六种抗EB病毒抗体检测在鼻咽癌血清学诊断中的比较

ELISA

２００６年第３３卷第１４期

中国肿瘤临床

７９５

六种抗ＥＢ病毒抗体检测在鼻咽癌血清学诊断中的比较＊

胡维维

宗永生①

李凤萍

李广民

钟碧玲②

张

敏①

梁英杰①

顾耀亮③

陈跃龙③

中山大学附属佛山医院病理科（广东省佛山市５２８０００）

摘要目的：评估ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ，ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ，Ｚｔａ－ＩｇＡ，Ｚｔａ－ＩｇＧ，ＶＣＡ－ｐ１８－ＩｇＡ和ＶＣＡ－ｐ１８－ＩｇＧ六种酶联免疫吸

附检测（ＥＬＩＳＡ）在血清学诊断鼻咽癌中的应用，探讨哪种ＥＬＩＳＡ组合更有功效。方法：收集８５例治疗前鼻咽癌患者和１３２例健康成人血清。应用六种ＥＢ病毒特异性重组融合蛋白ＥＬＩＳＡ，检测血清抗ＥＢ病毒的抗体水平。采用灵敏度、特异度、优势比等参数来评估它们在诊断鼻咽癌中的效率。结果：单独采用一种检测时，Ｚｔａ－ＩｇＧ和ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ的灵敏度与特异度均可达０．８１０６以上。Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ和Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ两种检测双阳性的特异度提高至０．９６２１以上。Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ或Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ／Ｚｔａ－ＩｇＡ三种检测均阳性者，其特异度不仅可达０．９８２４，优势比也明显升高（分别为２０６．４２４２和１９６．５０００）。８５例患者血清中无１例同时呈Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－

ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ阴性者。结论：临床血清学诊断鼻咽癌，首选Ｚｔａ－ＩｇＧ或ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ。同时检测两种ＥＬＩＳＡ，宜采用Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ或Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ。三种ＥＬＩＳＡ同时检测，可以提高特异度。推荐Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ或Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ／Ｚｔａ－ＩｇＡ三项。

关键词

鼻咽癌

ＥＢ病毒血清学诊断

文章编号：１０００－８１７９（２００６）１４－０７９５－０４

中图分类号：Ｒ７３９．６文献标识码：Ａ

Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆ６ＡｎｔｉｂｏｄｙＡｓｓａｙｓＤｅｔｅｃｔｉｎｇＥｐｓｔｅｉｎ－ＢａｒｒＶｉｒｕｓｆｏｒ

ＳｅｒｏｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＮａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌＣａｒｃｉｎｏｍａ

ＨｕＷｅｉｗｅｉ

ＺｏｎｇＹｏｎｇｓｈｅｎｇＬｉＦｏｎｇｐｉｎｇｅｔａｌ

Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ＦｏｓｈａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｕｎｙａｔ－ｓｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ

（ＴｈｅＦｉｒｓｔＰｅｏｐｌｅ＇ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＦｏｓｈａｎＣｉｔｙ），Ｆｏｓｈａｎ

ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏａｓｓｅｓｓ６ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙｓ（ＥＬＩＳＡ），ｎａｍｅｌｙ，ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ，ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ，Ｚｔａ－ＩｇＡ，Ｚｔａ－ＩｇＧ，ＶＣＡ－ｐ１８－ＩｇＡａｎｄＶＣＡ－ｐ１８－ＩｇＧ，ｆｏｒｔｈｅｉｒａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｓｅｒｏｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＮＰＣ），ａｎｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｗｈａｔｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｏｆＥＬＩＳＡｓｗｅｒｅｍｏｒｅｅｆｆｉｃｉｅｎｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｓｅｒａｏｆ８５ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄＮＰＣｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄ１３２ｈｅａｌｔｈｙａｄｕｌｔｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ．ＳｉｘＥＬＩＳＡｓｕｓｉｎｇＥｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ（ＥＢＶ）－ｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅａｐ－ｐｌｉｅｄｔｏｔｅｓｔｔｈｅｓｅｒｕｍａｎｔｉｂｏｄｙｌｅｖｅｌａｇａｉｎｓｔＥＢＶ．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｏｄｄｓｒａｔｉｏａｎｄｏｔｈｅｒｐａｒａｍ－ｅｔｅｒｓｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｄｉａｇｎｏｓｉｎｇＮＰＣ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｗｈｅｎｅｖａｌｕａｔｅｄｉｎｄｉｖｉｄｕ－ａｌｌｙ，ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆＺｔａ－ＩｇＧａｎｄＥＢＮＡ１－ＩｇＡｃｏｕｌｄｂｏｔｈｒｅａｃｈｍｏｒｅｔｈａｎ０．８１０６．ＴｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆｄｕａｌｐｏｓｉｔｉｖｅｓｆｏｒＺｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧａｎｄＺｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｏｍｏｒｅｔｈａｎ０．９６２１．ＴｈｅｔｒｉｐｌｅｐｏｓｉｔｉｖｉｔｙｆｏｒＺｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧａｎｄＺｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ／Ｚｔａ－ＩｇＡｃｏｕｌｄｎｏｔｏｎｌｙｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｔｏｗａｒｄ０．９８２４ｂｕｔａｌｓｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｌｅｖａｔｅｔｈｅｏｄｄｓｒａｔｉｏ（２０６．４２４２ａｎｄ１９６．５０００ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．Ｎｏｎｅｏｆｔｈｅ８５ＮＰＣｐａｔｉｅｎｔｓ＇ｓｅｒａｗｅｒｅｎｅｇａｔｉｖｅｗｈｅｎｔｈｅＺｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧｔｅｓｔｓｗｅｒｅｃｏｎｄｕｃｔｅｄｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：ＷｈｅｎｕｓｉｎｇａｓｉｎｇｌｅＥＬＩＳＡｍｅｒｅｌｙｆｏｒｓｅｒｏｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＮＰＣ，ｔｈｅｂｅｓｔｃｈｏｉｃｅｉｓｅｉｔｈｅｒｔｈｅＺｔａ－ＩｇＧｏｒＥＢＮＡ１－ＩｇＡ．Ｉｎｏｒｄｅｒ

!①

本文课题受国家自然科学基金资助（编号：３９７３０２００－ＩＩ）中山大学中山医学院病理学教研室

②广东省第二人民医院病理科③中山市生物技术公司

：ｔｏｍ．ｃｏｍ

ELISA

７９６

中国肿瘤临床

２００６年第３３卷第１４期

ｔｏｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｔｈｅｃｏｍｂｉｎｅｄｕｓａｇｅｏｆ２ＥＬＩＳＡｓ，ｎａｍｅｌｙ，Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡｏｒＺｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ，ｗａｓａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ．ＴｈｒｅｅＥＬＩＳＡｓｕｓｅｄｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙｃｏｕｌｄｎｏｔｏｎｌｙｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｂｕｔａｌｓｏｍｅｅｔｔｈｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｏｆｅｘｃｌｕｄｉｎｇｓｕｓｐｉｃｉｏｕｓＮＰＣｐａｔｉｅｎｔｓｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ．Ｔｗｏｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｏｆ３ＥＬＩＳＡｓ，ｎａｍｅｌｙ，Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧａｎｄＺｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ／Ｚｔａ－ＩｇＡｗｅｒｅｒｅｃｏｍ－ｍｅｎｄｅｄ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ

Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ

Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ

Ｓｅｒｏｌｏｇｙ

Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ

鼻咽癌的发生与ＥＢ病毒感染相关，鼻咽癌患者血清中抗ＥＢ病毒抗体水平升高［１］。近年来，临床上在利用血清学协助诊断鼻咽癌方面，以重组ＥＢ病毒蛋白制备的酶联免疫吸附检测（ＥＬＩＳＡ）［２］正在取代传统的ＶＣＡ－ＩｇＡ和ＥＡ－ＩｇＡ的酶标检测［３］。国

６］

内已有数篇采用ＥＬＩＳＡ血清学诊断鼻咽癌［４～和评

清的平均光密度值。将鼻咽癌患者和健康成人的相对光密度值的范围均分为２０个区间。将相对光密度值超过每一个区间的相对光密度值的鼻咽癌患者数的百分率连接起来的曲线称为灵敏度曲线。将等于或低于每个区间相对光密度值的健康成人的百分率连接起来的曲线称为特异度曲线。两条曲线的交接点即临界值［８］。当检测样本的ｒＯＤ等于或大于临界值时定为阳性反应，低于临界值时则为阴性反应。

