一种简单、精确计算EC50的方法

水产药物

敷理医药学杂志２０

０１年第１４磬第Ｋ期

文章编号：１００４—４３３７（２００１）０６一０４８１一０２中图分类号：Ｒ３１ｌ文献标识码：Ａ

一种简单、精确计算ＥＣ。。的方法

李晶晶

杨璞

叶方立

（武汉科技大学医学院武汉４３００６２）

擅

薹：

提出了一种计算药物量一效曲线参燕芈散教量‘Ｅｃｓ。）的新方法．可精确计算落彳Ｆ两已知浓度问的ＥｃⅢｆ、需绘罔铡

算或计算机曲线搬音．该方法比常用的绘图计算的方法更加快速、精确和简单，能广泛应用于药技动力学研究。

美ｔ词；Ｅｃｓ。；量敷曲线

药物的教价和效能有多种方法测定．其技术参数来撵于对量

毁关系曲线的分析．这种分析可得出达到药物浓度的

已知

旦：型

ｙ

Ｘ

（２）（３）（４）

最丈效应（Ｅｍａｘ）和引起５０％最大效应的半教浓度（Ｅｃ。。）．结合这两项指标的数据还可得到该药物的曲线斜率和峰值效应等参数。要精确计算药物量一效曲线Ｅｃ蛐．有两类方法ｔ其一

是将药物剂量及效应的各实浏数据用拟台优度ｉ壹来模拟Ｓ曲线．可通过ｓｃａｔｃｈａｒｄ法和Ｈｍ法使量一效关系ｓ型曲线直线化山．并得出线性方程，＝卅．ｒ＋ｃ，从中求出Ｅｃｓ。等药效动力

则ｘ，＝！喾

ＥＣ；。＝Ｃ＋（Ｘ一Ⅳ１）

或Ｆｃｓ。＝Ｄ—ｘ１ｙ＝Ａ＋疗

ｙ。＝＾一５０％最大效应值将上式代人式（２）得：

学各参散。但该方法常不能与实测值完全拟合，Ｅｃｓｏ只是５０％最大效应值两侧数据的估计值．其二是非计算直接作图求出Ｅｃ，。值．即将实验所得的数据作量一效曲线图．在ｙ轴５０％最大效应点处作水平线，在量一效曲线相交点处作垂线与ｚ轴相交．相交于ｚ轴的点即为Ｅｃ。。。绘图法求Ｅｃｓ。的优点是快

速、简单、方便．而缺点是Ｅｃ。。总是落在ｚ轴的两刻度单位之

ｘ ＝坚兰咝髦堇魁

睢，Ｄ一坠型型咚蒯幽

４

（６）

将式（６）代人式（４）得：

间。为了获得一个单一点值数据，Ｅｃ”的值常用两个最小刻度

的最度平均数或用ｚ轴相交点最近刻度的浓度值来加以估

计。由于两刻度之间没有继续细分，数据不可能很精确．如果

刻度单位为算术对数，转换为实际浓度时则误差就会很大。所以．通过手工绘图分析得到ＥＣｓｏ实际是依靠估计而并非精确

Ｊ１；

计算，对此，本文介绍一种快捷、简单、精确计算Ｅｃ。。的数学方法．它能应月卜于个体量一效曲线或原始数据分析，其条件是

ＥＣ”应落在曲线中殷的直线上。ｌ方法

依据量一教曲线的原始数据．应用简单的直角三角型原理即可计算出Ｅｃ…该计算方法的理论推导可通过量一技曲

线图１为倒来加以说明。论证该方法时必须接受两点基本假

定：ｏ从实验数据中选择的最大效应值Ｅ…具有真实代表

性；善在曲线上选择的半数最大效应值两侧的点值数据呈一直线．预期值应在此线段中间的某一点上。

从图ｌ所绘的直角三角形和原始实验数据中已知的ｄ、日、

５Ｃ５。

图ｌ量一效曲线分析图

ｆ和Ｄ值，依据可靠的实验数据先要确认Ｆ…注意不得由低于Ｅ卫：的各点推算Ｅ…取落在以和占之间５０蹦最大效应值确定ｏ．５Ｅ…结合图１所示可推导出相当于５０％最大效应值浓

度的￡Ｃ。

２应用与讨论

表ｌ的数据潭于Ｙａｎｇｗ研究离体鼠肝脏的双重灌注实验结果”】．以肝动脉内注射的去甲肾』二腺素（ＭＡ、浓度与肝动脉灌注压作出量一效曲线。以恒建流动模式灌往日｝脏．灌注压的短暂性升高代表血管收缩。在ｔ定验个体灌注压短暂｜生升

