基因芯片及其在突变检测中的应用1

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54 第1 8卷第1期

学研究医学生报 J our n al fo M e idc a l Po s gtr d u a at esV 1 0. 18 No 1

.20 05年 1月

Jan . 2 005

综述

基因片及其在突变检测中的芯用李应恒金，冰综述陈 (南京区军京南医院总临药床科理，苏江京 2 1南 0 00 2)摘要：基因片芯技是近年术起兴的一项重要生物的技。术作者绍介基了因芯片的起源、发展及其基本操作，并介绍了铺瓦阵式列、接等直位因特异基荧性检测法、光辅助核苷酸寡链、连接酶检反应测、肽核酸技术等几不同种芯技片在术变突测中的应检用，并探讨了基因片芯技术在合理用药的应中前用景。 键关词：基因片芯突；检变测；合理用药中分图号类 R: 9 6 5 2 文献.标码识： A 文章编号： 1 00 -8 81 9 ( 290 0 5 ) 0 1 - 0 50 4 0-5

Ge ne c h pi a nd i t u s se i tn e h e tde c t oi n o f u mta t i n osL I Ji n —h e gn,C HEN Bi n r eg v i e iwn g (D ep a rtm en t o f C l i ni c la P h r amac o l og y, N a n i n g Gje n e a r l H o s p i tal o f N a n ji g n i l M ita r y C om ma n, Pd L,A aN n j i ng 2 1 0 002, iJ an gsu C,h i n a ) bAs t r a c: t Ge n e c h i p is a n i m po￣a n t b io l o gi cal t e c h no l o gy wh i,c h is de e v l poi n g q u c ki l r e cye n t y lI.n

hti s a r t i c l e, ew e rv ie wed t h e o r i g n,id e evl o pemn t, ba si c o pe r a ti o n of g e ne c h i p. e vS r ae l k i nd so f e n ge

hc ip s i nc l d iu n gti l e d a

r ray 。d i r e t c la le le ps cei if c f ulo e rs ecn c e t arg e t i n(gD A FTa r r) a y l a,b e l e d aux il iar o ly i g on uc l e o tid es a r y,lai g a s e d e t e c ti o n re cat i on a ra,a nyd p p te i de n u lc ei c aci d ar ay we er in t ro d c u d e sa e xam lp es fo r t h ei r u s e i n u mt a t ion ed te ct o ni. T e h p ro s p ec t o f th e u se of g ene c hi p i n op t i i m zi n g r u d g t h e r— pay w a s sl oa i s d u scs e d. Ke y w ord : G e s en h cip; M ut a t i o nd e t ce t oin ; O pt miiz i gn d g ur h ter a py

0引

言阵列芯片或寡核苷聚酸 芯，是片生物芯片的 种一¨ 。因芯片采基大用量特定寡的核苷片酸段或基因段作为片探，针有规律地列排固定于玻璃或尼

基因片技芯术对是DN A交、杂分型测序技和术等传统物技术生的重创新和大飞跃。由基于因芯片 用微采电子学的并处行理高密度和集的概念成，具龙基底等持物支上，成二形阵维列，待测与标记的样品的基因按基配对原理进行碱杂交，从检而测特定因基。

有高效、高息量信等突出优点这。项术技的出现虽仅短短几年， 已但受到泛广重视。1基因芯的片概念发展和概

况 2多0前， S年 u toh e r n 发经现过记标核的分酸子用于可检结测在固相支合持上物的核酸，次引入首克了隆杂与交号间信一对一的映关。2系0世纪 08年代期中，有人将聚八核苷酸寡针固定探尼龙

基因在芯片 (g e n e c h i )又p称D N芯片A、D NA微

收稿 E t期：2 0 40 - 0-8 -24;修订期日： 2 00 . 140 . 25 金项目基：家国自科然基金学助资目(批准项号： 30 4 7 20 5 )5

