骨髓间充质干细胞移植急性一氧化碳中毒迟发性(2)

邢红霞，等. 骨髓间充质干细胞移植急性一氧化碳中毒迟发性脑病大鼠星形胶质细胞及髓鞘的变化 www.CRTER

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坚牢绿-FCF染色观察细胞脱髓鞘情况：切片在室温条 件下复温20 min，PBS洗3次，入体积分数95%乙醇 2 min，入坚牢绿-FCF染液，室温下作用20 min，体积分数95%乙醇浸洗5 s，用0.3%碳酸锂溶液分化5 s，蒸馏水终止分化，脱水、透明、封固，镜下观察拍照，照相。

主要观察指标：骨髓间充质干细胞移植治疗一氧化碳中毒迟发性脑病动物模型前后星形胶质细胞及神经髓鞘变化。

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统计学分析：各组数据结果均以x±s表示，由第二作者应用SPSS16.0统计学软件进行统计分析，采用两因素多水平重复测量的方差分析，两两比较采用q检验，以α=0.05为差异显著性水准。

2 结果 2.1 骨髓间充质干细胞的培养与鉴定 体外分离培养的骨髓间充质干细胞呈长梭形或者多角样，见图1，培养至第4代后细胞形状比较均匀，见图2，经CD44、CD34及免疫荧光显色后发现绝大多数细胞CD44呈阳性表达，见图3a，少数细胞CD34呈阳性表达，见图3b，阳性部位在细胞膜及细胞浆，细胞核不着色。CD44阳性细胞的构成比为92.0%，而CD34阳性细胞数的构成比为4.2%。

Figure 1

Bone marrow mesenchymal stem cells of primary

culture on d 7 (Inverted phase contrast microscope, ×200)

图1 第1代培养7 d时的骨髓间充质干细胞 (倒置相差显

微镜，×200)

Figure 2 Bone marrow mesenchymal stem cells of passage 4

on d 7 (Inverted phase contrast microscope, ×200)图2 第4代培养7 d时的骨髓间充质干细胞(倒置相差显微

镜，×200)

ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH

万方数据

a: CD44 positive cells

b: CD34 positive cells Figure 3

CD44 and CD34-positive bone marrow mesenchymal

stem cells of passage 4 (Immunofluorescence staining, ×400)

图3 第4代骨髓间充质干细胞CD44、CD34阳性(免疫荧光

染色，×400)

2.2 大鼠染毒后的表现 大鼠在首次按100 mL/kg的剂量注射一氧化碳后2 min开始出现呼吸急促，5 min后呼吸明显加快，大鼠口唇、四肢及尾部呈樱红色，随后出现四肢肌张力降低，运动迟缓及运动不能，眼裂变小，瞳孔对光反射存在。20 min后大鼠全身软瘫，针刺无反应，角膜反射及瞳孔对光反射均消失。其中有5只大鼠死亡，个别死亡大鼠尸检发现，内脏重度充血伴散在出血点，脑组织充血水肿严重。上述症状体征持续至末次染毒后8 h方逐渐消失；此后21 d内观察，无特殊异常表现。最终175只大鼠进入结果分析。

2.3 各组干预后相关指标的检测结果 见表1。

6，12，24 h干细胞移植组大鼠脑内胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的平均吸光度值明显高于对照组及假手术组(P < 0.05)，0 h、3 h、72 h、1周干细胞移植组与对照组

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