万方数据　

１８Ｊ

水产药物

Ｖｏｌ－１４Ｎ０６２００

矗ｊ：均数秆标准差及相成的药物浓度见表１．以本方珐计算的Ｅｃ见表：Ｅｏ

Ａ＝５０１ｎｌｎＨｇ，Ｂ＝１５ｍｍＨｇ，（一８，６ｌｏｇ

９．３

ｌｏｇ

ｍｏＩ 上）＝

ｒ㈣）；而用常规非计算绘图法得出Ｅｃ。估计

ｍｏＩ；１００％最大效应值一８２ｍｍＨｇ．相对于这一效

７．７【ｏＲ

煎见表１最后一行ＬＥ（’”（ｏｌｄ）），此行数据是Ｅｃ，。所在区间州６言墁＿［日｝插八值在ｒ轴上估计数。表：

肝动脉灌注ＮＡ血管收缩压程度及Ｅｃ、。值的比较

应的浓度＝ｍｏｌ。由此可知，；０５；最大效应值＝

ｏ

４１（）ｎｌｍＨｇ．与此相对应的剂量Ｅｃｓ．应在

３（ｆ点ｊ和

８．６（Ｄ点）之间．上下剂量区间的宽度ｘ＝＝ｏ７ｌｏｇｍｏｌ。由

于５０“的最大效应值（｛１．ｏｍｍＨｇ）在４＝５０ｎ㈨Ｈｇ与占一

ｌ

５ｎⅡｎＨｇ之间．则＾与Ｂ区间的宽度ｙ＝３５ｍｍＨｇ，ｊｏ％的最

大效应值与该区同上限值Ａ的差值ｙ１＝９．ｏｍｍＨｇ。

ｌｊ７土３２３３．５土ｄ４８５８６２６０５

９

７

因此．

Ｅｃ『Ｄ＿＿塑二！！塑套墼型韭堕

ｆ

９土４．７６二６３５士７２３土７６ｉ５

Ｏ５

—Ｏ．８７８ｌｏｇｍ０１。

计算出的数值比用绘图法垂直交叉于８．７５Ｉｏｇｍｏｌ与

８．８０ｌｏｇ

ｍｏ【之间取其均值为一８．７５５ｌｏｇｍ。ｌ要更加精

确。应用同样方法可很容易地精确计算出每个实验个体ＥＣ…

合并各数据计算出各剂量效应的平均数和标准差．再用此法能快速准确地计算出Ｅｃ∞一一８．６８士ｏ．１６ｌ。ｇｍｏｌ。而目测绘图法的精确性则取决于ｚ轴刻度上的精细划分程度，如果量

Ｓ．３ｊ

４５—８

８５２

５６．６士４．７

Ｅ：‘㈣、一８

Ｅｉ００１Ｊ）

Ｓ

ｉ５

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Ｓ３６

ｊ

８４ｕ一８６８±Ｏ２

８．７４士Ｏ．２

７０—８４５—８３５

注：ｔ最大效应值。

以实验个体１号的数据和图２为例来加以说明

效曲线上插入值的垂线落在ｚ轴两刻度之间，那将无法读出精确的数值而仅能靠估计。我们提出这种计算Ｅｃ。。方法具有简单、精确、快捷的优点，也可用来计算量一效曲线上诸如Ｅｃ扪Ｅｃ：ｓ以及其他参数．该方法无需复杂、昂贵的计算工具．

５。

ｆ

十分适用于药理学或毒理学的实验教学以及群体实验动物药

ｒ

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Ｅ

９３

Ｘ＝０７

效或毒效动力学的科学研究。

参考文献

１剌昌孝，孙瑞元药物评价实验设计与统计学基础．北京ｔ军事医学科学出舨社．１９９９．３１

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水产药物

一种简单、精确计算EC50的方法

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：引用次数：

李晶晶， 杨璞， 叶方立武汉科技大学医学院,

数理医药学杂志

JOURNAL OF MATHEMATICAL MEDICINE2001，14(6)3次

参考文献(2条)

1.刘昌孝.孙瑞元 药物评价实验设计与统计学基础 1999

2.Yang W.Benjamin IS.Alexander B The isolated dual-perfused rat liver preparation: a new model forthe study of hepatic vascular tone 1995

相似文献(10条)

1.学位论文 黄立峰 舟山眼镜蛇蛇毒磷脂酶A<,2>的分离及其对M型胆碱受体的作用 2007

蛇毒成分与生物体内的胆碱能系统关系密切。近年来，作用于M胆碱受体的蛇毒成分日益受到重视。有学者从曼巴蛇(Dendroaspis angusticeps)蛇毒分离出一些与M胆碱受体具有高度亲和力的单体成分，并称之为muscarinic toxins(MTs)。MTs对M1和M4受体亚型具有很强的选择性，某些MTs已被作为研究M胆碱受体亚型的工具药加以开发应用；部分MTs还能激动M1胆碱受体，可显著改善动物学习记忆障碍，具有开发成药物的潜力。有学者尝试从曼巴蛇以外蛇种的蛇毒中分离具有M胆碱受体亲和力的成分。Miyoshi和Tu分别从眼镜蛇南洋亚种Naja naja sputatrix和南美响尾蛇Crotalus atrox蛇毒分离获得与M胆碱受体具有极高度亲和力的单体成分，并称之为mAChR inhibitors(MIs)。但是，MIs与M胆碱受体的亲和力远强于D.angusticeps蛇毒中

MTS；两种MIs的分子量(分别为13.6 kDa和30kDa)远大于MTs(约7kDa)；而且非常有趣的是MIs具有磷脂酶A2活性，是一种蛇毒磷脂酶A2，MTs则无磷脂酶A2活性。然而，MIs对M胆碱受体的药理作用尚未见文献报道，有待于探索。

蛇毒磷脂酶A2(venom phospholipase A2，vPLA2)在结构和水解功能上与哺乳类动物的分泌型磷脂酶A2(secreted PLA2，sPLA2)非常相似。然而，除了具有与哺乳动物sPLA2相同水解催化活性之外，vPLA2还具有某些重要的药理毒性作用。近年来研究提示，vPLA2的药理毒理作用可能是通过与组织中特定的靶蛋白位点特异结合而产生的。如上所述，MIs是一种vPLA2，与M胆碱受体具有极高的亲和力，因此探索其对M胆碱受体的药理作用甚为必要。

舟山眼镜蛇，也称中华眼镜蛇(Naja atra)在我国华南地区广泛分布，蛇毒资源丰富，其与N.naja sputatrix蛇种相近。鉴此，本研究首先拟采用色谱层析技术从舟山眼镜蛇蛇毒分离纯化获得MIs类的磷脂酶A2；进而运用放射配体受体结合法分析该蛇毒单体成分与M胆碱受体的亲和力以及对M胆碱受体亚型的选择性；接着采用离体器官试验，在M胆碱受体的功能模型上探索该vPLA2的生物学效应以及对M胆碱受体及其亚型的药理作用，为其可能的开发利用(工具药或治疗药物)提供实验依据和理论基础，也有助于加深理解体内sPLA2生理与病理生理作用。本研究主要研究内容包括以下三个部分： 1.舟山眼镜蛇蛇毒磷脂酶A2的分离纯化及其理化性质通过采用一系列色谱层析分离方法(Sephadex G-50和Sephadex G-150凝胶过滤色谱、CM-Sepharose Fast Flow离子交换层析色谱及POROS (R)CM4.6/100预装柱灌注色谱层析)和运用离体生物测定法筛选活性成分，从舟山眼镜蛇粗毒中分离纯化获得一种能引起离体豚鼠回肠纵行肌收缩的活性蛋白成分。初步判断其对M胆碱受体具有激动作用，暂命名为muscarinic protein，简称MP。经SDS-PAGE和HPLC鉴定MP的纯度达到电泳纯和色谱纯水平。质谱分析MP的分子量为13.3 kDa，与vPLA2的分子量相似。Edman降解法测定MP的N端16位氨基酸序列为NLYQFKNMIQCTVPSR，与已发现的眼镜蛇vPLA2的序列一致，与其他蛇种的vPLA2具有很高的同源性。以上两点提示MP很可能是一种vPLA2。通过磷脂酶A2活性测定，验证了这一点。小鼠急性毒性试验显示MP具有致死性，LD50值为14.3mg/kg。