作

者简介：李金 ( 1恒 5 1一 9 ),男，江苏阴淮人，任药主师，医学博士，从事临床药理专学。业

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李期恒金，等

基因片及芯其在变突测检中的用应

5 5

膜上进行杂 测交序。]随无孔固着相支持物的使用和高度寡密核苷酸合成的这两项关技键术开展的出，现了正意真义上的基因芯片。1 9 8年 8,B ai n s 等将短的 D NA片段固定至持支物上，反以杂向交

合要设理异置核种酸行实验平、酸质核量测对照检、封闭对照、归整对照，化以保证结果准确性和的重复。性

2 . 2 . 3像分析常成用的芯成像分片析统系激有光聚焦扫共仪和描电荷合耦 (C C )扫描D。仪前者的激光光可产源生激发不同光荧料染的光当。探针的式方行进列序测定2 0世纪。90年代，美国 M f y — e t mi rx公实司现 D了 N探针A子分的高密度成集，通与样过的杂品反交应获取其酸序核信列息j当。今,随着生命学科众与多相关学科 如计(算机学、科材料科学、微加工技术、有机合成技等术 )的猛迅发，为生展芯片的实现提供了物践上的实可能性微。

与待测核完酸正全配对常时荧光信的强度是号有具单个或 2个错碱配基针探的 5 3~倍 5而且，荧信光号的度还强样品中与分靶的子含量一定的线性关呈系。C C扫描D仪图将分像成若干块，测小定每小个块中平均的荧光度强，而进求阵列中个点每相的对光强度荧通，计过机算理处获得结果还。有人自己型列阵术由于技采取玻片和璃片硅等体载， 而使从芯片用达能到正的平行实真验、微化、型多复用路和

动化。自这些点特使，能其进够行早期术所技不完能成的些一用应。基因芯片2的制备和基本作操 2 .1基因芯片的制 备 。基因片的制芯作过程包

设计或用利已有的共聚焦微显镜、光显微镜等改荧装芯为片描装扫。置 C e uhn g等自行计构建设了激光扫描仪可，同时定双测荧色光料标记染的物生芯片。

以下括个几骤步：探针①设计的与成；合②芯片支撑物的处理；③ D N阵列A点印；芯片④后理处，包括重新水化及干燥合、 u V一交联、闭封及性变；⑤芯片质量检测几个。步骤最关键中的是 D A微阵列N的点印，前目分为种两主要

类型：原位成合( i n s it u sy —n ht es si )与合后成以量点样技术点微样。原位合微成3基因芯在片基因突变和态多性检测中的应用

从自P C R技问世术来以，基突因的变检测法方已取得了大很进展的。这方法多些在费存时、价格高、能不时同检测大量基因缺的。点基将因芯片应用于检测因基突，不仅变可准确以确定变位点突和突类变型，而且更主要的是它快速高的是效前当他其方所无法法拟的比。它以同可检时测多基个因至整个乃因组基所的有变突，突变是测技检的重大突术。破型阵列采用阶梯的方式在原位法合成核，酸每一轮加一个核苷至断不长的链增上直，至到达所需的长

度。微而点样量技术则是，少量将经 PC R增扩纯化和后的子分( c如D NA ),用不同方转法移至片的芯指定位置上。另外，也出现了些一新方法，如 K i u— m

3 1.铺瓦阵列(式t i el d a r ary )铺瓦阵列设式计原基于理交杂测序 ( es q u en ci n g b y h y bir d zia t io n, SBH ),对于每一位点，用四条探针与分待析列序同

r等a¨ 未用修经的饰寡苷核酸针与经探碳二胺亚处理的玻表璃面，紫外线在作的用下合结，发现紫外

杂时交，格控严杂交条制件，使完互补全针探的杂交信号最。这个强方法对在一某 D NA段片中能可生的突发不变了解时尤为用适。Cr oni n等。。分用两别基因种片检芯囊测性维化纤跨膜转调导节基因 ( c ys t i c if b o rs s i t ar n se mm b a nr ce nod uc a t nc e e gr ul a t o r,

