一株蛋白酶产生菌的分离鉴定

２００９年１９（２）

生物技术５１

用酪蛋白平板初筛和发酵脱胶复筛对脱胶细菌进行筛选，有效地缩小了目的菌的筛选范围，得到了一株可明显降低原料残胶率的细菌Ｄ７，处理后原料残胶率将为５．１２％。我们又对其个体形态与菌落形态、生理生化特征１６ＳｒＤＮＡ序列进行了分析，结合《伯杰氏细菌鉴定手册》和《常见细菌系统鉴定手册》对菌株Ｄ７进行分类鉴定。结果表明菌株所为芽孢杆菌，

［４］张海霞．绢纺原料的微生物脱胶处理技术［Ｄ］．上海：东华大学硕士学位论文，２００５：１３．

【５］李志忠，蒋少军．蚕丝蛋白酶精练工艺的理论与实践【Ｊ］．染整技术，２００６．２８（４）：１３—１５．

［６］中国纺织大学绢纺教研室．绢纺学（上册）［Ｍ］．北京：纺织工业出版

社，１９８５：１０７—１０８．

［７］ＲＥ布坎南，ＮＥ吉本斯．中圃科学院微生物研究所＜伯杰氏细菌签定手册）翻译组译．伯杰氏细菌鉴定手册［Ｍ］．３版．北京：科学出版社。

１９８４．

与腊样芽孢杆菌（励诎岱删）的同源性最高，属于腊样芽孢

杆菌类。所最适生长温度３７℃左右，最适生长ｐＨ６。５—７。５，可根据菌株Ｄ７生长的环境条件设定发酵工艺参数。该脱胶菌的获得为研究蚕丝微生物纯种发酵脱胶奠定基础。

参考文献：

［１］萤炳荣．绢纺织［Ｍ］．北京：纺织工业出版杜，１９９１：１０—３０．【２］蒋少军．浅谈蚕丝的脱胶技术【ｊ］．丝绸．２００７，（３）：ｌ一３．

［３］陈慧，杨雪霞，等．绢纺腐化液中细菌除油效果的研究［Ｊ］．丝绸，２００７，（４）：１８一１９．

［８］东秀珠．蔡妙英．常见细菌系统鉴定手册［Ｍ】．北京：科学出版杜，

加０１．

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４６７３—４６８０．

一株蛋白酶产生菌的分离鉴定

易霞，詹建立

（喀什师范学院生命与环境科学系，新疆喀什８４４０００）

摘要：目的：对喀什市吐曼河分离的一株细菌进行鉴定。方法：基于生理生化实验和１６ＳｒＨＮＡ序列分析。结果：该分离菌Ｇ一，球状，需盐但不耐盐，ｐＨ耐受范围是ｐＨ６．２—７．８，产蛋白酶且粗酶酶活达１６８Ｕｌｎｄ。１６ＳｒＲＮＡ序列分析表明，该细菌与类产碱假单胞菌（Ｐ．ｐｓｅｕｄｏｏｌ【ｃａｌｉｇｅｎｅｓ）１６ＳｒＲＮＡ序列有１００％的相似性。结论：初步推断该细菌属于Ｐｓｅ砌ｏｍｏｎａｓ属。

关键词：１６ＳｒＲＮＡ序列；吐曼河；蛋白酶；鉴定

中图分类号：Ｑ９３—３３１

文献标识码：Ａ

文章编号：１００４—３１１ｘ（２００９）０２一００５１—０３

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蛋白酶在食品加工、医药、洗涤、纺织和皮革等行业上应用广泛，而微生物是蛋白酶的重要来源之一。因为微生物产生的蛋白酶具有良好的热稳定性，并具有耐变性剂和使用方便等优点。全世界工业用酶每年销售额约为ｌ亿美元，在所有工业用酶制剂中７５％是蛋白水解酶，而蛋白酶是工业用酶中占据比例最大的酶类，大约占全世界每年总销售量的６０％左右…。我国自１９７８年开始推广应用蛋白酶，目前的加酶洗涤剂约占洗涤刺总量的１０—１５％拉’３Ｊ。