2舟山眼镜蛇蛇毒磷脂酶A2对M型胆碱受体的亲和力采用放射配体受体结合法，分析MP对M型胆碱受体及其亚型的亲和力。结果表明，MP可剂量依赖性地抑制[3H]QNB与大鼠端脑M胆碱受体的结合反应，其IC50值为28.0nmol/L，K1值为10.1nmol/L，提示MP对大鼠端脑M胆碱受体具有高度亲和力，且其亲和力明显大于阿托品和D.angusticeps蛇毒中MT2，与N.naja sputatrix蛇毒中MI相当。

分别选用大鼠大脑皮层和大鼠心肌作为M1和ME受体亚型结合模型，比较MP对这两种受体亚型的选择性。结果表明，MP可完全抑制[3H]QNB与大鼠大脑皮层或大鼠心肌组织的结合，并呈剂量依赖性：MP抑制[3H]QNB与大鼠大脑皮层结合的IC50值为248.8 nmol/L，而抑制[3H]QNB与大鼠心肌结合的IC50值为22.1 nmol/L，提示MP对M2亚型的亲和力可能大于M1亚型。

3舟山眼镜蛇蛇毒磷脂酶A2对M型胆碱受体的药理作用3.1 MP对M胆碱受体的作用通过观察MP在离体豚鼠回肠纵行肌上的效应，研究MP对M胆碱受体的作用。结果显示，MP在豚鼠回肠纵行肌标本上可产生剂量依赖性的收缩效应，与CCh相似，且该效应可被阿托品(2 μmol/L，以上浓度)所拮抗。MP效应的EC50值为29.5nmol/L，与CCh(48nmol/L)比较接近，但MP在豚鼠回肠纵行肌标本上的最大收缩效应约为CCh的43％。提示MP可能对M胆碱受体具有部分激动作用。但是，阿托品阻断MP的浓度明显大于阻断CCh所需的浓度，且高浓度阿托品(0.3和3 μmol/L)只能减小MP的最大效应，无法使MP的量效曲线平行右移，提示阿托品并不是简单地竞争拮抗MP对M胆碱受体的作用。

本试验还从神经节、结合位点及.ACh的释放等MP有可能作用的几个环节研究MP在豚鼠回肠上的作用机制。六烃季铵(100μmoI/L)对MP在豚鼠回肠纵行肌标本上的收缩作用无明显影响，提示MP在豚鼠回肠纵行肌标本上的作用部位不在上游的神经节，而在效应器上。MP(6μmol/L)不影响CCh的量效曲线，提示MP与CCh不是作用于同一位点。MP对豚鼠回肠纵行肌的作用液可引起蛙腹直肌收缩，提示促进ACh的释放可能与MP收缩豚鼠回肠作用有关。

本试验还通过观察磷脂酶A2抑制剂DEDA和温度对MP在豚鼠回肠纵行肌上作用的影响，来了解MP对豚鼠回肠纵行肌的作用与其磷脂酶A2活性的关系。DEDA(100μmol/L)对MP对豚鼠回肠纵行肌作用的量效曲线无明显影响。27℃和37℃两种温度条件下，磷脂酶A2的活性差异较大，而MP对豚鼠回肠纵行肌的收缩作用无明显差异。以上两点提示MP引起豚鼠回肠纵行肌的收缩效应可能不依赖其磷脂酶活性。 3.2 MP对M1和M2受体的作用与McN-A-343的作用相似，MP几乎完全抑制电刺激兔输精管收缩，作用呈剂量依赖性。MP抑制作用的EC50值约为23.7 nmol/L，约为McN-A-343(300 nmol/L)的1/13。提示MP作用的效能与McN-A-343相当，效价为McN-A-343的十几倍。哌仑西平(0.1μmol/L)可使MP量效曲线平行右移，最大效应不变。提示MP抑制电刺激兔输精管收缩是由M1受体介导的，MP对M1受体具有激动作用。

低剂量MP(2×10-10～2×10-75mol/L)轻微抑制豚鼠心房肌的自律收缩(与CCh相似)，作用只有CCh的20％；丽高剂量MP(2×10-7～2×10-5.5～mol/L)增强豚鼠心房肌的自发收缩(与阿托品相似)，提示MP可能是M2受体较弱的部分激动剂。

3.3蜂毒磷脂酶A2及猪胰磷脂酶A2对豚鼠回肠纵行肌的作用观察蜂毒磷脂酶A2和猪胰磷脂酶A2在豚鼠回肠纵行肌的效应，了解MP对M胆碱受体的药理作用是否磷脂酶A2的一个共性。

蜂毒磷脂酶A2剂量依赖性收缩豚鼠回肠纵行肌，且可被阿托品(10-6mol/L)部分阻断，其效应的EC50值(24.1nmol/L)，与MP的EC50值(29.5nmol/L)较为接近，为CCh的EC50值(48nmol/L)的1/2，最大效应为CCh的50％左右。猪胰磷脂酶A2剂量依赖性地收缩豚鼠回肠纵行肌，且可被阿托品(10-6mol/L)部分阻断，最大效应为CCh的40％左右。以上结果显示，这两种磷脂酶A2对豚鼠回肠纵行肌的作用与MP相似，提示MP对M胆碱受体的作用可能是磷脂酶A2的一个共性。