能线信使号度密增加 7倍，但并改未信变分号能辨力，单苷酸核多性态 (S N Ps)的x配￣/错配号信比也提有高。2. 2 因基芯的片基本操作

2 . 2. 1测待核的酸备制测待酸一核般从为研所样本究提取中的 D N或 A N AR。由于测灵检度所敏，需限要对样进行品 PC扩增，并对扩增R产进行

C F物I 'R )突的，其变中一个片芯包含 1 4 80个针探，检了测 C/F 'R基的因 1第0和 1第1外显子的已知突变,包括缺、插入失单碱和基置。其换结与 P果C R—

R FLP的析分果完结一全。致有采取人7 、9、 1 1、 1、3 1 5 、1 7 bp的核苷寡酸针， 3探设端有碱基错配单，以不称对 P RC获得荧的光标记单的链目标 DN, A采用此成法功检地测了人细胞白原抗.A( hu m a n l ue— k coy te a nt ig en H,L A— )A的2 60 1、 2 092、 02 06等基位

光荧标记，方法包括端末记标随机和插入，前者在是 C R引物上标记P有光探针荧；后将核者苷酸记标荧光，在PC过程中R掺，人量荧适标记的核光酸苷。 .2 2 .2杂交应反基芯因杂交反片应程过十分简

便但杂交条件。选的需考择多虑方的面素因，杂如交反体系应中浓盐度、探针GC量和含带所电、荷探针芯与之片连间接臂的长度种类及、测检基的因二结级构影的响。由于基芯因片影响素很多因，所以因… 目。,所前采辅用瓦技式术可以相在较对的少短探针次一检测出长数千碱基对达的目标 N AD中的所 有S N P 1 2 。]

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5 6

医学究生学研报20 0 5 1年月第1卷8 3 .2 直接等位基因异特性光检测法荧( d i r e c t a l- l e l . e s ep ci i f cl u f o r s e ee ne t ar ge t in g D A . V 'I )本法利用的探针交。杂应用此可以法方便地对目标DN A 子进分行记标，止阻检区测二域级构结的成，覆形盖过的结合区域，多且并由辅助寡核酸于链的存在成形续连杂，交从而对末端配的错探针具有较好区的分力 (图2 )能。 R g e oli 用此法检o测了 FC TR四个的常见最致病突变 ( Q 4 9 3 X, 1A5 0 7,AF 5 0 8, V 5 2 F0 )获，

等位基因异特性寡核苷酸探 (针a l le l e s p eci i f c o l g i - o nu c ol tid e s ,AS O 示)差杂交的理原，需对于要目标等基位的因突位点变及型有充类分的了解。通过选 适当的择寡核酸探苷针严格和控制杂条件交，够能检出单碱基突测 (图1变)。括包玻在上制片备 SAO

得了好较的效。

平果点阵面； P C R扩增测待样并品荧用标记；标记光产的物与A O点阵S杂交；测基检突因

变。于由 SAO 寡核苷酸针探仅在存个碱基差异一容，易生产假阳或性阴性假，故条要求严件格。 eBa t tie等发现相固支持物表面理物化学质、性探针与支持表物面之间化连学接物接物连璃表玻面长度的组成和阵列表、探针面密度的、标 D目 AN分的长度子、探针的度和序列、长杂交清与条件等洗对芯检测片效都有显著果响。影Jo e等¨采 D用A F T技,术设计了不突变位同的 A点 SO型探，可以一针次检测出性 N A T所有的基 2型。因3 3.辅助寡核苷酸链 R o ge l i等o针¨对单链 DNA上易成二级结构形区域的计设了辅助核苷寡标记的P CR产物

核甘酸寡探引接连物璃表面玻图1直接等位基因特异性荧光检测意示图 F i u rg e 1 A sc h ema t i c di a rga m Dir ec t Al l e l e - - sp e ci ci f l f our es - -酸链，并对进行标其记，使两先者结，合与再芯片上 G C A C AG q’ G G AA G M’,AI '. I' CA… I I c T (:… I F TCC A G… I I‘ Irr C C ,I—c n e e t ar egt i n( gDA FT )

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ct g g tc c a cLt tt a ac gat aag ga c L ca L a cac g a ccg L gg Laa LL ctt, L

