G-CSF动员供者外周血单个核细胞输注治疗异基因造血干细胞移植后复发白血病的

造血干细胞移植

国际检验医学杂志 2 0 1 1年 7月第 3 2卷第 n期

I n t J L a bMe d, J u l y 2 0 1 1, V o 1 . 3 2, N o . 1 1

临床检验研究

G - C S F动员供者外周血单个核细胞输注治疗异基因造血干细胞移植后复发白血病的临床研究刘嘉，高 力，陈幸华，刘 耀，高蕾，曾韫臻，张诚，张曦△ (第三军医大学新桥医院血液科/重庆市医学重点学科，重庆 4 0 0 0 3 7 )摘要：目的观察重组人粒细胞集落刺激因子 ( GC S F )动员的供者外周血单个核细胞输注治疗异基因造血干细胞移植后，

白血病复发的有效性及安全性。方法对 2 0 0 9年 7月至 2 O 1 1年 2月该科 2 O例异基因造血干细胞移植后复发的白血病患者，予以输注 G - C S F动员后供者外周血单个核细胞。其中 5例急性淋巴细胞白血病一 C R 2, 8例急性髓系白血病 C R 2, 2例急性髓系白血病 C R 3, 3例急性混合细胞白血病， 2例加速期慢性髓系白血病。在异基因造血干细胞移植后，半年内， 2 O例患者均复发，予 G—

C S F动员后，供者外周血单个核细胞输注，每次输注细胞量按 1×1 0 / k g、 2×1 0 / k g、 4×1 0 / k g逐级增加，每次输注间隔 4周。结果 1 2例患者再次完全缓解， 8例患者未缓解。输注后， 3例患者发生了 I~Ⅱ度急性移植物抗宿主病， 1 2例患者发生了慢性

移植物抗宿主病， 5例未发生并发症，未观察到输注相关的全血细胞减少。结论

G - C S F动员供者外周血单个核细胞输注治疗异

基因造血干细胞移植后，白血病复发有较好的疗效，不良反应小，值得临床进一步推广。 关键词：造血干细胞移植； 白血病； 复发； G - C S F动员的供者外周血单个核细胞D O I: 1 0 . 3 9 6 9/] . i s s n . 1 6 7 3— 4 1 3 O . 2 O 1 1 . 1 1 . 0 0 3 文献标识码： A文章编号： 1 6 7 3— 4 l 3 O ( 2 O 1 1 ) 1 1— 1 1 5 1一 O 3

Re s e a r c h o n t he t he r a pe u

t i c e f f e c t of p e r i ph e r a l bl o o d mo no n uc l e a r c e l l s i nf u s i o n f r o m d o no r s s t i m ul a t e d wi t h g r a nu l o c y t e c o l o n y - s t i m ul a t i n g f a c t o r i n t he t r e a t me nt o f pa t i e nt wi t h r e l a ps e d l e u ke mi a a f t e r a l l o g e n e i c he ma t o p o i e t i c s t e m c e l l t r a ns pl a nt a t i 0n

Li u Ji a, Ga o Li , C h e n Xi n g h u a, Li u Y a o, Ga o Le i, Ze n g We n j i n g, Z h a n g C h e n g, Z h a n g Xi

( De pa r t me n t o f He ma t o l o g y, Xi n q i a o Ho s p i t a l, Th i r dMi l i t a r y Me di c a l Un i v e r s i t y, Ch o n g q i n g 4 0 0 0 3 7, Ch i n a)Ab s t r a c t: Ob j e c t i v e To i n v e s t i g a t e t h e e f f i c a c y a n d s a f e t y o f g r o wt h f a c t o r— p r i me d d o n o r h e ma t o p o i e t i c s t e m c e l l s i n f u s i o n( GPB S CI ) f r o m d o n o r s s t i mu l a t e d wi t h g r a n u l o c y t e c o l o n y - s t i mu l a t i n g f a c t o r ( G - CS F) i n t h e t r e a t me n t o f p a t i e n t s wi t h r e l a p s e d l e u k e mi a a f t e r a l l o g e n e i c h e ma t o p o i e t i c s t e m c e l l t r a n s p 1 a n t a t i o n ( a l l o— HS CT) . Me t h o d s 2 0 c a s e s o f p a t i e n t s wi t h r e l a p s