综上所述，本研究表明：

1.从舟山眼镜蛇蛇毒分离纯化获得一种蛇毒磷脂酶A2单体成分，暂命名为muscarinic protein(MP)，其纯度达色谱纯，分子量为13.3 kDa，N端16个氨基酸序列为NLYQFKNMIQCTVPSR，具有磷脂酶A2活性。

2.MP对M胆碱受体具有高度亲和力，其K1值为10.1nmol/L，亲和力明显大于阿托品和Dendroaspis angusticeps蛇毒中MTs，与Naja najasputatrix蛇

水产药物

毒中MI相当。MP对M2受体亚型的亲和力大于M1受体亚型，可能具有一定的亚型选择性。

3.MP可激动M胆碱受体，对M1受体可能具有较强的激动作用，而对M2受体的激动作用很弱。

4.MP可致豚鼠回肠平滑肌收缩，其作用机制可能与MP激动M胆碱受体以及促进乙酰胆碱释放有关，但与MP磷脂酶A2活性可能无关。

2.期刊论文 DUAN Li-hua.张小华.ZHANG Xue-rong.卢海刚.ZHANG Xiao-yuan.DUAN Li-hua.ZHANG Xiao-hua.ZHANG Xue-rong.LU Hai-gang.ZHANG Xiao-yuan 多沙唑嗪对映体对豚鼠离体气管环的作用 -中国新药杂志2008,17(15)

目的:研究R-多沙唑嗪(R-doxazosin,R-DOX)、S-多沙唑嗪(S-doxazosin,S-DOX)和rac-多沙唑嗪(rac-doxazosin,rac-DOX)对豚鼠离体气管环的作用.方法:采用豚鼠离体气管环,观察DOX对映体对离体气管环静息张力、卡巴胆碱诱发收缩反应以及异丙肾上腺素诱发舒张反应的影响.结果:10和

30ìmol·L-1 DOX对映体对豚鼠离体气管环静患张力无显著性影响(P>0.05).S-DOX 10 ìmol·L-1使卡巴胆碱诱发豚鼠离体气管环收缩反应的Emax明显增大(P<0.05),但卡巴胆碱的EC50未发生明显改变.相反,同浓度R-DOX明显降低卡巴胆碱诱发的豚鼠离体气管环收缩反应的Emax(P<0.05),但使卡巴胆碱的EC50明显减小.S-DOX 10ìmol·L-1明显抑制异丙肾上腺素诱发的豚鼠离体气管环舒张反应量效曲线,并使异丙肾上腺素的EC50明显增大(P<0.05).R-DOX,rac-DOX和s-DOX 30 ìmol·L-1均不影响异丙肾上腺素的舒张反应量效曲线.结论:在豚鼠离体气管环标本S-DOX使卡巴胆碱诱发收缩反应的Emax明显增大,且明显抑制异丙肾上腺素的舒张反应.

3.学位论文 吴晗 五甲基槲皮素对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用及机制研究 2008

黄酮类的植物多酚一直受到医药界的高度关注，其中对槲皮素（Quercetin，QUE）的研究最为深入。槲皮素及其衍生物是自然界分布最广的黄酮类化合物，广泛存在于蔬菜、水果、干果、饮料和中草药中。研究表明具有强心、扩血管、降低血压、抗炎、抗氧化及清除氧自由基、降低血小板聚集、保护缺血再灌注损伤、免疫增强功能、抗肿瘤、抗突变、抗菌、抗病毒、镇痛的生理作用，但槲皮素生物利用度低，半衰期短，限制了其开发利用。 多甲氧基黄酮是多酚类黄酮的甲基衍生物，具有良好的药代动力学特点和药效学优势。但天然多甲氧基黄酮的提取工艺至今无重大突破，得量有限，价格昂贵，使深入研究难以进行，本研究对QUE进行了甲基化改造，获得高纯度低价位的3,3',4',5,7-五甲基槲皮素（3,3',4',5,7-pentamethylquercetin，PMQ），克服了药源的瓶颈。本实验通过比较槲皮素和其衍生物五甲基槲皮素对血管的舒张作用，并探讨五甲基槲皮素舒张血管机制，为黄酮类化合物在心血管病的防治中开发新药提供实验依据。 第一部分、五甲基槲皮素对甲氧胺收缩主动脉环量效曲线的影响。

采用常规离体血管环实验方法，观察PMQ 1，3，10μmol·L-1，QUE 3，10，30μmol·L-1对甲氧胺（Methoxamine，METH）收缩主动脉环量效曲线的影响。

结果表明：PMQ和QUE均能使METH量效曲线非平行性右移，最大收缩值降低，pD′2分别为5.62和4.78。对METH的缩血管作用产生明显抑制的最低浓度，PMQ为1μmol·L-1，QUE为10μmol·L-1。PMQ在10μmol·L-1能够使METH的EC50从给药前1.91 μmol·L-1升至给药后的15.0 μmol·L-1（P<0.05），相比较QUE同样浓度，能够使METH的EC50从给药前1.55μmol·L-1升至给药后的5.70μmol·L-1（P<0.05）。 第二部分、五甲基槲皮素对内皮完整和去内皮主动脉环的舒张作用。

制备内皮完整和去内皮主动脉环，在制备去内皮的主动脉环时，将微型棉签插入血管环内腔，轻轻的旋转数圈，用Ach 100μmol·L-1舒张METH所致的收缩反应以检验内皮功能。采用常规离体血管环实验方法，观察PMQ 3，10，30μmol·L-1，QUE 10，30，100μmol·L-1对METH（30 μmol·L-1）预收缩的内皮完整和去内皮主动脉环的舒张效应。

结果表明：PMQ 3，10，30μmol·L-1对内皮完整组和去内皮组主动脉环均有舒张作用，且其对内皮完整组的舒张作用较去内皮组强（40.0％±4.2％vs 22.1％±3.8％，78.0％±4.4％vs 62.7％±9.9％，90.9％±3.4％vs 70.6％±6.4％，P<0.05），同样，QUE10，30，100μmol·L-1对内皮完整组的舒张作用较去内皮组强（43.2％±11.3％vs 27.0％±4.7％，70.6％±4.9％vs45.9％±3.5％，97.0％±4.1％vs 56.4％±4.8％，P<0.05）。 第三部分、五甲基槲皮素舒张血管机制的探讨。

