2.2.1动物细胞培养和核移植技术

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复习回顾：植物细胞工程采用的技术 手段有哪些？其理论基础是什么？

植 物 细 胞 工 程

所采用技术 的理论基础 通常采用的 技 术 手 段

植物细胞的全能性 植物组织培养 植物体细胞杂交

离体的动物细胞能否发育成一个动物 个体？动物细胞全能性如何？

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是其他动物细胞工程技术的基础。

动 物 细 通常采用的 胞 技 术 手 段 工 程

动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体

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治疗一个大面积烧伤的病人，常常需要 要想获得大量的自体健康皮肤，方法就是 进行皮肤移植，而病人自体皮肤有限， 取少量的自体皮肤细胞，通过动物细胞培养 技术来获取大量健康的皮肤细胞。 怎么办呢？

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一、动物细胞培养1、概念：动物细胞培养就是从动物 有机体中取出相关 的组织,将它分散 成单个细胞,然后, 放在适宜的培养基 中,让这些细胞生 长和增殖.

2、原理：细胞增殖

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3、过程①原代培养

动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官取出组织

定义：是指从供体 获取组织或细胞后 的初次培养。

剪碎(分解弹性纤维)

胰蛋白酶处理 一般为动物胚胎 从年龄看，材

单个细胞加培养液

成块组织不利培养， 分散了做成细胞悬浮细胞悬浮液 液利于培养。 原代培养

或幼龄动物的器 料动物有何特 官或组织。因为 点，为什么？ 这些细胞生命力 旺盛，分裂能力 强

转入培养瓶内培养 ( 贴壁生长长成单层细胞，有接触抑制现象)

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强调一：细胞贴壁过程■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就 贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。

■培养瓶或培养皿壁要求： 表面光滑、无毒、易于帖附。

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强调二：接触抑制■当贴壁细胞分裂生 长到表面相互接触时, 细胞就会停止分裂增 殖，这种现象称为 细胞的接触抑制。

思考：细胞发生接触抑制后如何使细胞继续 分裂增殖？

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②传代培养定义：当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下 来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释, 并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这 个过程称传代培养.(分瓶培养的过程)

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3、过程：

动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官 剪碎 胰蛋白酶处理 单个细胞 加培 养液 细胞悬浮液 原代培养(分装前)

遗传物质 未改变 遗传物质 已改变

10代细胞 细胞株 50代细胞 细胞系 无限传代

传代培养

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反馈练习1、动物细胞工程技术的基础是( C ) A、动物细胞融合 B、胚胎移植 C、动物细胞培养 D、核移植

2、在生物工程中一般都要用到酶，下列酶中 属于动物细胞工程最常用的工具酶的是 ( D ) A.限制酶 B.DNA连接酶 C.果胶酶 D.胰蛋白

酶

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3、在动物细胞培养过程中，使用胰蛋白酶的 目的是 ( A ) A.使动物组织分散为单个细胞进行培养 B.去掉细胞壁成为原生质体 C.去掉细胞膜暴露出原生质体便于细胞融合 D.促进蛋白质水解为多肽 4、在进行动物细胞培养时，通常选用的培养 材料是 ( D) A、衰老退化的动物组织细胞 B、成熟动物个体的体细胞 C、动物的受精卵细胞 D、动物胚胎或幼龄动物个体的细胞

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5、下列有关动物细胞培养的叙述中正确的是 ( B ) A、动物细胞培育的目的是获得大量的细胞分 泌蛋白 B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散 C、细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的 过渡过程中 D、培养至50代后的传代细胞称为细胞株

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一、动物细胞培养 4、动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境(添加一定量的抗生素，定期更换培养液)

2、营养(葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。)

3、温度和PH36.5 + 0.5度 ；PH为7.2-7.4。

补充合成培养基 中缺乏的物质

4、气体环境：O2 和 CO2(95%空气和5% CO2 ) O2作用：进行 有氧 呼吸，提供能量 CO2作用：维持培养液的PH值

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动物细胞培养液的主要成分是什么？ 较植物细胞培养基有何独特之处？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机 盐、维生素和动物血清等。 独特之处有： 1、液体培养基 2、成分中有动物血清等

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植物细胞和动物细胞培养的比较比较项目原理 培养基性质 植物组织培养 细胞的全能性 固体培养基 动物细胞培养 细胞增殖 液体培养基

培养基特有成分 蔗糖、植物激素 培养结果 植物体

葡萄糖、 动物血清细胞株、细胞系

培养目的

快速繁殖、培育 获得细胞 无病毒植株等 或细胞分泌蛋白

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4、动物细胞培养技术的应用：(1)生产生物制品 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 (2)应用于基因工程 主要用于作为受体细胞 (3)检测有毒物质，判断某种物质的毒性 (许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发 生染色体结构和数目的变异。根据变异细胞占全部培 养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。) (4)培养各种正常或病变的细胞，用于生理、病理、 药理等方面的科学研究。 如用于筛选抗癌药物

动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础

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二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 问题 我们能否利用类似植物组织培养获 1使其发育成一个完整的个体？ 不能，高度分化的植物细胞仍保持着全能 性，而动物细胞的全能性会随细胞分化程度的 提高逐渐受到限制，分化潜能逐渐变弱。 全能性高低： 植物细胞>动物细胞

得完整植物体的方法培养动物细胞，

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动物细胞特点？ 分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提 高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这 是指整体细胞而言。

细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有 保持物种遗传性所需的全套基因，而且 并没有因细胞分化而丢失基因，因此高 度分化细胞的细胞核仍具有全能性

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根据动物细胞核仍具有 全能性的特点,怎样将动物细 胞的全能性表达? 利用动物体细胞核移植技术