( CF 1 6 8 )

( I C 1 O W ) c a a ga￣ t ca@( C I I ()M ) g ac a a g u@a( CI I 96)

( IC l I W)d a tgta g a a @ C( I I I M )tj a￣g aa a cc @ a cc a@ ( C I? 1 2 w) gt a ag

( C _F I 2 M ) a g ta g cc c a@ T l - C C1‘A r ( :^ FGA A q’^ 1 ’^( ^:, I’^C^ (:A A (C (- I,’ C^‘rC A AA(: CA r (; CAC A( ' _ ’I^ ( ^: ( ^^:(( ’ r a

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C I( l 6 4)图 2辅助寡酸核链置位及序列F i u gr e T h e2 s e q eu nc e a n d p o si ti o n o f al e b led a uxi li r a y o i glo n ue l e t i d o e s C F 61 . 8CF1 6 9. F 1 C 07 a n d C 1F 46 r e p re se t l ab el ed a u i x ila yr oli g o nu lc oe t i eds

W:野生型； M:突变型；:@放射标性物记

3. 4 接酶连检反测应 (1 i ga s ed et e c ti o n e ra ct i on。与从样本中获的得单链DN A杂交，两者的缺间口，

D LR )L DR是近出年现的突检变测术技，¨利用 有只探 3针端碱与目基序列恰标好配，对才能连在连接只能酶将格配严对两的个碱连接起来基原的酶催接下连接化来起阵列。交后杂未结的标连记探理。方法简述其如下：设计针探使 3为突变端位， 针点被洗易，而脱连接酶经连结则的在留阵列上，从而而5 端固定在体载上形寡成核苷阵列；酸一另标条得以检 (图出 )。3LD R法常灵敏非，用可低于度丰记有荧的探光针 5 端恰与突变位相点；接两者共同的突变点检测。G e rry等以 -K ra s基因为模型，采

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第1期李金,等恒基因芯片及在突变检其测中应用的。 7 5用 C R P/ LD结合微 R阵列的方法准确地检出肿瘤组检测织中的所有突变他。们的研究还显示 ,即使突量变仅不野到生型的 1%仍可用，此法出检。B us ti等

4基因片芯术在技合理药用中应的前用景. 1药物因组学与基合理用药药物基组因学研用L D R芯片检测同细不菌1 6 S r RNA,从对而不细同 4菌行鉴别进，获得良好的结果。法此也可于检测用究决定药物行为和感敏性全基因的谱，阐明决定药耐药基的因突变

。物反应个体异差的根本制。机不同的药酶肝可能对药物生产活或灭化活作用，因对药而动代学及力药理用的作影响不也同虽然。被动转运细胞是摄药取连酶接

及某些物代谢物的要方式，主但是们人近来发现膜运转在药物经胃体道吸肠、收经胆汁和泌系尿统排泄、组向分织布(如脑部睾和 )丸转及进入作运部用位如(心管血统，系肿瘤细胞，病原微物)生中到起重==亡=====:>

作要。用多数药与特物靶蛋白结合而发殊药挥理作图3连接酶测检应反芯原片理示意 图 F ig u r 3 A s c h meat i cd ia r ga m o f LD R c hi p

用这些，蛋靶白包受括体 、酶或与信号转导、细周胞期制等控有的蛋关白 (质 1表)。子研究分示揭：许3 . 5肽核 酸技术肽核 (酸p e p tid e n uc l e i c a c id ,多编码些药物作用靶这位的因表现基基为多因态这些基多因态性会影响物治疗的药感敏性目。 PNA )是以中酰性胺为骨键架一类新的的 D N类似A性

,明确了已许多药代谢酶、物膜运体转、蛋白靶具物。以甘氨它酸 (2一氨基乙基 )构结元单骨为架碱，前，而其许中的多临床意也得到义阐了基通过甲亚基羰连接于主基架。结构上与骨然核天有基因态性多，酸具有相似性，具且有一独些特优点的核酸：探和针明 。理合药的核心是要用根能据患的代谢者、排泄检基因测带均负电荷，因此它们之的杂交间结合不

