高脂饮食ApoE基因敲除小鼠不同部位动脉粥样硬化(2)

ｌＯ中国比较医学杂志２００８年７月第１８卷第７期

Ｃｈｉｎ

ＪＣｏｍｐＭｅｄ，Ｊｕｌｙ２００８，Ｖ０１．１８．Ｎｏ．７

【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ＡｐｏＥ；Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；Ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｍｉｃｅ

ＡｐｏＥ基因敲除小鼠是目前研究动脉粥样硬化较为常用的动物模型，高脂饮食条件下，形成动脉粥样硬化斑块的时间可大大缩短。现在对于ＡｐｏＥ基因敲除小鼠观察动脉粥样硬化最常用的两个部位是主动脉窦和头臂动脉，二者在动脉粥样硬化的形成及病理特点上有何异同，是本实验的主要观察点，试想为今后的实验研究提供依据。１材料和方法１．１实验动物

６周龄雄性ａｏｐＥ基因敲除小鼠（北京大学医学部动物中心提供，合格证号为ＳＣＸＫ（京）２００２—０００１）３６只，均予以西方饮食（常规小鼠饲料＋２ｌ％脂肪＋０．１５％胆固醇）喂养，分别在喂养分别在喂养２４周、３６周、４８周、６０周、７２周，随机各取６只处死，处死前，禁食１２ｈ，不禁水。１．２血脂情况测定

眼眶取血，静置取血清，采用酶法分析，用分光光度仪（ＵＶ２１２０６，日本导津）测定样本的光密度值，根据标准液与待测样本光密度值之比计算出甘油三酯（ｔｒｉｇｌｙｅｅｒｉｄｅ，ＴＧ）、总胆固醇（ｔｏｔａｌｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，ＴＣ）、低密度脂蛋白胆固醇（１０ｗ

ｄｅｎｓｉｔｙ

ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ—

ｄｅｎｓｉｔｙ

中杉生物科技有限公司１．３病理观察

断颈处死动物后，ＰＢＳ灌流，冲洗，４％多聚甲醛固定，２０％蔗糖脱水，取主动脉窦部和头臂动脉ＯＣＴ包埋，液氮速冻。７ｇｍ连续冰冻切片，每１０张切片取一张行ＨＥ染色和油红“Ｏ”染色。ＩｍａｇｅＪ软件分析测定脂质所占斑块面积比。每只小鼠共取６张切片计算均值。

１．４

ｙｏｎ

ｋｏｓｓａ染色

冰冻切片水化，０．５％硝酸银孵育，阳光下直射

１

ｈ，５％硫代硫酸钠洗，苏木精复染，脱水封片。

．

１．５统计学分析

用ＳＰＳＳＩＯ．０软件包建立数据库，组间比较用Ｏｎｅ．

ＷａｙＡＮＯＶＡ进行统计分析，各指标用孟±ｓ表示。

２结果

２．１血脂与体重

与６周龄ａｐｏＥ基因敲除小鼠相比，高脂喂养ａｐｏＥ基因敲除小鼠的血清总胆固醇水平、低密度脂蛋白水平随着时间迅速增加，以７２周龄时升高最为明显（Ｐ＜０．０１），甘油三酯水平升高水平相比并不明显，以６６周龄时为最高（Ｐ＜０．０５）。高密度脂蛋白水平有所下降，但变化并不明显。体重随时间明显增加，但５４周龄后有所下降（表１）。

ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，ＬＤＬ－ｃ）、高密度脂蛋白胆固醇（ｈｉｇｈ

ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ．ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，ＨＤＬ－ｃ）等。试剂盒购自北京

表１高脂喂养ａｐｏＥ４小鼠不同时间血脂与体重情况（ｎ＝６。ｍｍｏｌ／Ｌ）

Ｔａｂ．１

ＴｈｅｐｈｓｍａｌｉｐｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｗｅｉｇｈｔｓｏｆａｐｏＥ—ｍｉｃｅ

ａｔ

ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｔｉｍｅ

ｐｏｉｎｍ（ｎ＝６，ｍｍｏｌ／Ｌ）

注：与６周龄比较，’表示Ｐ＜Ｏ．０５，“表示Ｐ＜０．Ｏｌ。

Ｎｏｔｅ：ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ６ｗｅｅｋｓｏｌｄｇｒｏｕｐ，。Ｐ＜０．０５，”Ｐ＜０．０１．

２．２动脉粥样硬化斑块病理学观察

体试镜下可见，３０周龄时ａｐｏＥ基因敲除小鼠。主动脉弓部及其分支动脉粥样硬化病变非常明显。尤其无名动脉及左右颈总动脉开口处最为显著，５４周龄后病变更加严重（图１）。显微镜下观察，与主动脉窦部以纤维斑块为主不同，无名动脉动脉粥样硬化病变以粥样斑块、复合斑块为主要表现，脂质成分较丰富，细胞成分减少，大量泡沫细胞崩解，纤维

及基质成分增加，斑块深部为大量无定性坏死物质（图２、图３）。

２．３动脉粥样硬化斑块形态学分析

２．３．１斑块大小：与主动脉窦部相比，各周龄ａｐｏＥ基因敲除小鼠无名动脉粥样硬化斑块面积占管腔面积更大，６６周龄时达到７８．３％±４．９％，病变更加严重，但脂质成分占斑块比差异不明显（表２、表３，图

２、图３）。