估患鼻咽癌风险［７］的报道。由于鼻咽癌中大多数ＥＢ病毒持续表达核抗原１（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓｎｕｃｌｅａｒ

ａｎｔｉｇｅｎ１，ＥＢＮＡ１）以及少数ＥＢ病毒可表达ＢａｍＨ１Ｚ转录因子Ｚｔａ（ＢａｍＨ１Ｚｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ）和病毒壳抗原ＶＣＡ（Ｖｉｒａｌｃａｐｓｉｄａｎｔｉｇｅｎｓ）等，又由于鼻咽癌患者主要产生ＩｇＡ与ＩｇＧ两种免疫球蛋白；因此，本研究设计六种ＥＬＩＳＡ，即ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ、ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ、Ｚｔａ－ＩｇＡ、Ｚｔａ－ＩｇＧ、ＶＣＡ－ｐ１８－ＩｇＡ、ＶＣＡ－ｐ１８－ＩｇＧ，比较其血清学诊断鼻咽癌方面的意

义。

１．４统计学分析

［８］

按照方积乾主编《医学统计学与电脑实验》，

计算确立灵敏度（Ｓｅｎ）、特异度（Ｓｐｅ）、（准确率）（л）、

Ｙｏｕｄｅｎ指数（Ｊ）、阳性似然比（ＬＲ＋）以及优势比（ＯＲ）。２

结果

１材料与方法１．１标本

收集中山大学附属佛山医院门诊８５例组织学确诊为鼻咽癌的未经治疗患者的血清，同时收集

８５例鼻咽癌患者及１３２例健康成人血清六种ＥＬＩＳＡ的ｒＯＤ值范围、ｒＯＤ均值和临界值（或称诊断界点，ｃｕｔ－ｏｆｆｐｏｉｎｔ）见表１。

表１

８５例鼻咽癌患者和１３２例健康成人血清

六种ＥＬＩＳＡ的ｒＯＤ值范围、ｒＯＤ均值及临界值

酶联免疫吸附检测名称

１３２例祖籍广州、经全面体检证实身体健康的成年

人血清。

ｒＯＤ值范围ｒＯＤ均值临界值

ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ鼻咽癌患者健康成人

０．６３００

０．１７７０～２．０４０００．１０８０～２．２３６０

１．１２６０±０．４９２００．４８８０±０．３７５０

１．２９００

０．６７１０～２．２８７００．０２５０～１．８７２０

１．６９４０±０．４１６００．８３６０±０．４９４０

０．６５００

０．１９５０～２．３５０００．２１８０～１．３８１０

１．１９９０±０．５９８００．５３８０±０．２３５０

０．７８００

０．３３３０～２．７１６００．０３３０～２．２２５０

１．６５７０±０．７３４００．３８６０±０．３５８２

１．２０００

０．２８４０～２．０１５００．１５１０～１．８０３０

１．４４２０±０．５３２３０．８８４０±０．４８７５

０．９９００

０．０８３０～２．６０１００．０４７０～２．７３４０

１．１８９０±０．７４１３１．０４１０±０．７７９３

１．２酶联免疫吸附检测（ＥＬＩＳＡ）

检测ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ、ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ、Ｚｔａ－ＩｇＡ、Ｚｔａ－

ＩｇＧ、ＶＣＡ－ｐ１８－ＩｇＡ和ＶＣＡ－ｐ１８－ＩｇＧ的ＥＬＩＳＡ试剂

均由香港神农有限公司（ＳｉｎｏｃｌｏｎｅＨｏｎｇＫｏｎｇＬｔｄ．）提供。所用抗原是ＥＢＮＡ１、Ｚｔａ和ＶＣＡ－ｐ１８的谷胱甘肽转移酶纯化重组融合蛋白。按ＥＬＩＳＡ两步法操作检测。血清标本用含有２％小牛血清的ＰＢＳ缓冲

缓冲液冲液稀释。每个孔１００μｌ稀释血清。经孵育、

洗后加入辣根过氧化物酶标记的抗血清。再孵育、再冲洗后，加１００μ，５，５’ｌ的ＴＭＢ（３，３’－四甲基联苯胺）。加入１００μｌ的０．３ＭＨ２ＳＯ４终止显色反应。在

ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ鼻咽癌患者健康成人

Ｚｔａ－ＩｇＡ鼻咽癌患者健康成人

Ｚｔａ－ＩｇＧ鼻咽癌患者健康成人

ＶＣＡ－ｐ１８－ＩｇＡ鼻咽癌患者健康成人

４５０ｎｍ对６２０ｎｍ的条件下检测吸光度。１．３

相对光密度与临界值

血清抗体水平用相对光密度值（ｒＯＤ或ｒＡ）表示，即样本光密度值（ＯＤ或Ａ）除以两份阳性对照血

ＶＣＡ－ｐ１８－ＩｇＧ鼻咽癌患者健康成人

ELISA

２００６年第３３卷第１４期六种抗ＥＢ病毒抗体检测在鼻咽癌血清学诊断中的比较 ７９７

关于六种ＥＬＩＳＡ各自的呈阳性反应的鼻咽癌患者数（Ａ）、呈阴性反应的鼻咽癌患者数（Ｂ）、呈阳呈阴性反应的健康成人性反应的健康成人数（Ｃ）、

数（Ｄ）、灵敏度（Ｓｅｎ）、特异度（Ｓｐｅ）、准确率（л）、阳性似然比（ＬＲ＋）和优势比（ＯＲ）Ｙｏｕｄｅｎ指数（Ｊ）、见表２。

单独应用一种ＥＬＩＳＡ的结果显示，Ｚｔａ－ＩｇＧ和

表２

特异度、准确率、ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ的灵敏度、Ｙｏｕｄｅｎ指

数、阳性似然比和优势比的６个指标均位于六项

ＥＬＩＳＡ中的高位。Ｚｔａ－ＩｇＧ的所有指标又较ＥＢＮＡ１－

特异度、准确率和优势比分ＩｇＡ者为高，其灵敏度、

别达０．８８２３、０．８７８８、０．８８０２和５４．３７５０。但是，特异度、准确率和优势比也ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ的灵敏度、

分别达到了０．８１１８、０．８１０６、０．８１１１和１８．４５７５。

六种ＥＬＩＳＡ单独或联合检测的灵敏度、特异度、准确率、阳性似然比和优势比Ｙｏｕｄｅｎ指数、

Ａ７５６９６９６４６０４５６０６２５３５４５２５１４７５３

Ｂ１０１６１６２１２５４０２５２３３２３１３３３４３８３２

Ｃ１６２５２７３２３９６２３５５１３１１２６

Ｄ１１６１０７１０５１００９３７０１２９１２７１２７１１９１３１１３１１３０１２６

灵敏度

特异度

准确率

酶联免疫吸附检测名称Ｙｏｕｄｅｎ指数阳性似然比优势比

Ｚｔａ－ＩｇＧ＋ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ＋ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ＋Ｚｔａ－ＩｇＡ＋

０．８８２３０．８１１８０．８１１８０．７５２９０．７０５９０．５２９４０．７０５９０．７２９４０．６２３５０．６３５３０．６１１８０．６００００．５５２９０．６２３５

０．８７８８０．８１０６０．７９５５０．７５７６０．７０４５０．５３０３０．９７７３０．９６２１０．９６２１０．９０１５０．９９２４０．９９２４０．９８４９０．９５４５

０．８８０２０．８１１１０．８０１８０．７５５８０．７０５１０．５３０００．８７１００．８７１００．８２９５０．７９７２０．８４３３０．８３８７０．８１５７０．８２４９

０．７６１１０．６２２４０．６０７３０．５１０５０．４１０４０．０５９７０．６８３２０．６９１５０．５８５６０．５３６８０．６０４２０．５９２４０．５３７８０．５７８０

７．２７９７４．２８６２３．９６９７３．１０６０２．３８８９１．１２７１３１．０９６９１９．２４５４１６．４５１２６．００４４８０．５０００７８．９４７４３６．６１５９１３．７０３３

５４．３７５０１８．４５７５１６．７７０３９．５２３８５．７２３１１．２７０２１０３．２０００６４．１５２５４２．０６８６１５．９４５４２０６．４２４２１９６．５０００８０．３９４７３４．７８１２