一、观察PMQ（1～100μmol·L-1）对30，80 mmol·L-1氯化钾（KCl）诱发的主动脉环收缩的影响。 采用常规离体血管环实验方法。

结果表明：PMQ能够明显舒张30 mmol·L-1 KCl引起的主动脉环收缩，对80 mmol·L-1 KCl引起的主动脉环收缩的舒张作用要弱于前者。对30，80mmol·L-1 KCl诱发收缩后PMQ舒张作用的量效曲线进行比较，后者的量效曲线明显上移，最大舒张效应降低，两者差异显著（P<0.05）。 二、观察三种不同钾通道阻滞剂对PMQ舒张效应的影响。

采用常规离体血管环实验方法，观察ATP敏感性钾通道阻滞剂－格列本脲（Glibenclamide）、电压依赖性钾通道阻滞剂－4-氨基吡啶（4-AP）和Ca激活的钾通道阻滞剂－四乙胺（TEA-Cl）对PMQ舒张主动脉环效应的影响。

结果表明：格列本脲组和4-AP组的血管舒张程度与对照组比较，无显著差异（P>0.05），而TEA-Cl能够明显抑制PMQ的舒张血管作用（P<0.01），可以使PMQ浓度为10 μmol·L-1时，Rmax由（54.1±5.5）％降低至（21.8±4.7）％。 三、观察PMQ对METH收缩主动脉环的2种收缩机理的影响。

采用常规离体血管环实验方法，主动脉环在正常K-H液中平衡后，换无钙K-H液冲洗4～5次，再浸泡平衡20min后，加入30μmol·L-1 METH，肌条出现收缩反应(1相收缩，即依内钙收缩)，然后恢复原K-H液中Ca2+量2.5 mmol·L-1（即加入50 μl 250 mmol·L-1 CaCl2于5ml 浴槽中）引起再次收缩（2相收缩，即依外钙收缩），比较给PMQ前后肌张力的变化（计算依内钙收缩和依外钙收缩占原有总收缩幅度的百分率）。

结果表明：1μmol·L-1，3μmol·L-1 PMQ对METH依外钙收缩和依内钙收缩无影响，而10μmol·L-1 PMQ对依外钙收缩有显著抑制（P<0.01），30μmol·L-1 PMQ对依外钙收缩（P<0.01）和依内钙收缩（P<0.05）均有抑制。 结论：

1. PMQ和QUE均能使METH的量效曲线右移，最大收缩值降低。

2. PMQ和QUE均能舒张内皮完整主动脉环和去内皮主动脉环，PMQ舒张主动脉环作用强于QUE。

3. PMQ能够明显舒张30mmol·L-1 KCl引起的主动脉环收缩，对80mmol·L-1 KCl引起的主动脉环收缩的舒张作用要弱于前者。

4. ATP敏感性钾通道阻滞剂－格列本脲和电压依赖性钾通道阻滞剂－4-氨基吡啶并不能影响PMQ的舒张血管效应，而Ca激活的钾通道阻滞剂－四乙胺能明显抑制PMQ的舒张血管效应。

5．PMQ对依内钙和依外钙收缩均有抑制，且对依细胞外钙收缩的抑制强于对依细胞内钙收缩的抑制。

4.期刊论文 杨兴海.Yang Xinghai EMD56431对犬冠脉和肠系膜动脉的作用 -中国现代应用药学2000,17(3)

目的:研究EMD对犬冠脉和肠系膜动脉的松弛作用. 方法:用20和60mmol/L KCl激动冠脉(+E,-E),观察EMD的松弛效应.同时观察格列本脲对EMD松弛冠脉的影响及EMD对KCl量效曲线的改变.此外,还测定了EMD松弛犬肠系膜动脉和冠脉的EC50.结果:0.7μmol/L EMD对20mmol/L KCl去极化冠脉(+E,-E)呈非内皮依赖性松弛,而对60mmol/L KCl去极化冠脉无效;格列本脲能有效拮抗E MD对冠脉的松弛作用;EMD使5～30mmol/L KCl去极化冠脉量效曲线呈非平行右移,但对40mmo l/L以上浓度KCl去极化冠脉则失去拮抗作用,最大反应(Emax)不压低.EMD松弛犬肠系膜动脉和冠脉的EC50(-logc)分别为6.2和6.44.结论:为非内皮依赖性血管平滑肌松弛剂,对冠脉的松弛作用约为肠系膜动脉的2倍.

5.学位论文 白纪红 三萜类化合物的舒血管机制及对心肌细胞的影响 2006

目的；探索NO.38样品的舒血管机制和作用特点，以及对心肌细胞的影响，并对NO.24样品以及NO.38、24样品的衍生物NO.116、116-1、117样品进行初步研究，为开发此类化合物提供实验依据。

方法：本课题采用离体胸主动脉模型、离体尾动脉模型、其它来源平滑肌模型、正常及高血压大鼠模型以及缺氧/复氧致原代心肌细胞损伤模型等进行各项实验研究。

结果：(1)NO.24样品10、20、40μg/ml三个剂量组均使去甲肾上腺素(NE)量效曲线的EC50增大，与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05)；10μg/mlNO.24样品组使最大收缩力增加，与对照组相比有统计学差异(P＜0.05)。

(2)离体胸主动脉模型。NO.38样品可使NE及KCl量效曲线的EC50增大(P＜0.05、P＜0.01)，但只引起KCl量效曲线的最大收缩力降低(P＜0.05)；在考

水产药物

察样品对NE两相收缩影响的实验中：NO.38样品主要降低了细胞内Ca2+释放所引起的收缩(P＜0.05)，对细胞外Ca2+内流所引起的收缩没有抑制作用，个别剂量反而增强；内皮完整动脉条中NO.38样品可抑制NE(10M)引起的收缩，但去除血管内皮细胞后样品反而使动脉条收缩进一步增强，二者之间有显著性差异(P＜0.001)；在有一氧化氮合酶抑制剂存在的情况下，样品抑制NE收缩的效应消失；考察样品对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)量效曲线影响时，NO.38样品在10～80μg/ml剂量范围内，对AngⅡ量效曲线无明显影响(P＞0.05)。