e d l e u k e mi—

a, o c c u r r i n g i n s i x mo n t h s a f t e r a l l o— HS C T, a mo n g wh o m 5 c a s e s we r e a c u t e l y mp h o b l a s t i c l e u k e mi a ( AL L)i n C R2, 8 we r e a c u t emy e l o i d l e u k e mi a ( AM L) i n CR2, 2 we r e AM L i n CR3, 3 we r e a c u t e mi x e d l i n e a g e l e u k e mi a ( M AI )a n d 2 we r e c h r o n i c my e l o i d l e u—

k e mi a a t a c c e l e r a t e d p h a s e, r e c e i v e d GP BS CI, d u r i n g J u 1 . 2 0 0 9 t o Fe b . 2 0 1 1 . Th e d o s e o f c e l l s i n f u s i o n wa s 1×1 0 / k g f o r t h e f i r s tt i me, 2× 1 0 / k g f o r t h e s e c o n d t i me, 4× 1 0 / k g f o r t h e t h i r d t i me a n d s o o n, a n d t h e c e l l s i n f u s i o n wa s p e r f o r me d o n c e f o r e v e r yf o u r we e k s . Re s u l t s Af t e r r e c e i v i n g GP BS C I, 1 2 p a t i e n t s r e c e i v e d c o mp l e t e r e mi s s i o n a g a i n, 3 p a t i e n t s d e v e l o p e d g r a d e I— l【ac u t e GVHD, 1 2 pa t i e nt s de ve l op e d c hr oni c GVHD, 5 pa t i e nt s ha d n ot a ny c o mp l i c a t i o n a nd no t r a ns f u s i on r e l a t e d pa n c yt o pe n i a wa s ob s e r v e d i n a l l p a t i e nt s . Co

nc l u s i o n Thi s r e s e a r c h c ou l d s u gge s t t ha t G PBSCI mi ght be a n e f f e c t i ve me t ho d f or t he t r e a t me nt of p a— t i e nt s wi t h r e l a ps e d l e uke mi a a f t e r a l l o— H SCT, w hi c h d e s e r ve s f ur t h e r s t u dy a nd e x t e nde d c l i ni c a 1 a pp l i c a t i on .

Ke y wo r d s: h e ma t o p o i e t i c s t e m c e l l t r a n s p l a n t a t i o n;s t e m c e l 1 s; nf 1】 s i o n

l e u k e mi a;

r e c u r r e n c e;

g r o wt h f a c t o r p r i me d d o n o r h e ma t o p o i e t i c

1 9 8 9年 S l a v i n在大量实验研究基础上率先应用供者淋巴细胞输注( D I I )治疗 1例去 T淋巴细胞骨髓移植后 1个月复发的难治性急性淋巴细胞白血病患儿获得成功，此后许多学者研究证明了 D I I的可行性及有效性，但此方法可能引起严重的 G VHD及骨髓造血功能抑制 E 1 3]。国内外有报道，应用重组

1资料与方法 1 . 1一般资料 2 0 0 9年 7月至 2 0 1 1年 2月本科 2 O例在异基

因造血干细胞移植后复发的白血病患者。其中男 1 2例，女8 例，中位年龄 3 2岁。5例急性淋巴细胞白血病一 C R 2, 8例急性髓系白血病一 C R 2, 2例急性髓系白血病 C R 3, 3例淋巴瘤细胞白血病， 2例加速期慢性髓系白血病。其中 1 5例为同胞问 HL A全相合造血干细胞移植， 5例为 HL A单倍型相合移植。 同胞间 HL A全相合造血干细胞移植的干细胞来源于 G - C S F