ＶＣＡ－ｐ１８－ＩｇＡ＋ＶＣＡ－ｐ１８－ＩｇＧ＋Ｚｔａ－ＩｇＧ＋／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ＋Ｚｔａ－ＩｇＧ＋／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ＋ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ＋／Ｚｔａ－ＩｇＡ＋ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ＋／Ｚｔａ－ＩｇＡ＋

Ｚｔａ－ＩｇＧ＋／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ＋／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ＋

Ｚｔａ－ＩｇＧ＋／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ＋／Ｚｔａ－ＩｇＡ＋

Ｚｔａ－ＩｇＡ＋／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ＋／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ＋

Ｚｔａ－ＩｇＧ＋／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ＋／Ｚｔａ－ＩｇＡ＋

＋＝阳性反应；Ａ＝呈阳性反应的鼻咽癌患者数；Ｂ＝呈阴性反应的鼻咽癌患者数；Ｃ＝呈阳性反应的健康成人数；Ｄ＝呈阴性反应的健康成人

数；灵敏度（Ｓｅｎ）＝Ａ／（Ａ＋Ｂ）；特异度（Ｓｐｅ）＝Ｄ／（Ｃ＋Ｄ）；准确率（л）＝（Ａ＋Ｄ）／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ）；Ｙｏｕｄｅｎ指数（Ｊ）＝Ｓｅｎ－（１－Ｓｐｅ）；阳性似然比（ＬＲ＋）＝

Ｓｅｎ／（１－Ｓｐｅ）；优势比（ＯＲ）＝ＡＤ／ＢＣ

四种组合的双重ＥＬＩＳＡ阳性，其特异度均高过

０．９０１２。其中Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ、Ｚｔａ－ＩｇＧ／

ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ和ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ／Ｚｔａ－ＩｇＡ的特异度均高

阳性似过０．９６２５。Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ的特异度、

然比和优势比分别较Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ者为高（０．９７７３对０．９６２１，３１．０９６９对１９．２４５４，１０３．２０００对６４．１５２５），但前者的灵敏度和Ｙｏｕｄｅｎ指数却较后者为低（０．７０５９对０．７２９４，０．６８３２对０．６９１５）。两者的准确率（０．８７１０）却是一样的。

四种ＥＬＩＳＡ三阳性组合中的三种，即Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ、Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ／Ｚｔａ－ＩｇＡ和Ｚｔａ－ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ，其特异度均高过双重ＥＬＩＳＡ阳性者，达到０．９８４９以上。特别是Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ和Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ／Ｚｔａ－ＩｇＡ，其准确率、Ｙｏｕｄｅｎ指数、阳性似然比和优势比（分别是０．８４３３、０．６０４２、８０．５０００和２０６．４２４２以及０．８３８７、０．５９２４、７８．９４７４和１９６．５０００）的数值更高。但是，三阳性组合中的一种，

即Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ／Ｚｔａ－ＩｇＡ，

其特异度

（０．９５４５）反而较三种ＥＬＩＳＡ双阳者为低。

８５例鼻咽癌患者中无１例显示Ｚｔａ－ＩｇＧ、ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ和ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ三项同时呈阴性反应者，而１３２例健康成人中有８０例（６０．６１％，８０／１３２）同时显示三项呈阴性反应。只有１例鼻咽癌患者对Ｚｔａ－ＩｇＧ、ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ和Ｚｔａ－ＩｇＡ同时显示三项呈阴性反应，而健康成人有７４例（５６．０６％，７４／１３２）同时

显示三项呈阴性反应。

３讨论

在过去几十年中，免疫荧光或免疫酶标法，检测

血清抗ＥＢ病毒抗体水平，已在临床上常规应用于鼻咽癌的血清学诊断。近年来，这种方法已逐步被

ＥＬＩＳＡ所替代，因为后者更客观有效而快速［９］。本文结果显示，在六种ＥＬＩＳＡ中，如果单独采用一种，则以Ｚｔａ－ＩｇＧ和ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ为佳。一方面，Ｚｔａ是少数

鼻咽癌细胞中的ＥＢ病毒由潜伏性感染转化为溶解性感染立即早期时相的产物，而ＥＢＮＡ１则是大多数鼻咽癌细胞中呈潜伏性感染的ＥＢ病毒持续表达的产物。另一方面，鼻咽癌患者对ＥＢ病毒的免疫反应主要是ＩｇＧ和ＩｇＡ。因此，Ｚｔａ－ＩｇＧ和ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ恰好符合血清学诊断鼻咽癌的基础理论。Ｄａｒｄａｒｉ等