稳定，而 N A不P带电 ,而因 P A N D— NA、 P AN—R NA不及药物对反应个的差体为每异例者患选适用的药择充以分发挥药物对体的作用机。由于遗 在存相排互斥，具很有高的热定稳；性浓盐度对 P NA物和剂，量

因而通过复合物形成影的小响；错配碱基更易导致 P N A—D N A 传因素患者个在差体异起中着重要作用，合复物稳定不，从而杂交在检测选择性中更高。药物此基因学组研掌握究患者相药物代谢关酶和体受不仅可增加首剂以药物的效有，性还减可外， P NA防止检可基测因级结二构的形成因。此， 基因的型，有助于真正到合理用做药。 P N A应用于基因芯片更有利于碱基单错配基的因轻患的者不良反，表1应影药响代物谢和效疗的遗传多态

性 T a b l e1 C l i n ic a lly r e lev a tn g nee t ic po ly m or ph i ssm i ln fu en c i ng dr u g met a b ol ism if nd e ffe cts

4 . 2 因芯基技术片的应用前目景前，对物药基因相组基关因态性多的要检主方法包括测序测、 P C— R

有作操较为繁琐和便于同时大不模规行基进因变突分析的点缺。 R FLP法和 PC R— AS法A这。些法各方具特点，但都与合用理药有关的酶和受体很多，而每且酶种

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m 58 医学研生究学报2 0 05年1 月1第8卷 y hbi rd i za i t o n t o h h.i gd en s it y o l i og n uc le ot i d e a r ra y s[ J .N a] utr e B iot ch en o l 1 9, 9,61 (41 3 :1 )67 5— 16 08. 和受体只不括一包影响种活性等的基因位，也不可能用统传方法一性次检测。基而芯因片技的术快速、高量平通操作行的点特，能足检满测的要求人。在们这方已经面行进了大量益有的探索美。国 f m eit ri 公x司设出计商品化的 Y C 2 DP 6、CY P 2C 1 9多态性检测芯片，这芯片种可以检测出C PY2 D 62、3 4、、 5、 6、 7、 8、9、 1、0 1 1突变

[位 6] 常智杰，淑张平 .基因芯分析片技术[ J].生物学通报， 2 00 0, 5 3 (7 ):4 _ 7 . 『] 7Ki mu m N, dO a R,I n a ki Y e t 1a . A t tac h e m t nf o o li og n cu l e o t i d

e por be s to p l yo ca rb o d ii imd e c oa dt g l e a s sf ro mi c rn o a'a y ap p li ca‘ ti o n s[ J] N.u c eli c Ac i d s R se, 020 , 432 ( 7 ): e 6 8 .[]8C ehu n g V G, Mor l e y M,Ag ui l a r F e t a 1 . Ma ik g n a nd r e adi n g

m‘ i cro a c a ry[ sJ] . a Nt Ge e tn, 19 9 9 2, 1 S (op p l 1 ):1 5 1 9— [ 9] .王勇方.基因点突检变测技术研进展究 J[]国.医学外 遗学传分册， 20 0 2, 25 ( 4) 1 9:2— 19 6 .

点及C Y 2P C 19的 、2 3型突变点位。每小时可以对4样本进行个基分因。型 Yoo n等应用种这芯片研究韩了国 C人 Y P2D 6基因型与罗帕西药汀代动力的学系。关国乔治美敦学大医疗中心发开的芯片，以对可种多C YP 45 0进行检测，在合理用药中可以发很挥作大用。但由芯于只涉及片少数酶故，前尚目见未应于临用床。 由于C Y P4 5检 0取测得成了功，些企业一经已

[1 0] H a ic a J G, W o sk i S A,F i dng aa J et 1 O .E n ahn dc e h i gh d n se ity o h‘ g nou c l eo t id e r ra a y— b a s e d se qu e n e ca n al y i s u ss in g modi fi d e un cl e‘

os id te r i h o p p hs t ae s[J] . uNc l ie c A c d i s e R,s 91 9 8 2,6 (2 1): 497 5 -4 9 82 .[ 11] W ang , DGa o H, hZng a R e a t1. S i ng l e n cu le o i d c t p ol y m o r p i h sm d is r c mii na t i n o a ssi s et d yb iprm v d oeb a s e s t a c k in g y bh i r dia tz i o n u— si n g o l ig o n u l ec ot id e m i r a cor r ya s J][.B io t hce i qnu s e,20 0 3, 3 5( 2 :) 3 0 -03 02 .

