细胞培养及无菌操作(10)

你还在为没有做过细胞培养实验而烦恼吗？你还在为做细胞实验而痛苦吗？看了这个《细胞培养的有关名词及其概念》相信一定会释疑我的烦恼

D．维持期：当细胞形成良好单层后，细胞的生长与分裂都减缓，并逐渐停止生长，这种现象被称为细胞生长的接

触抑制。此时细胞界限逐渐模糊，细胞内颗粒逐渐增多，且透明度降低，立体感较差。由于代谢产物的不断积累，

维持液逐渐变酸。此时营养液已变为橙黄色或黄色。

E. 衰退期：由于溶液中营养的减少和日龄的增长，以及代谢产物的累积等因素，此时细胞间可出现空隙、细胞中颗

粒进一步增多，透明度更低，立体感很差。若将细胞经固定染色处理后，可见细胞中有大而多的脂肪滴及液泡。最

后，细胞皱缩，逐渐死亡，从瓶壁上脱落下来。 传代细胞培养注意事项：

1.严格的无菌操作；

2.适度消化：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意

培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。 附：EDTA（0.02％乙二胺四乙酸二钠）消化液配方：

EDTA 0.20g、NaCl 8.00g、KCl 0.20g、KH2PO4 0.02g、葡萄糖 2.00g、0.5％酚红4ml，加入蒸馏水定容至1000

ml。10磅20min高压灭菌，使用时调节PH值到7.4。

注意：EDTA不能被血清中和，使用后培养瓶要彻底清洗，否则再培养时细胞容易脱壁。

六 细胞的复苏

细胞复苏的原则－快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。

一. 实验前准备：

1.将水浴锅预热至37℃；

2.用75％酒精擦拭超净工作台台面，紫外线照射30min；

3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。

二．取出冻存管：

1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。

2.从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。

三．迅速解冻：