ELISA

７９８

［１０］

中国肿瘤临床

供酶联免疫吸附试剂盒以及方法。

参考文献

１

２００６年第３３卷第１４期

和Ｆａｃｈｉｒｏｈ等［１１］文章的内容反映了这一论点。本

致谢：香港大学微生物学系吴文翰教授与陈国雄博士提

文结果说明以Ｚｔａ－ＩｇＧ为好，而顾耀亮等先前报道的研究却显示以ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ为好［６］，这需要进一步探讨。

ＣｈａｎＪＫＣ，ＰｉｌｃｈＢＺ，ＢｒａｙＦ，ｅｔａｌ．Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｉｎ：ＢａｒｎｅｓＬ，ＥｖｅｓｏｎＪＷ，ＲｅｉｃｈａｒｔＰ，ＳｉｄｒａｎｓｋｙＤ．（Ｅｄｉｔｏｒｓ）．ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎＣｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＴｕｍｏｕｒｓ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ＆Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．ＨｅａｄａｎｄＮｅｃｋＴｕｍｏｕｒｓ［Ｍ］．ＬｙｏｎＦｒａｎｃｅ：ＩＡＲＣ－９７Ｐｒｅｓｓ，２００５．８５～

Ｃｈａｎ等［１２］和Ｄａｒｄａｒｉ等［１０］的报道以及ＣｈａｎＪＫＣ等在世界卫生组织肿瘤组织学分类一书中的

［１］

观点，均认为在血清学诊断鼻咽癌时，最好合并采用几种ＥＬＩＳＡ。本文结果显示，同时应用Ｚｔａ－ＩｇＧ／

２

ＮｇＭＨ，ＣｈｅｎＨＬ，ＬｕｏＲＸ，ｅｔａｌ．Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｎａ－ｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｂｙｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂａｎｔａｓｓａｙ：ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ，ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎａｎｄｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｃｒｉｔｅｒｉａ［Ｊ］．ＣｈｉｎＭｅｄ５３６ＪＥｎｇ，１９９８，１１１（６）：５３１～

ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ或Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ或ＥＢＮＡ１－

ＩｇＧ／Ｚｔａ－ＩｇＡ时，其特异度均可显著提高至０．９６２１以上。Ｃｈａｎ等［１２］报道，以Ｚｔａ－ＩｇＧ与ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ联

合应用为好。但是，顾耀亮等则报道以ＥＢＮＡ１－

［６］

３ＺｏｎｇＹＳ，ＳｈａｍＪＳ，ＮｇＭＨ，ｅｔａｌ．ＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＡａｇａｉｎｓｔｖｉ－ｒａｌｃａｐｓｉｄａｎｔｉｇｅｎｏｆＥｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓａｎｄｉｎｄｉｒｅｃｔｍｉｒｒｏｒｅｘ－ａｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｎａｓｏｐｈａｒｙｎｘｉｎｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｓｙｍｐ－７ｔｏｍａｔｉｃｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ，１９９２，６９（１）：３～

ＩｇＡ与Ｚｔａ－ＩｇＡ联合应用效果最好。所以，在四种双

重ＥＬＩＳＡ阳性中，哪一种双重组合才最适于鼻咽癌

的血清学诊断，尚需加大样本量进一步研究。

在联合应用三种ＥＬＩＳＡ，呈三阳的四种组合中，以Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ和Ｚｔａ－ＩｇＧ／

４５

张昌卿，宗永生，黄宝珍，等．提高ＥＢ病毒血清学在诊断鼻咽癌中的效益［Ｊ］．中华肿瘤杂志，２００２，２４（４）：３５６～３５９张昌卿，宗永生，孙

韵，等．联合检测ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ和ＥＡ－ＩｇＧ在

鼻咽癌血清学诊断中的价值［Ｊ］．中华肿瘤杂志，２００４，２６（８）：４８２～

ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ／Ｚｔａ－ＩｇＡ的效益为最佳。其不但可以进

一步提高特异度到０．９９２４，而且其优势比也分别达到了２０６．４２４２和１９６．５０００。因此我们认为，如果能同时开展三项ＥＬＩＳＡ，最好采用Ｚｔａ－ＩｇＧ、ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ和ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ的组合。这种组合是临床血清学

