美国 Sn rz at Cu公司 a

N— B多克隆抗体 F K1 14主要仪器 ..

⑥用 D B H 0显色， A/ 2 2苏木精复染。以 P S代替一抗作阴性对照 B

全自动生化分析仪美国杜邦公司 台式高速离心机

⑦以梯度酒精脱水，甲苯透明，二中性树脂封片。

上海安亭科学仪器厂

16 0

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N F—K 6疫组化染色的观察， Bp5免以细胞质和 125统计学处理 ..

运用 SS 1 .件对数据进 PS 10软

细胞核内出现黄色和棕色颗粒为阳性，镜下 40倍行统计学处理，量资料间比较用 t验， 0计检 P<0 0 .5米字形选择 9个视野，图像分析仪进行显微定量为差异有统计学意义。用 分析，分析每个组织片上 N F—K 6 Bp5蛋白平均光密 2结果 度值 ( D) O。 2 1血清 A T A T一G . L、S、 T水平检测结果 (表 1见 )表 1各组大鼠血清 A T A T一G L、S、 T水平比较

}与模型组比较 P< . 5 00

￥与模型组比较 P< . 1 0

0

如表所示，模型组 A T A T一 T L、 S、 G水平显著高处理组，异有统计学意义 (差 P<00 ) .1。见表 3。于白芍总甙处理组和生理盐水对照组，异有统计差学意义。

表 3各组大鼠肝组织 N F—K 6量的比较 Bp5含

22血清 S D、 A水平检测结果 ( . O MD见表 2 )表 2各组大鼠血清 S D、 A水平的比较 O MD

:与模型组比较 P< .1 I c 0 03讨论

酒精进入人体后大部分在小肠被吸收，经血液与模型组比较 P< . l 00循环运送到肝脏。肝是酒精代谢、降解的主要场所。 如表所示，型组 MD模 A显著高于白芍总甙处理乙醇进入肝细胞后，经肝乙醇脱氢酶、过氧化氢物分组与生理盐水对照组，异有统计学意义解酶和肝微粒体乙醇氧化酶氧化，成乙醛。乙醛差形 ( 0O )模型组 S D显著低于自芍总甙处理组是乙醇的中间代谢产物，有强烈的脂质过氧化反 P< . 1; O具与生理盐水对照组，异有统计学意义 ( 00 )差 P< .1。 23病理形态学观察结果 .应和毒性作用。乙醇氧化脱氢过程中产生过多的还

原型辅酶 1 N D, ( A H)使得 N DIN D比值增高， AI A -/进多，形成急性脂肪肝或肝纤维化。酒精在肝细胞可

M组：肝细胞肿胀，肪变性，细胞坏死较重，而引起脂肪酸的氧化能力降低和甘油三脂合成增脂肝

为灶状、片状坏死伴较多炎性细胞浸润。

N组：肝细胞形态正常，肝小叶结构正常。坏死，少许炎性细胞浸润，叶结构正常。伴小2 4免疫组化观察结果 .

微粒体氧化系统的作用下可形成大量的自由基，损肝直接毒性作用作为基础，乙醇可直接损害肝细胞内微管、线粒体的功能和膜的流动性，影响蛋白质输

影响肝细胞功能。酒精是以乙醇对 B组：细胞轻度肿胀，死极轻，少量点状伤肝脏膜系统，肝坏为

生理盐水对照组及白芍总甙处理组大鼠肝组织出和脂肪代谢等，是肝细胞脂肪变性和坏死的重要较少表达 N F—K 6 Bp5蛋白，模型组大鼠肝组织细基础。酒精是一种氧化应激因子，引起脂质过氧而能胞质、胞核均有 N细 F—K 6 Bp5蛋白表达，特别是胞

化损伤、氧化应激和膜磷脂过氧化作用，对酒精性肝核有较强 N F—K 6 Bp 5蛋白表达。

病的发生和发展起关键作用。l _

图像分析结果表明，型组大鼠肝组织 N模 F—K B

鉴于肝细胞的氧化损伤在酒精的肝毒性效应中1 7 0

p5的表达量明显高于生理盐水对照组与白芍总甙起主要作用， 6抗氧化疗法成为近 3 0年来酒精性肝病

李莲：白芍总甙对大鼠酒精性肝损伤保护作用的实验研究治疗的研究重点，至今未能找到有效的防治药物。酶，但 具有清除过氧化物和解毒等多种功能，防止亲可与一般的化学性药物不同，多数草药制剂成电子化合物与蛋白质、大核酸结合而导致的细胞坏死， 分复杂，以在药物上市前通过随机对照试验证明可作为过氧化损伤的敏感指标。当肝细胞受损难