(3)离体尾动脉模型。NO.38样品对NE在两种动脉条中引起的收缩，均有抑制作用，但在尾动脉中效果更强，二者之间具有统计学差异(P＜0.05)。 (4)其它来源平滑肌模型。无论是自发性收缩还是有激动剂存在的条件下，各剂量NO.38样品对回肠平滑肌的收缩状况及收缩频率均无明显影响，与对照组相比无显著性差异(P＞0.05)；小肠推进实验：阳性药物硫酸阿托品可降低小鼠的小肠推进率(P＜0.05)，但各剂量样品组与对照相比均无统计学意义(P＞0.05)；离体膀胱平滑肌：NO.38样品与对照组相比，最大收缩力及收缩幅度均无统计学差异(P＞0.05)。

(5)高血压大鼠模型。NO.38样品25、50、100、200mg/kg灌胃后，大鼠的收缩压(SP)、舒张压(DP)、平均动脉压(MAP)及心率(HR)均降低，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)，且具有明显的时效性。

(6)对正常大鼠血压的影响。空白对照组血压及心率无明显变化，NO.38样品2.5、5、10mg/kg静脉给药后各时间点的SP、DP、MAP和HR与给药前对照组相比均无统计学差异(P＞0.05)。

(7)缺氧/复氧致原代心肌细胞损伤模型。损伤组与正常组相比，乳酸脱氢酶(LDH)浓度增加，具有统计学意义(P＜0.001)。NO.38、24样品均可降低缺氧/复氧原代心肌细胞LDH的浓度(P＜0.05)，且呈现良好的剂量依赖关系。但NO.116、116-1、117样品无此作用，与损伤组比较无显著性差异(P＞0.05)。

结论：(1)NO.38样品具有舒张血管活性和降压作用。其机制为：可能作用于电压依赖性钙通道和受体操纵钙通道，并以抑制细胞内Ca2+释放为主；舒血管作用具有血管内皮依赖性，并与NO合成通路有一定的关系。其作用特点为：对周围动脉的作用明显强于中央动脉；对血管平滑肌具有较好的选择性；对正常大鼠血压无明显影响。

(2)NO.38样品对心肌细胞的缺血/再灌注损伤具有一定的保护作用。

(3)NO.24样品具有一定的舒张血管和心肌保护作用，其机制有待于进一步探讨。 (4)NO.116、116-1及117样品对缺氧/复氧心肌细胞无明显保护作用。

6.期刊论文 徐竞.刘良明 钙失敏在大鼠失血性休克血管低反应性中的作用 -中国危重病急救医学2005,17(1)

目的观察血管平滑肌钙失敏在大鼠失血性休克(HS)血管低反应性中的作用.方法取失血性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA),利用离体血管环张力测定技术,以血管环对梯度浓度去甲肾上腺素(NE)的收缩力反映血管反应性,用去极化状态下(120 mmol/L K+)血管环对梯度浓度Ca2+的收缩力反映血管的钙敏感性,观察失血性休克低反应血管是否存在钙敏感性降低以及钙敏感性调节剂血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、胰岛素以及Rho-激酶特异性抑制剂Fasudil是否可以通过调节钙敏感性来调节血管反应性.结果失血性休克后SMA对NE的反应性和钙敏感性均显著下降,表现为NE的量-效曲线明显右移,NE的最大收缩力(Emax)和-lg[EC50](pD2)降低(P<0.05或P<0.01);Ca2+的量-效曲线明显右移,Ca2+的Emax和pD2降低(P<0.05或P<0.01).具有钙敏感性增强作用的AngⅡ(10-9

mol/L)可使NE和Ca2+的量-效曲线左移,使NE和Ca2+的Emax增高(P<0.05或P<0.01),而具有钙敏感性抑制作用的胰岛素(100 nmol/L)可使NE和Ca2+的量效曲线右移,NE和Ca2+的Emax降低(P<0.05或P<0.01),Fasudil预处理可消除AngⅡ对NE诱导的血管收缩反应的增强效果,降低钙敏感性.结论失血性休克血管平滑肌细胞存在钙敏感性降低,血管平滑肌细胞钙敏感性降低在失血性休克血管低反应性的发生中起重要作用.

7.学位论文 夏满莉 桑叶提取物的血管药理学效应及其机制 2006

背景：桑树(MorusalbaL.)分布于中国、日本和韩国等国，在我国各地大多有野生或栽培，以江浙一带居多，桑叶主要用于喂养家蚕，同时也是我国传统中药之一，临床上主要对盗汗、失眠、糖尿病、高血压等有较好疗效。现代药物分析研究表明，桑叶含N-糖化合物、芸香甙、槲皮素、氨基酸、维生素及微量元素等多种化学成分。其中的主要成分槲皮素具有明显的血管舒张作用。我们在筛选扩血管植物药成分时发现桑叶提取物有明显的血管活性，因此，本实验在离体大鼠胸主动脉环模型上，研究桑叶提取物(extractofmulberryleaves,EML)对血管的药理学作用及其可能机制。 目的：

探讨桑叶提取物对离体大鼠胸主动脉环收缩张力的药理学效应及其机制，初步了解传统中药桑叶临床上用于降血压的药理学基础。 方法：

1、胸主动脉环的制备

迅速取出胸主动脉条上段，置于4℃的Krebs-Henseleit(K-H)液中。小心剔除其周围结缔组织后，将血管剪成3mm长的主动脉环，迅速悬挂至10ml离体血管环灌流装置中，灌流液温度37℃，并以95％O2+5％CO2饱和。生物信号处理系统记录血管环张力，先以0g张力起步，稳定20～30min，逐步调节至最适张力2g，每隔15min换液一次，平衡1h后开始实验。加入KCl6×10-2mol/L，重复三次，以激发血管环活性。以Ach检验血管内皮是否完整。 2、离体心脏Langendorff灌流及左室功能评价

