现代药理学研究方法(9)

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对增殖细胞的杀伤力=No-No`×100%No

计算药物对增殖细胞的杀伤力（No`是对照组的的截距）

2）用Nt代表接种后t小时的细胞数， 用公式

TD = 0.301t / logNt - LogNo

计算药物对细胞增增时间（TD）的影响。

3）取平台期每毫升的细胞均数，比较细胞生长的饱合密度（Ns）。

4、集落形成法 本方法利用分裂≥6代以上的克隆原单细胞子细胞可形成集落成簇（每簇细胞数＞50）的能力，比较药物对单个肿瘤细胞增殖能力的影响。本方法有贴壁法和半固体培养法两种。

1）贴壁法 需要选用贴壁生长的细胞， 按500细胞/ml的浓度接种到35mm培养皿中，培养后弃去培养基，用瑞氏-姬姆萨染色后，在20×解剖显微镜下计数含有50个细胞的细胞集落。

2）半固体软琼脂培养法 取对数生长的细胞，用含小牛血清的培养液稀释成1000细胞/ml的悬液；溶化5%的琼脂液，并按1：9的比例与含小牛血清的新鲜培养液混合，倒入35mm培养皿（1ml/皿），室温下待琼脂凝固，取0.94ml的细胞悬液，加0.04ml的5%琼脂, 加到已制备的琼脂平皿中，室温下凝固。移入培养箱培养。在16×解剖显微镜下计数直径大于75μm的细胞集落。以集落形成抑制百分率对对数剂量作图，可得“S”型曲线，从曲线上求取半数抑制浓度IC50；以集落的存活分数与剂量作图，可获得克隆原细胞存活曲线，方程为S=1-(1-e-D/Do)n，S为存活分数， D 为剂量， Do为存活分数每下降1/ e时所需的药物剂量， n为外推值。Do越小， 药物的杀伤力越大，N越大杀死细胞的药物剂量越大。

5、硫化若丹明B法（SRB）法 硫化若丹明（sulforhamine B）呈粉红色，溶于水，可与生物大分子的碱性氨基酸结合，这种结合物在波长515nm时的读数与细胞表现出良好的线性关系，可用于细胞的定量。测试的细胞先用TCA固定，去除固定液，加入SRB， 室温下静置， 然后去除未结合的SRB， 用非缓冲tris碱液溶解结合的SRB，在自动化分光光度平板读数仪（515nm波长）测定OD值。可根据下述公式计算:

T - T0

生长率（%）= ×100%

C - T0

C、T和To分别为对照组细胞，为给药组细胞，另外的对照平板加药时的细胞的OD值。

T - T0

杀伤率(%) = ×100%

T

T - T0

50%生长抑制所需的药物浓度(GI50) = ×100%

C - T0

T - T0

杀死50%细胞所需的药物浓度(LC50)= ×100%

T0

(二) 在体试验法

1、小鼠白血病L1210 系用甲基胆蒽诱发DBA/2小鼠而得。取接种于DBA/2小鼠第6～7天之腹水，