人粒细胞集落刺激因子 ( G— C S F )动员的供者外周血单个核细胞输注，替代 D L I治疗 a l l o— HS C T后白血病复发的患者，取得了较好的疗效 l 4]。2 0 0 9年

7月至 2 0 1 1年 2月本科对在 a l l o— HS C T后复发的白血病患者予以输注 G - C S F动员的供者外周血单个核细胞，现将结果报道如下。

动员的外周血造血干细胞， HL A单倍型相合造血干细胞移植的干细胞来源于 G C S F动员的外周血混合骨髓造血干细胞。

* 基金项目：国家自然科学基金资助项目( 8 1 0 7 0 3 8 8 );重庆市自然科学基金重点资助项目( 2 0 0 9 B A5 0 5 6 );第三军医大学临床科研基金资助项目( 2 0 1 0 D2 4 9 )。 通讯作者， E— ma i l: z h a n g x x i@s i n a . c o n. r c n。 共同第一作者。

造血干细胞移植

1 1 5 2

国际检验医学杂志 2 0 1 1年 7月第 3 2卷第 l 1期

I n t J I b i v i e d, J u l y 2 0 1 1, V o 1 . 3 2, N o . 1 1

1 . 2预处理方案

急性淋巴细胞白血病、淋巴瘤细胞白血病

续表 1

接受G P t L q, C I患者的输注次数、输注相关 GⅥ_玎= )及治疗效果

及慢性髓系白血病采用白消安+环磷酰胺 ( B u+C y )方案： B u 3 . 2 mg/ k g×4 d; C y 6 0 mg/ k g X 2 d。急性髓系白血病采用 F B A方案：氟达拉滨 3 0 mg/ m。×5 d;白消安 3 . 2 mg/ k g×3d;阿糖胞苷 1 . 5 g/ m ×5 d。或 F B C方案：氟达拉滨 3 0 mg/m。 X 5 d; Bu 3 . 2 mg/ k g×3 d; C y 5 0 mg/ k g× 2 d。

1 . 3 G VHD的预防 2 O例患者均采用环孢素+马替麦考酚酸酯 ( MMF )+短程小剂量甲氨蝶呤 ( MTX )方案预防 G VHD,

单倍型相合移植加用抗人胸腺细胞球蛋白 ( A TG)预防GVHD。

1 . 4造血干细胞动员及采集全部供者均予 G - C S F (欣粒生，

北京四环或吉赛欣，华北制药 )动员干细胞，剂量为 1 O i f g/ ( k g d ),动员第 5天采集外周血干细胞，单倍型相合移植供者在动员第 6天再采集骨髓干细胞，采集单个核细胞

( MNC )为( 4~6 )×1 O / k g (按患者体质量计算 ), C D3 4 细胞 ( 2 -4 )×1 0 / k g (按患者体质量计算 )。单倍型相合移植供受者血型为主侧不合时，骨髓去除红细胞，血型次侧不合时，骨髓去除血浆，主、次侧均不合时去除红细胞及血浆。2 0例均为移植后存在高复发风险的患者，故移植时均将移植需要之外的外周血干细胞冻存，按 1×1 0 / k g、 2×1 0 / k g、 4×1 0 / k g梯度冻存，以备移植后复发时行 GP B S C I治疗。 1 . 5供者外周血单个核细胞输注 2 o例患者在复发后予输注冻存的供者外周血单个核细胞，每次输注细胞量按 1×l O / k g、 2×1 0 / k g、 4×1 0。/ k g逐级增加，每次输注间隔 4周，其中 1 2例接受了 1次 D MN C I, 5例接受了 2次 D MNC I, 3例接受了 3次 DMN C I,中位输注时间为+9 O d (+5 2~+1 7 9 d ),输注 2 . 2 GP B S C I相关并发症及疗效输注后， 3例患者发生了 I~Ⅱ度 a GVHD。经 1 m g/ k g甲泼尼松治疗后均得到控制， 1 2例患者发生了 c GVHD, 4例表现为局限型 c GVHD, 8例表