其有效性与安全性。】 _

时，清 S D明显减少。本实验结果显示，型组血 O模

本实验采用白酒灌胃的方法，建立了大鼠酒精血清 S D明显低于生理盐水对照组， O而白芍总甙处性肝损伤模型，观察白芍总甙对酒精性肝损伤的保理组 S D水平明显升高， O与模型组比较有显著差护作用。实验证明，白芍总甙对大鼠酒精性肝损伤异。 具有保护作用，能有效降低大鼠血清转氨酶的水平， 肝组织常规 H E染色光镜下显示模型组肝细胞使肝细胞脂肪变性、坏死和炎性细胞浸润等变化得肿胀、肪变性、细胞坏死及伴有较多炎性细胞浸脂肝到明显改善，可通过降低血清 MD水平及升高润；白芍总甙处理组的细胞肿胀、死、性细胞并 A而坏炎 S D的含量发挥抗脂质氧化作用，可减少肝组织浸润等病理改变较模型组明显减轻。证明白芍总甙 O还中N F—K的含量，制炎症反应。 B抑

可保护肝细胞，减轻其炎症损伤。 P5一 5 6 p0是 N F—K B最常见的异源二聚体形

酒精性肝损伤时，因线粒体损害，肝细胞内 A T S

浓度大大超过肝窦血液中的浓度¨。当肝细胞无式，此二聚体与抑制蛋白 IB相结合而以非活性状 K

明显坏死，仅有肝细胞膜的通透性增加时，中态存在于细胞质中。当受到细菌、素、症介质刺而血毒炎 A T浓度可明显增高，酒精性肝损

伤的敏感指标激后，K S是 IB快速磷酸化从而被非特异性蛋白酶水解，

之一。由于酒精可诱导肝细胞线粒体产生一G,使 p5白的核定位信号暴露， T 6蛋导致 p5蛋白由胞 6因此酒精性肝病时一G T明显升高。本实验中，模质向胞核转移，合在被诱导基因启动子序列上与结

型组 A T A T^ G S、 L、— T较生理盐水对照组明显升高，之相应的 K y B位点，启动基因的转录和相应蛋白质合提示模型组大鼠明显存在肝细胞损伤，而经白芍总成。 N F—K B活化后可启动多种促炎症基因如 I L

甙处理的大鼠， A T A T一 T其 S、L、 G较模型组均有降

一

1、L一、L一6 T F—a iO、 O 1I 2I 3、N、 S C X一、C M— N 2 IA

低，说明白芍总甙可以减轻酒精所致大鼠肝细胞损 l的转录 J促进炎症反应的发生。体外研究还发，

伤，具有保肝降酶之功效。

现 N -K F: B参与调控了枯否细胞和星状细胞的活]。本实验免疫组化结果显示，白芍总甙处理

丙二醛( D ) M A是机体脂质过氧化反应的最终产化

物，其含量可以反映组织中自由基的含量和组织细组大鼠肝组织中有少量 N F—K B表达，模型组比与胞受到自由基攻击即脂质过氧化反应的程度。MD 较有显著差异，明白芍总甙可抑制 N A说 F—K B的活

也作为损害机体的损害因子¨ M A和乙醛不但各化，机制可能与白芍总甙抑制 IB蛋白的降解，, D其 Ka自能与蛋白结合形成复合物，者还能互相促进对阻遏 N两 F—K 6 Bp5蛋白的核转移和抑制 N F—K B与方的活性，同与蛋白质结合形成丙二醛一乙醛加 D A的结合密切相关。共 N 合物 ( A)1, A改变蛋白质原来的功能， MA[ MA 7可在白芍总甙的毒理研究方面，军等在对大李