目前，人们已经从很多高温菌种中分离到各种类型的高温蛋白酶。Ｋ彻，ｈｉｋｏＩ等人分离到最佳活性温度为８０℃的、兼产羧肽酶和氨肽酶活性的双功能蛋白酶ＨＪ。ＯｋａｍｔｏＭ等人从醌ｃ锄珊印．ｓⅡ＇ａＪｎＭＯ一１菌株分离出的蛋白酶可以降解胶原蛋白和明胶ｂｌ。祝伟和张燕新等人于２００３年对高温蛋白酶产生菌株进行筛选和鉴定№’７１；张晶等人则对碱性蛋白酶菌株进行相关研究和分析喁ｊ。

基于生理生化实验和１６ＳｒＲＮＡ序列分析，本研究对喀什市吐曼河中一株蛋白酶产生菌进行分离和鉴定。本研究以期分析和确定喀什市吐曼河中微生物的种类和代谢产物，同时为喀什市吐曼河的综合治理，尤其是生物治理提出科学依据。

１．１．１培养基制备

１．１．１．１

牛肉膏蛋白胨培养基（∥１）：牛肉膏３９，蛋白胨ｌＯｇ，

０００ｒｉｄ，ｐＨ７．２～７．４。

Ｉｇ，

ＮａＣ］５９，琼脂粉１５—２０９，蒸馏水定容到１

１．１．１．２

高氏一号培养基（ｇ，１）：可溶性淀２０９，ｌ∞ｂ

ＫＩ－［Ｐ０４０．５９，Ｍ９９Ｑ４Ｏ．５９，ＮａＣ］Ｏ．５９，ＦｅＳ０４０．０１９，琼脂２０９，蒸

馏水１０００ｍｌ，ｐＨ７．２－７．４。

１．１．１．３马丁氏培养基（ｇ，１）：葡萄糖１０９，蛋白胨５９，ＫＨ２ＰＯ，

ｌｇ，ＭｇＳ０４ ７

Ｈ２００．５９，ｌ％盂加拉红３．３ｍｌ，琼脂粉１５—２０９，ｐＨ

自然，蒸馏水１０００ｎｄ灭菌后于加一５０℃时加入０．０３％链霉稀

释液（ｍｅ／ｍ１）０．Ｉｍｌ。

１．１．１．４脂酶堵养基（Ｔｗｅｅｎ８０）（∥１）：蛋白胨ｌＯｇ，ＮａＣＩ５９，ＣａＣＩ ７Ｈ２００．０１９，琼脂９９，蒸馏水ｌ０００ｍｌ，ｐＨ７．４，冷却基础培养基至加一５０℃，加入Ｔｗｅｅｎ８０至浓度为ｌ％，倒平板。１．１．１．５苯丙氨酸脱氨酶培养基（ｇ，１）：酵母膏３９，ＮａＣ］５９，

Ｎａ２ＨＰ０４、７．０。

ｌｇ，琼脂１２９，ＤＬ一苯丙氨酸２９，蒸馏水ｌ０００ｍｌ，ｐＨ

１．１．１．６蛋白酶培养基（ｇ，１）：１．５％阿尔曼脱脂奶粉溶液，琼脂粉１６９，蒸馏水１０００ｍｌ。

１．１．１．７木聚糖酶检测培养基

①透明圈法检测培养基（ｇ／１）：Ｋ２ＨＰ０４２．０９，ＮＩ｛４ＮＯ，２．０９，ｍｄ＇０４ ７Ｈ２００．２９，酵母膏５．ｏｇ，半纤维素２０．ｏｇ，ｐＨ

７．２。

ｌ材料与方法

１．１材料

收稿日期．＇２００８—０８—２９；修回１３１９１：２００５一ｌｌ—０７

作者简介：易霞（１９７９一），女，新疆人，硕士，讲师，从事生化和微，￡物学教学及微生物资源研发，Ｔｄ：０９９８—２２１０１１２，Ｅｍｅｉｌ：ｙｉ菇ａ０１１０＠１６３．

②半纤维素的制备：将４％Ｎａ０Ｈ浸泡的小麦秸秆粉在９０℃煮沸２ｈ，过滤得滤液。用浓盐酸调ｐＨ４．５后，再加入与滤液等体积的无水乙醇以沉淀半纤维素。过滤或离心得沉淀，用无水乙醇洗涤沉淀２次，再将沉淀于４５℃下烘干，即得浅黄