现为广泛型 c GVHD,经治疗后均能控制， 5例未发生并发症，无一例患者发生严重的骨髓抑制。经过上述治疗后， 1 2例患

者再次达到完全缓解，占6 o; 8例患者未达到完全缓解，占4O 。

2 . 3 随访结果移植后，中位随访时间为 4 5 2 d ( 2 l 2~6 1 0

d ); G P B S C I后，中位随访时间 1 8 0 d ( 3 0~5 8 2 d )。1 2例再次获得血液学及分子生物学缓解的患者，无复发存活 1 O例； 2例分别于移植+ 4 1 2、+4 4 0 d再次复发，移植+4 4 6和+ 5 0 7 d死亡。

次数根据复查骨髓及植入指标决定。1 . 6疗效监测定期复查血常规、骨髓形态学、融合基因及植入相关检查 (包括血型转换、性染色体检查、供受者 D NA短重复序列)。2结果

3讨

论

a l l o HS

C T是治疗白血病的最有效手段，但对于 a l l o—

HS C T后白血病复发的治疗措施少。国内外有报道，应用 G—C S F动员的 G P B S C I,替代 D L I治疗 a l l o— HS C T后白血病复发

2 . 1 GP B S C I疗效 1 2例患者再次达到血液学及分子生物学

完全缓解 (其中 4例接受了 2次 GP B S C I后达到完全缓解， 7例接受了 1次 G P B S C I后达到完全缓解， 1例接受了 3次 G P B—

的患者，其优点在于 G P B S C I比单纯的 D I I具有更强的移植物抗白血病作用 ( G VL),输注相关的 GVHD较 D I I更容易控制[ 5]。GP B S C I与 DI I均是一种过继性免疫治疗方法，主要机

S C I后达到完全缓解 ), 8例患者未缓解，完全缓解率为 6 o。具体输注情况见表 1。表 1 接受 GPB S CI患者的输注次数、输注相关 GVHD及治疗效果

制是供者的造血干细胞与宿主细胞表面组织相容性抗原和肿瘤相关抗原不同，供者造血干细胞识别相关抗原后被激活，通过其自身的攻击能力和释放的具有细胞毒作用的细胞因子，对宿主细胞及白血病细胞进行破坏性攻击，从而产生 GVHD和 G VI 效应。而 C - C S F动员后，供者外周血淋巴细胞亚成分发生改变可能对减轻输注后 G VHD起到了重要作用。有研究提示， I型细胞因子 (包括 I L一 2和 I F N一 )会促进 GVHD的发生，

而Ⅱ型细胞因子 (包括 I I 4和 I L 1 0 )会抑制 GVHD的发

牛嘲； G— C S F的应用可以降低 T细胞的异体活性，从而发生由T型向Ⅱ型细胞因子的转向 ];国内外及本研究中所有 D MNC I输注后， GVHD均得到有效控制且无相关死亡，直接证明了 D MNC I能有效降低 GVHD的程度及发生率。D I I另一

个常见并发症是严重的骨髓抑制。国外有研究表明， G C S F

动员后，造血干细胞输注可以加强供者的正常造血，从而避免了输注相关的骨髓抑制，本研究中无一例患者出现此并发症， 为此提供

了佐证l c 。

造血干细胞移植

国际检验医学杂志 2 0 1 1年 7月第 3 2卷第 u期

I n t J L a b Me d, J u l y 2 0 1 1, V o 1 . 3 2, N o . 1 1

1 1 53

本研究中， 2 O例患者在复发后予输注冻存的供者外周血单个核细胞，每次输注细胞量按 1× 1 0 / k g、 2× 1 0 / k g、 4×

( J MML)[ J] . B o n e Ma r r o w Tr a n s p l a n t, 2 0 0 4, 3 3 ( 1 0 ): 1 0 6 9 .王恒湘，段连宁，等.同一供者外周血单个核细胞输注治疗[ 4]薛梅，