[ 1 2 D] r m a anc R,D r m n a c a S,C h u i G e t a 1 .S e qu e cni n g b yh y bi r d ia —z i o t(nS HB): a d v tn a ag e,sa c h i e ve m n et s, nd a op po r t n

ui i t e[sJ] . Adv B oic he m E gn B o itc h neo l,2 00 2.7 7:7 5— 10 1 .准备始开供直提接对针者的药物患因组学检测手段基。物药代酶谢基因态性对多治疗性淋急细胞巴性白血 (病 acu t e yl mp h o l b sa ti c le uk e m i,a A LL )药物的[1 3] B ea t ti e GW,Me ng L,T u n e r r LS e t 1 o . y H ib rdi ta i o zn D f o At N ar g-e ts t o l gs a s t e—t h e red ol i g o nu lce o t i d e p o r e b[ s J]. Mo l B o i e ct hno l , 919 ,54 ( 3 :)2 13 2 - 5 2 .

用作不良反和应有深远影的，响个体给化药以改可善疗治另。,外们也已人明确白血病的淋巴母细胞[1 4]H u an g J) (,Mc h en rs D W, ie se R e ta 1 H .i g h— t rho ug h pu t g e n m o ic a n d p r ot e moi c ana l syi su i ns g mi crar r oy g et ch on log y[ J .C]l inC h e m, 20 01, 47 ( 10 ): 9 1 2— 119 1 6 .

预是的后要重指标 ,为可选择治疗强度供帮提 助j而，且胞因子细和其决他定患者病原对生物敏感性的因子也微在存因基态多性，心管系血、内统分[1 5] M l a d on a od— Rd ro i g enz R,E sp ino s a l—a r a ,CMl ai xt o—S u a r e A e t 1 O . y Hb i r ida t iz on f o gl as s— eth t e e r d ol i go n u cl e o i tde p o r be s ot t a rg et

s tr an d s p r nne ae l ead w i h t l ab el d e a u x l i ai ry o li g o n o c le o it d e s J][. M ol B iot e c h n o,1l9 9 9. 11 (1 :)1— 1 2.[ 16] B o rdo ni R, Co ns o l a n d i C C,st a i gl i o ni B e t 1O . n vIe st i g a it o n ft o e huml t i pl e a n hc or s p ap ora ch i n o il go n cul e o ti dc i cmr ra or a y pe rpa m—

系泌及统其他可能响药影物患者毒性的对体也存受在多态性。人正在试们设图计种“ A一L L芯片”,可协临助医师迅速床、客观地定制A L L个用体药方

t io n us in g l i n a r nde a s tem l— oo p s tr u ct u e r d p r ob es[]J.N u c l e i cA cid s R se 2, 00 2,3 0 (8 ): E 3 4- 4 0 .

[17 ] e r G yr NP ,W t o wis k i E N,D a y J t ea .1U ni v er sa l D N A m ci ro ar a y rm et hd o f o mu l t r i l ep x d t ee ct i o n of l o w ab un d nc ae po n i t m atu ito n s案。芯片该从癌基症分因、型人易体感的性基分因型、药代物谢的基因酶型分、染感御防的因基型分几等个面确定疾病方对物药的敏感性药物在体、代内谢情况及可能的不良的应反 (包心括血系管、统内[ J].J o M l i Bo l,1 9 9 ,92 92 ( 2 ): 2 5 - 2 16 .2【 81] Con o sl and iC, uB s it E, P e ra C e t a1 D.e t e tci o n fo L A o p y l om r—p i s hms y bl i g ase d e tc t e i o n ea c t rio n a dn a u n i v e s r la a r ra y f or m a t:a

p i l t o s ut dy o rf l o e w rs l u ot i on g e n toy p i ng[]J. H un Im m un d,2 0 03,6 (41 ) 1 6 8:— 178 .分泌系统毒和感染性等)。 以可预见随着：药物基因组学究研不断深的， 人人将们不断加对个体深间药差异用的识，认时同随着

