EML4-ALK融合基因在非小细胞肺癌中的临床意义(2)

域。ＥＭＬ４隶属于棘皮动物微管相关类蛋白家族，包括

ＷＤ一重复区、Ｎ端Ｂａｓｉｃ区和ＨＥＬＰ域。它们都和ＥＭＩＡ－ＡＬＫ肿瘤生成的潜能有关，且Ｂａｓｉｃ区在ＥＭＬ４一ＡＬＫ二聚体化的过程中扮演着重要的角色，去除Ｂａｓｉｃ区可使ＥＭＩＡ－ＡＬＫ融合蛋白的催化活性降低８４％，可以推断Ｂａｓｉｃ区可能是ＥＭＬ４－ＡＬＫ融合蛋白发挥作用的关键区域。

ＡＬＫａｌｉ是胰岛素受体超家族的成员，可与ＡＴＩＣ一、ＴＦＧ，、ＣＬＴＣ一等多种基因发生融合，其结构包括：胞外配体结合区、跨膜区、胞内酪氨酸激酶区。

ＥＭＬ４与ＡＬＫ定位于２号染色体短臂上，但两者方向相反，相隔１２Ｍｂ，融合时须ＥＭＬ４或ＡＬＫ其中之一反向

与对方连接，ＥＭＬ４－ＡＬ蹉因亚型取决于两者断裂相接的

位置，因此ＥＭＬ４断裂点呈现出多变性，目前已检测到的断裂点有２、６、１３、１４、１５、１７、１８、２０号外显子，这些形成了至少１１种ＥＭＬ４－ＡＬＫ９５虫，合基因亚型，已有实验【４。１ｕ证实它们中的大部分能促进肿瘤生成。

２

ＥＭＬ４－ＡＬＫ融，合基因的检测方法检测ＥＭＬ４－ＡＬＫ融合基因的方法很多，主要包括免疫组织化学、逆转录聚合酶链式反应、荧光原位杂交技术和ＲＡＣＥ一偶联ＰｃＲ测序等，现将常用的检测方法简述如下：

２．１免疫组织化学（ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒＭＩＨＣ）

ＩＨＣ是

病理检测的主要方法之一。因其操作简便、成本低、工作量较小而被广泛应用于临床和科研工作中，ＩＨＣ的最大优势是能检测到肿瘤特异性抗原，但不会破坏细胞和组织的结构特征。实验证实ＩＨＣ同ＦＩＳＨ和ＲＴ．ＰＣＲ检测ＥＭＬ４－ＡＬＫ－融合基因的结果具有一致性，但其敏感性劣于ＦＩＳＨ和ＲＴ－ＰＣＲ法，而且不能鉴定ＡＬＫ融合患者具体来自哪种变体亚型。因此，可以将ＩＨＣ法作为筛查ＥＭＬ４－ＡＬＫ融合基因的方法。

２．２逆转录聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅ

ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．ｐｏｌｙ—

ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎ

ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）ＲＴ－ＰＣＲ法是一种敏感性高

的基因检测方法，可以检测到很低拷贝数的ＲＮＡ，可能是确认ＮＳＣＬＣ存在ＡＬＫ融合基因的一种快速诊断方法。利用术后或其它方法取得的标本，获得总ＲＮＡ后进行ＲＴ－ＰＣＲ，Ｘ寸ＰＣＲ产物进一步分析以确定是否含有ＥＭＬ４一ＡＬＫ融合基因，该法需要高质量的ＲＮＡ，但石蜡切片中的ＤＮＡ及ＲＮＡ在检测过程中会逐渐降解，最终会影响检测结果的准确性，因此，ＲＴ－ＰＣＲ更适用于新鲜组织标本

万方数据

的基因检测。但其缺点在于对引物要求很高；分辨不出

ＥＭＬ４－ＡＬＫ－融，合基因的未知亚型；假阳性率较高。由于此方法操作复杂，在常规临床诊断实验室可能难于施行。２．３荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ

ｉｎｓｉｔｕ

ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）

ＦＩＳＨ法应用探针特异性标记细胞核中ＡＬＫ断裂点来检测ＡＬＫ重排，分离的荧光信号提示存在ＡＬＫ重排。相ＬＬＩＨＣ和ＲＴ－ＰＣＲ，ＦＩＳＨ法的敏感性和特异性都很高，但并不是万无一失。与ＰＣＲ不同，ＦＩＳＨ不能鉴别出不同的ＥＭＬ４．ＡＬＫ副２合基因变异体，且其价格昂贵，分离的荧光信号不易解释。目前，ＡＬＫ靶向药物克里唑替尼（Ｃｒｉｚｏｔｉｎｉｂ，

ＰＦ．０２３４１０６６）临床前试验中将ＦＩＳＨ法作为ＥＭＬ４－ＡＬＫ融，

合基因的检测方法。

２．４

ＲＡＣＥ．偶联ＰＣＲＮ序（ＲＡＣＥ．ｃｏｕｐｌｅｄ

ＰＣＲ

ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）

张绪超等ｕ２１使用该法检测分析ＡＬＫ基因的融合变异，他们采用ｃＤＮＡ末端快速扩增（ＰＡＣＥ）技术结合两轮ＰＣＰ技术来扩增ＡＬＫ基因的融合变体，敏感性高，其优点是能检测到ＥＭＬ４与ＡＬＫ或其它任何基因的融合，测序后还能发现是来自哪一种ＥＭＬ４－ＡＬＫ变２体的融合。但目前只有张

绪超等ｕ２１的研究应用了这种检测技术，还需要更多的研究加以验证。

越来越多的标本进行了ＥＭＬ４一ＡＬＫ融合基因的检测，其中以ＲＴ－ＰＣＲ法的应用最为广泛，但目前仍无敏感特异的方法用于ＥＭＬ４－ＡＬＫ－融合基因的检测。未来的发展方向在于寻找有效可行的方法用于准确检测ＡＬＫ基因融合。

３

ＥＭＬ４－ＡＬＫ融合基因与ＮＳＣＬＣ的临床病理关系

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（ＥＧＦＲ．ｔｙｒｏ．

ｓｉｎｅ

ｋｉｎａｓｅ

ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＥＧＦＲ－ＴＫＩ）治疗有效的患者被证实有

其独特的临床病理学特征，如：亚裔、不吸烟、女性、腺癌。决定ＥＧＦＲ－ＴＫＩ疗效的关键在于ＥＧＦＲ的１９、２１ｊ９ｂ显

子突变。ＮＳＣＬＣ中ＥＭＬ４－ＡＬ硎合基因阳性的患者是否也

有其独特的临床病理特征，世界各地的科学家们对此进行了深入的研究。

日本的Ｉｎａｍｕｒａ等ｕ３。用ＲＴ－ＰＣＲ法检测了３６３例肺癌患者的病理标本，１１Ｎ（３％）标本中检出ＥＭＬ４－ＡＬＫ融合

基因，患者病理分型均为腺癌，进一步研究证实ＥＭＬ４一

ＡＬ劂合基因阳性的ＮＳＣＬＣ具有以下的特征：腺泡组织

来源，分化更差；常有＂ＩＴＦ．１表达，偶有ＴＰ５３突变，极少有ＥＧＦＲ及忌ｍｓ的突变；更常见于轻度或不吸烟的患者。

香港的ｗｂｎｇ等旧３检测了２６６例原发性肺癌患者的术