诊断鼻咽癌的最好方法；也有利于排除临床可疑为鼻咽癌患者。Ｃｈｅｎｇ等［７］报道，采用这种ＥＬＩＳＡ的组合也最有利于应用在鼻咽癌高发区人群体检中早期发现鼻咽癌患者。但是，Ｚｔａ－ＩｇＧ、ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ和

４８４６７

顾耀亮，张昌卿，吴子柏，等．抗重组ＥＢ病毒抗原双重抗体检测血清学诊断鼻咽癌的研究［Ｊ］．癌症，２００３，２２（９）：９０３～９０６

ＣｈｅｎｇＷＭ，ＣｈａｎＫＨ，ＣｈｅｎＨＬ，ｅｔａｌ．Ａｓｓｅｓｓｉｎｇｔｈｅｒｉｓｋｏｆｎａ－ｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｏｎｔｈｅｂａｓｉｓｏｆＥＢＶａｎｔｉｂｏｄｙｓｐｅｃｔｒｕｍ４９２［Ｊ］．ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ，２００２，９７（４）：４８９～

８９

宗永生，吴秋良，林素暇，等．ＥＢ病毒相关性疾病病理学研究的进展［Ｊ］．中山大学学报（医学科学版），２００５，２６（５）：４８１～４８７

方积乾，主编．医学统计学与电脑实验［Ｍ］．第２版．上海：上海科学技术出版社，２００１．３２８～３３１

１０ＤａｒｄａｒｉＲ，ＨｉｎｄｅｒｅｒＷ，ＬａｎｇＤ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｔｏ

ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＥｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓａｎｔｉｇｅｎｓｉｎｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ－ｎｏｍａｐａｔｉｅｎｔｓ：ＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙｔｅｓｔｏｆＺＥＢＲＡｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｅａｒｌｙ３１６９ａｎｔｉｇｅｎｓｐ５４ａｎｄｐ１３８［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏ，２００１，３９（９）：３１６４～１１ＦａｃｈｉｒｏｈＪ，ＳｃｈｏｕｔｅｎＴ，ＨａｒｉｗｉｙａｎｔｏＢ，ｅｔａｌ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｉｖｅｒｓｉｔｙ

ｏｆＥｐｓｔｅｉｎ－ＢａｒｒｖｉｒｕｓＩｇＧａｎｄＩｇＡａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｎａ－ｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ：ＡｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＩｎｄｏｎｅｓｉａｎ，Ｃｈｉｎｅｓｅ，６１ａｎｄＥｕｒｏｐｅａｎｓｕｂｊｅｃｔｓ［Ｊ］．ＪＩｎｆＤｉｓ，２００４，（１）：５３～

１２ＣｈａｎＫＨ，ＧｕＹＬ，ＮｇＦ，ｅｔａｌ．ＥＢＶｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｂｏｄｙ－ｂａｓｅｄａｎｄ

ＤＮＡ－ｂａｓｅｄａｓｓａｙｓｉｎｓｅｒｏｌｏｇｉｃｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ－７０９ｎｏｍａ［Ｊ］．ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ，２００３，１０５（４）：７０６～

（２００５－１１－２２收稿）（２００６－０２－２７修回）

（韩豫生校对）

Ｚｔａ－ＩｇＡ的组合也是好的，其特异度与优势比也分别达到０．９９２４和１９６．５０００。所以，同时做三种ＥＬＩＳＡ

不仅可以显著提高血清学诊断鼻咽癌的特异度，早期发现鼻咽癌，还能满足在血清学方面排除可疑鼻咽癌的需要。

总之，１）如果只能做一种抗ＥＢ病毒血清抗体的ＥＬＩＳＡ，则可采用Ｚｔａ－ＩｇＧ或ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ。２）为了提高血清学诊断鼻咽癌的特异度，建议同时采用

Ｚｔａ－ＩｇＧ和ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ或Ｚｔａ－ＩｇＧ和ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ两种ＥＬＩＳＡ。３）为了在体检中早期发现鼻咽癌或在血清学方面排除可疑鼻咽癌，建议联合应用Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＡ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ或Ｚｔａ－ＩｇＧ／ＥＢＮＡ１－ＩｇＧ／Ｚｔａ－ＩｇＡ三项ＥＬＩＳＡ。