基因片技术不芯的断步进，将必出实用现的化高量多态通检性技术测用应于合理药用的指。导参考献文徐：炳森邵，忠.健几种新型物芯生片的究研展进[J].生物学与生物化物理进展， 2 0 0 0, 72( 3 : 2) 15. 2 54 . o ueht m ME De t e,c it o n o f s pe icf i c s c l￣: e nc e￥ amo n g DAN la f g —[2]S[ 19 ]I g l oi G L S i. nlg e —n uc l e t o d ei l op y o m r h pi s m e d et t i o c n us in g p e tpi d en cu el c i a c i ds[ ]J. E x p e t rR ev M o l D a g i, n 02 03, ( 1 3:)1 7 -26 . 2[0] B r a n td O, F e ld ne r J S t e,p h a n A t ea 1. P N A m i c ro a r ary s of r yh— bri d i sa ti on of u n l ab U ce d D NA as pml e s『 J] . Nu c l ie c A cid s e sR. 2 0 03,3 1 1 9 ( ):e l19 .

2[ 1] E v na s WE,M c L e o d H LP h.a n n c aog e n o m ic s— d ru g d i os spi t o in, d urg t rag e t s, n d a is d e e f fe c t s[]J N. E s nl J Md, 2e 00 3, 348 ( )6: 35 - 58 49.

[2 2]Y on Y R,C h a I J, S h o n J eH t a 1 . R lea ti nos h i p f p oa ro ex t ni e i s—dp o i st i o n t o m et opo l r ol me ta b o li c r a i t nod aCP 2 YD6} 10 gc no t yp eof Ko e rn as u j ctb e s[] .J l iCn P a r m choa l T h e, r2 0 00, 67 ( 5 ): 5 76 5. 7 6 .

e mnt s￣ pa r a t e d b gy e l e elc t r o

p ho e rs is[] JJ . oM l iB o l,19 7 5, 98 5:0 3 - 5 l 7 .

[ 2]3 W an g , DL i Y, h a Z g Rn e t a 1D. e te c t oin o f kn o w mnu a ti t n so i n hy p e t rp ro i hc ca r d i oym o pa t yh u s i n g o l ig n ou cl eo t i de i cmr a r roa y s— sa

[ 3] S r t z e s o ak Z,P uan e s u k, RTa d os a v l j evi c D e t a 1 .D N A se u eqn ci n gb y h byi rdi z a t io n: 1 0 0 b a se s r e a d b y a n on . g e . b 1 sa e d m e ht od P oc r.

is st d e by i p mr ov d e bsa e s a t kc n i g b y b ri d c a z t io n[ J]. B o t ihc n oe l e L t,t2 0 30,2 5 ( 91:) 1 61 3 . 1 618 .

N a l i A ac Sdc i . 91 9 1, 8 ( 2 28: 1) 00 8 . 19 009 3 . ai ns W . Smi t h GA .no v e l m e th d o o rf n uc l e ic a c i dse qu e nc e d e. [ 4] B

[ 24] P u iC H, E v s a n E . W A u c t e l myp h b ol￣t i c l euk m e ai[ J] . N E lngJ e Md 1 9, 9 8, 3 3 9( 9): 6 5 0- 165 .

te r m i n ta i o[ nJ] . J T h e ro Bio l 1,9 88, 1 5 3: 3 3 0 -3 7 .0 o k c h a tr JD, Do n g H。 By me MC e t a 1 . xEp re s s io n o nm it or i n g b y 5[] L

(责任辑编：鲁立;英文编辑：联郭庆 )