合理地选择阴性标本。阴性标本可以是未染色细胞,也可以是经同型对照抗体染色的细胞(在实际操作过程中,多选择后者),因此同型对照的选择是所有可变因素的根源。然而,要找倒非常匹配于实验中所用的每种抗体的同型对照通常不很容易。
此外,如果不同实验室所用的阴性对照不同,则他们所确定的阴性细胞和阳性细胞的分界线也不同,导致所得到的“阳性百分率”结果出现差异。即使所用的阴性对照非常合适,确定阴性/阳性的分界线也是有所不同。有人认为应,该将分界线定在假阳性率(即在阳性细胞区的阴性细胞百分率)为1%~2%处,而有人则认为,应在假阳性率为5%左右处。如果要检测的细胞抗原表达量较高(如CD3和CD4等),结合的荧光抗体也相应较多。这样阳性细胞的荧光强度会明显高于阴性细胞。此时,采用上述何种分界原则对结果的影响不大。但如果要检测的细胞抗原表达量较少或很少(如CD62p和CD95等),染色后阳性细胞区会与阴性细胞区部分或大部分重叠,此时分界原则不同,结果会有较大的差异。
事实上,在出现阳性细胞区与阴性细胞区重叠时,尤其对于白血病/淋巴瘤免疫分型,我们应该考虑使用“阳性百分率”来分析结果是否合适,在这种情况下,我们经常会采用寻找表达异常抗原组合和异常抗原量的特殊细胞群,以确定白血病/淋巴瘤的类型,而不关心这些特殊细胞的百分率。因此,将细胞的荧光标记强度与带有标准荧光强度的微球进行比较,在此时显得尤为重要。此外,用流式细胞术进行白血病/淋巴瘤的免疫分型,已经从传统的报告数字结果过渡到