迅速取出心脏，转移、固定于Langendorff灌流装置，以K-H液行常规恒压灌流(76mmHg)，灌流液温度37℃，并以95％O2+5％CO2饱和。通过生物信号采集处理系统记录左室收缩曲线，并观察最大左室内压、最小左室内压、左室发展压、心率和冠脉流量。 结果：

1、EML对KCl和PE预收缩的主动脉环张力的影响

当KCl(6×10-2mol/L)引起大鼠胸主动脉环的收缩达最大幅度后，累积性增加EML浓度(0.25～32g/L)，发现EML对内皮完整和去内皮的血管环均有舒张作用，且呈浓度依赖性，在有内皮和去内皮血管环的EC50分别为6.2和6.0g/L。在高浓度EML，无内皮组的张力降低程度大于有内皮组(P＜0.05)，但是，采用与相应对照组的变化百分比，无内皮组的张力降低与有内皮组无显著差异(P＞0.05)。

当PE(10-6mol/L)引起大鼠胸主动脉环的收缩达最大幅度后，累积性增加EML的浓度(0.25～32g/L)，发现EML对内皮完整和去内皮的血管环均有舒张作用，且呈浓度依赖性。在有内皮和去内皮的血管环的EC50分别为6.5和6.4g/L。 除特别说明外，以下实验在去内皮的血管环上进行。

2、EC50浓度的EML对KCl或PE预收缩的主动脉环张力影响的时效曲线

预先用KCl(6×10-2mol/L)收缩的血管环，在收缩达稳定后用EC50浓度的EML(6g/L)处理30min，可使收缩曲线下移，最大反应降低。 预先用PE(10-6mol/L)收缩的血管环，在收缩达稳定后用EC50浓度的EML(6.4g/L)处理60min，可使收缩曲线下移，最大反应降低。 3、EML对主动脉环CaCl2量效曲线的影响

在无钙K-H溶液中，随着CaCl2的浓度(10-5～3×10-3mol/L)增加，预先用KCl(6×10-2mol/L)或PE(10-6mol/L)处理的血管环呈浓度依赖性收缩。而用EML(6g/L)或(6.4g/L)预处理30min，可使CaCl2量效曲线下移，最大反应降低。 4、维拉帕米预处理下EML的血管作用及其机制

在去内皮的血管实验中，经L-型钙通道阻断剂维拉帕米预处理30min，在PE引起血管收缩的基础上，EML(6.4g/L)不但不引起舒张，反而进一步收缩血管(P＜0.01)。ryanodine受体阻断剂钌红可以去除EML对经维拉帕米预处理后PE引起收缩基础上的进一步收缩，而IP3受体阻断剂肝素不能去除EML的这一作用。在内皮完整的血管实验中，经维拉帕米预处理后，在PE引起血管收缩的基础上，EML也进一步收缩血管；与去内皮组比较P＞0.05。 5、EML对心脏左室功能的影响

在Langendorff灌流的离体心脏中，稳定15min后，用50mg/L的EML灌流心脏15min，再经K-H液冠流15min，与对照组比较，其左室收缩压、左室发展压、冠脉流量增加，左室舒张末压和心率降低。 结论：

1、桑叶提取物对血管呈非内皮依赖性的双重作用，其舒张效应大于收缩效应。

2、桑叶提取物产生的舒张作用可能是通过抑制电压依从性钙通道和受体依从性钙通道减少Ca2+内流入血管平滑肌细胞而引起血管环舒张；其收缩作用可能是通过激活内质网ryanodine受体，引起内质网内Ca2+释放引起的。

8.期刊论文 谢健.吴嘉宾.杨晓春 胃镜检查中伍用小剂量芬太尼丙泊酚半数有效血浆浓度的影响 -重庆医学2006,35(3)

目的测定伍用芬太尼1μg/kg静脉注射用于患者胃镜检查时,国产丙泊酚靶控静脉输注的半数有效血浆浓度(EC50).方法 119例择期无痛胃镜检查患者

水产药物

,静注芬太尼1μg/kg,2min后,丙泊酚血浆靶浓度从3μg/ml开始,意识消失后行胃镜检查.结果所有患者均在满意的麻醉下接受胃镜检查,无明显不良反应发生,从量效曲线可得出本研究中丙泊酚的EC50为3.9μg/ml.结论国产丙泊酚靶控静脉输注复合小剂量芬太尼静注用于胃镜检查可获满意麻醉效果,丙泊酚的EC50为3.9μg/ml,高于其他报道.

9.期刊论文 安杰.陈长华.关兵才.唐明.余承高.李之望 5-HT2受体介导大鼠DRG神经元膜GABA-激活电流的增强作用

-药学学报2005,40(1)

目的探讨5-HT对大鼠DRG神经元膜GABA-激活电流的调节作用及其机制.方法在新鲜分离的大鼠DRG神经元标本上,以全细胞膜片钳技术记录膜电流,用排管快速换液装置行胞外给药,以胞内透析技术分析信号转导途径.结果给予GABA可使多数受检细胞产生浓度依赖性内向电流(IGABA).预加5-HT,可使IGABA增加.此效应可被5-HT2受体特异性激动剂α-methyl-5-HT(1×10-6mol·L-1)所模拟,被5-HT2受体选择性拮抗剂cyproheptadine所阻断.在部分细胞,5-HT本身可引起由5-HT3受体介导的快速内向电流,但并未发现该电流与5-HT对IGABA的增强作用有必然的联系.从GABA激活电流的量效曲线可见,预加5-HT后和对照曲线相比,阈浓度不变、EC50值相近,IGABA最大值增加33.6%.胞内透析GDP-β-S或H-7可取消5-HT增强IGABA的效应,而透析H-9无效.结论 5-HT可增强GABA-激活电流,其机制为5-HT2受体激活后通过PKC引起GABAA受体胞内磷酸化所致.