导致蛋白酶失活、白修复功能损害、蛋自身抗体形鼠和狗进行长周期、大剂量的白芍总甙使用后发现，成、胱甘肽衰竭、粒体损伤和氧利用障碍，能除血小板数目增高外，种动物的摄食、重、常谷线还两体血

直接刺激胶原蛋白的合成，从而促进肝纤维化的发规、肝肾功能等均无明显改变，重要脏器组织的病理生¨。本实验中，白芍

总甙处理组 M A较模型组学观察未见异常，无明显致畸作用。提示自芍总 D亦显著降低，明白芍总甙能有效降低 M A的产生，甙具有毒性低、说 D 安全范围大的特点。拮抗氧化应激的损伤，而保护肝细胞。从 另外需要指出的是，中药的使用剂量是影响治

机体防御自由基脂质过氧化损伤的保护系统，疗效果的一个重要环节。白芍的功效发挥与剂量有 主要是酶类清除剂，包括 S D O O。S D是一种多功能密切联系，其功效的发挥与剂量的轻重不成正比。但

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1] c B at n G tao,O ia v t s n y o i i r 白芍养血柔肝，补肝体，既又补肝用，甘味缓急，且故[5 HokJ,Ps r oJ .Eh nl xdt es esa dC—

为缓急止痛之要药，欲很好的发挥其缓急止痛功效用量须大，代药理也证实了白芍总甙的镇痛作用现随剂量增加而增强；当发挥平抑肝阳功效时，中量宜使用；当用于柔肝健脾或配伍运用于疏肝解郁方而剂中则用量宜小。

t i dc v liu[] Ac o, 022 )6 o n i ue le c ln r J . l hl20 (7: k en d ir e j y o 3—

68.

[ 6 T S Jnet B, mt L Sn lMF T m J o 1] uD, ent R S i S, o'l, u aD .D . h ev l n t rc in f c tl e y ewi ea t n/ c o l- ae ti e a t so ea d h d t t c i n o a hh o mir f a i

m n s m[] loo,18 (4:8— 8 . et yt J .Achl 9 9 2 )2 1 2 9 s e

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总之，白芍能

有效防治酒精所致的大鼠肝损伤， 且价格低廉，全范围大，安在保肝护肝的中药中具有良好的应用前景。[参考文献]f e 1 a A M.L v rds ae i lo o b sr Ciia e- 1 Dil ie ies n ac h la u e. l clP r n

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(责任编辑：周庆林 )(下转第 5 3页 )

19 O

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[6清)虞稷. 1](黄千顷堂书目(文渊阁本《四库全书》文原及全文检索电子版 ) D/ D]上海：海人民出版社，[ BC .上

(任编辑：责吕全国 )

Te tl lRe e r h n he Bi t a d De t Ye r f t x la s a c o t rh n a h a s o he Numbe r One

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(上接第 19页 ) 0

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( b i o t h i Is t e。 ioa Hu e 3 0 0, h a) Hu e l e nc n tu Xag n. b i 2 0 C i P y c it 4 nAbta tObet T td epoet no G nc rncach l i r nuyi rt a dt dsuste src: jc s:os yt rtc o f Po ho i l oi l e jr a n i s h u h i T o c v i n s o c meh ns Meh d:0S t w r dvd dr d m yit trego p, h 0rt o o e g u eeg e cai m. to s 3 D r s ee i e o l no he ru s te 1 a f d l r pw r vn a i n a s m o i l o o it g s ia y o f rw e st rp a o e f ho i l hl i ri r ach lnr atc l f u ek ope aertm d lo crnca o o c l e nu .T eT P t am n a rl ro r c i v jy h G et e t

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w s s n f a t ih rt a h ti h o p t ae t GP a d t e g o p t ae i ai e a i i c l h g e h n t a n te g u r t d wi T n h u r t d w t S n .An h OD g in y r e h r e h l d te S lv li h d lg o p w s s i c n l o rt a h ti h r u r a e t GP a d t e g o p t ae t e e n t e mo e r u a i f a t lwe h t a n t e go p t td wi T n u e td wi n g i y n e h h r r hSai e ln .Th ah l gc ha g so pao y e s li g a d fty d g ne ain i h d lwa r e o s t a e p t o o i a c n e fhe t c t we ln n at e e r to n t e mo e s mo e s r u h n l i

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