1 0 / k g逐级增加，每次输注间隔 4周，其中 1 2例接受了 1次D MNC I, 5例接受了 2次 D MNC I, 3例接受了 3次 DMNC I,中 位输注时间为+9 O d (+5 2~+ 1 7 9 ) d;其中 1 2例患者再次达到血液学及分子生物学完全缓解 (其中 4例接受了 2次 GP B—S C I后达到完全缓解， 7例接受了 1次 G P B S C I后达到完全缓

单倍相合骨髓移植后白血病复发[ J] .中国实验血液学杂志，2 0 07, 1 5( 4): 81 9— 8 2 2 .

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解， 1例接受了 3次 G P B S C I后达到完全缓解 ), 8例患者未缓解，完全缓解率为 6 O; 1 2例再次获得血液学及分子生物学缓解的患者，无复发、存活 1 O例， 2例分别于移植+ 4 1 2、+4 4 0 d 再次复发，移植+4 4 6、+5 0

7 d死亡。本研究结果表明， GP B— S C I可能具有 GVL作用，输注相关 GVHD较易控制，值得临床进一步推广。 参考文献[ 1]陈运贤，孟凡义，钟雪云，等.现代造血干细胞移植[ M] .广州：广东科技出版社， 2 0 0 5: 2 9 0 .mo r i T, S u g i y a ma H[ 2] Ko, Oga wa H, e t a 1 . Tr e a t me n t o f a pa t i e nt i n

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a r e l a p s e a f t

e r bo ne ma r r o w t r a n s p l a n t a t i 0 n f o r a c u t e l y mph o b l a s—t i c l e u k e mi a wi t h t h e s y s t e mi c a dmi n i s t r a t i o n o f a l l o g e n e i c l y e— r

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l e u k o c y t e i n f u s i o n s f o r r e l a p s e d j u v e n i l e my e l o mo n o c y t i c l e u k e mi a

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[ 1 1]B a t i s t a C K, Mo t a J M, S o u z a M L, e t a 1 . Ami f o s t i n e a n d g l u t a t h i o n ep r e v e n t i f o s f a mi d e a n d a c r o l e i n - i n d u c e d h e mo r r h a g i c c y s t i t i s[ J] .Ca nc e r Ch e mo t h e r Ph a r ma c o l, 2 0 0 7, 5 9 ( 1 ): 7 1— 7 7 .

d o n o r t y p e[ J] . Ha e ma t o l o g i c a, 2 0 1 0, 9 5 ( 7 ): 1 1 8 3— 1 1 9 0 . [ 6] C o ma r M, Ag a r o P D, An d o l i n a M, e t a 1 . He mo r r h a g i c c y s t i t i s i nc hi l d r e n u nd e r g o i n g b o n e ma r r o w t r a ns p l a n t a t i 0 n: a pu t a t i v e r o l e

[ 1 2]唐晓文，刘一之，朱晓黎，等.选择性双侧髂内动脉栓塞治疗异基因造血干细胞移植术后重度出血性膀胱炎[ J] .中华器官移植杂志， 2 0 0 6, 2 7 ( 6 ): 2 6 - 2 8 .

f o r s i mi a n v i r u s 4 0[ J] . Tr a n s p 1 a n t a t i 0 n, 2 0 0 4, 7 8 ( 4 ): 5 4 4— 5 4 8 . [ 7] Ak i y a ma H, Ku r o s u T, S a k a s h i t a C, e t a 1 . A d e n o v i r u s i s a k e yp a t h o g e n i n he mo r r ha g i c c y s

t i t i s a s s o c i a t e d wi t h b o n e ma r r o w

(收稿日期： 2 O 1 1一 O 3— 0 7 )