10.学位论文 徐竞 钙失敏在大鼠失血性休克血管低反应性中的作用及其调控分子 2005

严重创伤/休克失代偿期常出现血管的低反应性，主要表现为全身血管对缩血管物质和舒血管物质的反应降低或不反应，目前研究发现它可能与NO水平增高、血管平滑肌细胞(VSMC)钾、钙通道功能失常等诱发的NE、Ang-Ⅱ、内皮素受体失敏以及细胞膜超极化有关，但抑制NO、改善钾、钙通道功能、恢复受体敏感性以及细胞膜极化状态并不能完全逆转休克的血管低反应性。近年来研究发现严重创伤、休克后心肌细胞存在钙超载和钙失敏

(calciumdesensitization，即心肌细胞收缩蛋白对钙的敏感性降低，收缩力/钙比率降低)的现象，致使心肌细胞对以增高胞内钙离子浓度[Ca2+]i为主要作用机制的传统强心药不敏感。本实验室以前的研究发现休克后血管平滑肌细胞同样存在钙超载现象，虽然休克后血管平滑肌细胞的胞内钙并不低，但血管反应性仍然是低的，因此推测休克后血管平滑肌细胞可能存在钙失敏，钙失敏可能在休克血管低反应的发生中起重要作用。这方面目前国内外尚缺乏研究。为此本研究利用大鼠失血性休克模型，以肠系膜上动脉为研究对象，研究了失血性休克后大鼠血管平滑肌是否存在钙失敏，钙失敏在大鼠失血性休克血管低反应性中的作用，以及Rho-激酶、PKC和PKG对钙敏感性的调控作用以及可能机制。

主要方法：取失血性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA)，利用离体血管环张力测定技术，用血管环对梯度浓度去甲肾上腺素(NE)的收缩力反映血管反应性，用去极化状态下(120mmol/LK+)血管环对梯度浓度Ca2+的收缩力反映血管的钙敏感性。实验分三部分，第一部分实验观察失血性休克低反应性血管是否存在钙敏感性的降低，以及通过观察钙敏感性调节剂血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)、胰岛素和Rho-激酶特异性拮抗剂fasudil是否可以通过调节钙敏感性来调节血管反应性，以证实钙失敏在休克血管低反应形成中的作用。第二部分观察Rho-激酶激动剂Ang-Ⅱ和拮抗剂fasudil、PKC激动剂PMA和拮抗剂

staurosporine、PKG激动剂8Br-cGMP和拮抗剂KT-5823对失血性休克血管钙敏感性的影响，以了解Rho-激酶、PKC和PKG对钙敏感性的调控作用。第三部分观察MLCP拮抗剂CalyculinA对Rho-激酶、PKC、PKG调节失血性休克血管钙敏感性的影响，以探讨Rho-激酶、PKC和PKG调控钙敏感性的可能机制。 主要结果：(1)失血性休克后低反应性血管存在钙敏感性下降，表现为失血性休克后SMA的NE量效曲线明显右移，NE的最大收缩力(Emax)和pD2(-log[EC50])降低(P＜0.05，P＜0.01)；Ca2+的量效曲线明显右移，Ca2+的Emax和pD2降低(P＜0.05，P＜0.01)，说明失血性休克的低反应血管存在钙敏感性的降低。(2)具有钙敏感性增强作用的Ang-Ⅱ(10-9mol/L)可使NE和Ca2+的量效曲线左移，使NE和Ca2+的Emax增高(P＜0.05，P＜0.01)，而具有钙敏感性抑制作用的胰岛素(100nmol/L)可使NE和Ca2+的量效曲线右移，NE和Ca2+的Emax进一步降低(P＜0.05，P＜0.01)，fasudil预处理可取消Ang-Ⅱ对NE诱导的血管收缩反应的增强效果，降低钙敏感性，提示钙失敏在休克血管低反应性的发生中起重要作用。(3)Rho-激酶的激动剂Ang-Ⅱ、PKC的激动剂PMA、PKG的拮抗剂KT-5823可增高失血性休克血管的钙敏感性，表现为Ca2+的量效曲线明显左移，Emax分别为0.630g/mg、0.595g/mg、0.624g/mg，均明显高于休克组的0.377g/mg(P＜0.05，P＜0.01)；Rho-激酶的拮抗剂fasudil、PKC的拮抗剂staurosporine、PKG的激动剂8Br-cGMP可降低失血性休克血管的钙敏感性，表现为Ca2+的量效曲线明显右移，Emax分别为0.242g/mg、0.230g/mg、0.256g/mg，均显著低于休克组的0.377g/mg(P＜0.05，P＜0.01)。提示失血性休克血管平滑肌钙敏感性受Rho-激酶、PKC和PKG的调节，Rho-激酶、PKC可上调钙敏感性，PKG可下调钙敏感性。(4)CalyculinA(10-7mol/L)预处理可以进一步加强Ang-Ⅱ和PMA的钙增敏作用，表现为Ca2+的量效曲线明显左移，Emax分别为0.902g/mg、0.998g/mg，均显著高于Ang-Ⅱ组(0.630g/mg)和PMA组(0.595g/mg)(P＜0.05，P＜0.01)，并可部分拮抗8Br-cGMP的降低钙敏感性作用，表现为Ca2+的量效曲线有一定左移，Emax为0.377g/mg，显著高于8Br-cGMP组(0.256g/mg)(P＜0.05)。提示MLCP可能是Rho-激酶、PKC、PKG调控钙敏感性通路的下游分子。

结论：(1)失血性休克血管平滑肌细胞存在钙敏感性降低；血管平滑肌细胞的钙敏感性降低在失血性休克血管低反应性的发生中起重要作用。

(2)Rho-激酶、PKC和PKG对失血性休克血管平滑肌钙敏感性有重要的调节作用，Rho-激酶、PKC可上调失血性休克大鼠血管钙敏感性，PKG可下调其钙敏感性。(3)Rho-激酶、PKC和PKG调节失血性休克血管平滑肌细胞的钙敏感性可能与它们调节MLCP有关。

引证文献(3条)

1.管莉菠.虞方伯.罗锡平.张妙仙.单胜道 几种沼液复配农药对小麦雪霉叶枯病菌的抑制效果研究[期刊论文]-安徽农业科学 2009(16)

2.强华贵.杨占秋 羧甲基茯苓多糖体外抗艾滋病病毒作用研究[期刊论文]-医药导报 2008(10)3.赵炜 二茂铁磺酰胺、环蕃的合成及性质研究[学位论文]硕士 2005

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