医学检验本科班分子生物学检验技术试卷

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医学检验本班《分子生物学检验技术》试卷

一. 选择题（在备选答案中选择一个最佳答案,每题2分,共20分）:

1. 在核酸提取时,常需要使用氯化钠,醋酸钠等盐溶液,真正的目的是（ ）

A. 中和核酸的负离子,使其易于沉淀 B. 调节PH值

C. 保持核算的完整性 D. 提高核酸的浓度

E. 无特定目的

2. 在一个DNA分子中,如G所占摩尔比为17.2%,则A所占摩尔比为（ ）

A. 82.8% B. 32.8% C. 17.2% D. 65.6% E. 无法计算

3.下列那项不是扩增反应所必需的?（ ）

A. 引物和模板 B. dNTP C. Mg++ D .DNase E. 缓冲液

4. 下列那项是分子生物学技术形成的理论基础?（ ）

A. 基因结构与功能的关系 B. 基因结构变异与疾病的关系

C. 病原微生物的基因结构特征 D. 基因的表达.调控与疾病的关系

E. 以上皆是

5. 分子生物学检验技术主要包括那些技术?（ ）

A. 核酸分子杂交技术 B. DNA测序技术

C. PCR技术 D. DNA重组技术

E. 以上全是

6. 下列哪项检测需应用分子生物学检验技术?（ ）

A. 肝功能检测 B.乙肝两对半检测

C. 乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测 D. 肿瘤细胞培养

E. 病原微生物培养

7. 在核酸的分离纯化过程中,为保证其一级结构的完整性,应采取（ ）

A. 尽量简化分离步骤,缩短提取时间 B. 适当延长提取时间

C. 在37摄氏度条件下进行 D. 加入Mg++,Ca++等二价金属离子

E. 以上全是

8. 有一核酸样品,测得A260/A280=2.0,请问该样品属于哪类核酸样品?（

A. DNA B. RNA ）

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C. 是DNA,但有蛋白质污染 D. 是RNA,但有蛋白质污染

E. DNA和RNA

9. 在RNA提取和纯化过程中,为避免Rnase污染而导致RNA的降解,应采取（ ）

A. 在洁净的实验室里操作 B. 带手套和口罩

C. 所用器材高压消毒或DEPC处理 D. 冰浴下操作

E. 以上皆是

10. 随机引物标记法全程标记DNA时,需选用下列哪种酶?（ ）

A. DNA多聚酶I的Kelnow片段 B. TaqDNA聚合酶

C. 限制性内切酶 D. DNA连接酶

E. 末端转移酶

二. 判断题：(你认为下列叙述正确的请在题后括号内打√,错误的打×，每题2分,共6分)

1. 双脱氧核酸链终止法是最常用的DNA测序技术（ ）

2. TapDNA聚合酶的作用是催化DNA合成，但由于缺乏3’→5’外切酶活性，无校正功能，所以在复制合成新链过程中可能会发生碱基错配，导致PCR产物的错误（ ）

3. 采用加热煮沸法可使RNase完全失活（ ）

三：填空题(每空格2分,共24分):

1. 在选择核酸的分离纯化方法，应遵循的总原则是：一是保证核酸（一级结构的完整性）；二是尽可能（排除其他分子的污染，保证核酸样品的纯度 ）。

2. 在PCR反应中，Mg++是个至关重要的因素，浓度（ 过低 ）会降低酶的活性，浓度（ 过高 ）又会导致非特异性扩增。

3. 用于核酸杂交的普通硝酸纤维素膜最大的优点是（本底低 ），因而最容易检测杂交信号，缺点是（ 脆性大 ）易破裂，且队＜５００bp的核酸结合力低。

4． 整个核酸杂交反应主要由（预杂交）、（杂交）和（洗脱）三个步骤组成。

5. 转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上的核酸，其与滤膜的结合是松散的，需做进一步的固定，常用的固定方法是（烘烤）、（紫外线固定）和（碱固定）。

三. 名词解释：(每题4分,共20分):

1. 融点曲线分析技术：是根据野生型序列和突变序列因不同Tm而产生不同的融点曲线而设计的。

2. 探针:指所有能与特定的靶分子发生特异性的相互作用，并可以被检测的分子。

3. Tm值： DNA熔解温度，指把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度。

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4. 转染:将外源DNA直接导入真核生物细胞的过程称为转染。

5. 转化:将重组的DNA分子导入细菌，使其在细菌体内扩增及表达的过程称为转化。

四. 问答题:（每题10分，共30分）

1. 简述限制性内切酶的定义、命名原则和分类。

答：定义：限制性内切酶是能识别和水解双链DNA分子内特异序列的核酸水解酶类。

命名：通常由3个斜体字母表示，第1个大写字母为来源微生物的属名第1个字母，第2、第3个小写子母取微生物种名的头两个字母。

分类：根据酶分子组成及裂解方式的不同，将限制性内切酶分3类，Ⅰ类和Ⅲ类限制性内切酶在同一酶分子中兼有修饰（甲基化）作用和依赖于ATP的限制水解活性，Ⅱ类限制性内切酶能识别并水解特异性的核苷酸序列是DNA重组技术中最重要的工具。

2. PCR引物的设计应遵循哪些原则。

答：1.用于PCR反应的引物需要两条，分别设在被扩增目的的片段的两端，并分别与模版正负链序列互补。

2.引物的长度一般以18-25个核苷酸为宜，引物过长容易产生寡核苷酸的链内互补，形成发夹状结构，影响引物和模板之间的互补。

3.两条引物之间尤其在3’端的序列不能有互补，以免形成引物二聚体。

4.引物的碱基组成应平衡，避免出现嘌呤、嘧啶碱基堆积。

5.PCR扩增中的退火温度是根据引物的Tm值而决定的，两条引物的Tm值不能差太大。

6.根据需要，可在合成引物时于其5’端加修饰成分。

3. 试述实时荧光PCR水解探针法的实验原理？

答：原理：PCR反应体系中除有两条引物外还需要一条荧光素标记的探针。探针的5’端和3’端分别标记荧光报告基团R和荧光淬灭基团Q，当探针完整时R基团与Q基团分别位于探针的两端，Q基团抑制R基团使其不能发射荧光。PCR过程中，TaqDNA聚合酶沿着模板移动各成新链，当移动到模板互补的探针处时，TaqDNA聚合酶同时还发挥其5’-3’外切核酸酶活性，将探针的脱氧核苷三磷酸逐个水解，R基团与Q基团随子分离。此时R基团不再受Q基团的抑制而发射荧光，仪器的检测系统便可测得荧光信号。