羟乙基淀粉沉降法分离脐血过程的深入分析及条

中国输血杂志2004年4月第17卷第2期 ChinJBloodTransfusion,April,2004,Vol.17,No.2

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论 著

羟乙基淀粉沉降法分离脐血过程的

深入分析及条件优化*

迟占有 姜 华 蔡海波 谭文松 戴干策

(华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237)

摘要:目的 进一步提高HES(羟乙基淀粉)沉降法分离脐血单个核细胞的收率。方法 对比和分析对该沉降过程完成后上下层的白细胞数,并考察HES浓度、HES与脐血体积比、沉降距离对该过程白细胞收率的影响。结果 沉降过程存在因红细胞团向下沉降而推动白细胞向上运动的对流现象,该现象受到细胞占悬浮液总体积的比例和红细胞下降速度的影响,增加沉降距离能增加对流的作用距离,有利于提高白细胞的收率,提高HES与脐血的体积比也有利于提高白细胞收率。悬浮液中HES浓度<0.6%时,细胞不能有效沉降,>3%时,会引起白细胞在红细胞中的夹带而影响收率。用3%HES以2 1与脐血混合,在沉降距离为25cm的沉降管中沉降40min,分离后白细胞收率达94.3%。结论 采用3%HES溶液,并提高HES与脐血的体积比和增加沉降距离,可进一步提高HES沉降法分离脐血单个核细胞的收率。 关键词:脐血

羟乙基淀粉

沉降

分离 白细胞/收率

中图分类号:Q274 R714 56 文献标识码:A 文章编号:1004 549X(2004)02 0071 04

OptimizationofcordbloodseparationprocessbyHydroxyethylStarch(HES)sedimentation CHIzhanyou,JIANGHua,CAIHaibo,etal.TheStateKeyLaboratoryofBioreactorEngineering,EastChinaUniversityofScienceandTechnology,Shanghai200237,China

Abstract:Objective ToimprovethepercentrecoveryofthewhitecellsintheprocessofcordbloodseparationbyHESsedimentation.Methods TheeffectsofHESconcentration,thevolumeratioofHEStocordblood,andsedimenta tionlengthontherecoveryweredeterminedandanalyzed.Results Itwasfoundthattherewasconvectioninthispro cessthatwhitecellsmovedupwardcausedbythefastdownwardsettlingofredcellpellets,andthisconvectionwasrelatedtothevelocityofredcellpelletsandtheratioofcellstosuspensionvolume.Thelongersedimentationdistancehelpedim provetherecoveryofwhitecells,sinceitprolongedthepush upactiondistance.Thewhitecellrecoveryalsocouldbeim provedbyenhancingthevolumeratioofHEStocordblood.Theredcellscouldn tformpelletandsettleefficientlyiftheHESconcentrationinthemixedsuspensionwaslessthan0.6%,andwhitecellswereinvolvedintheredcellpelletsifHESconcentrationexceeded3%.A94.3%recoveryofmononuclearcellcouldbeobtainedaftersedimentationina25cmsettlerfor40min,inwhichthevolumeratioof3%HESsolutiontocordbloodwas2:1.Conclusion AhigherrecoverycanbereachedinalongersettlerafterHESconcentrationandtheratioofHEStocordbloodareoptimized

KeyWords:cordblood,HES,sedimentation,separation

脐血作为新的造血干细胞来源[1],富含CD34+细胞,对异体抗原的反应较弱,具有高增殖潜力和长期造血重建能力,因此具有替代骨髓移植、免疫治疗、基因治疗和各种癌症的辅助治疗等良好的应用前景。脐血中大部分为红细胞,建立脐血库时,为减少冻存体积,需要分离掉大量的红细胞而只保存富含造血干细胞的有核细胞。以羟乙基淀粉(hydroxyethylstarch,HES)为沉降剂将红细胞沉降分离去除,而回收有核细胞的方法目前在脐血分离中被广

*基金项目:国家 863 计划生物领域项目(编号102 12 08 01);上海市现代生物与医药项目基金资助(编号004319003)

泛采用[2]。一般来说,每份脐血的体积较小,从1份脐血中得到的细胞量过少常常限制其应用,故应尽可能提高该过程的收率。目前脐血库通常采用的HES离心分离法由于离心后上层细胞液占总体积比例较小,导致其收率在88.9%左右。为进一步

提高收率,笔者对脐血HES沉降分离方法作了深入分析,并通过优化该过程的影响因素进一步提高了脐血单个核细胞的收率。1

材料与方法

[6]

1.1 脐血来源 由上海国际和平妇幼保健院采集,