如何构建一个大肠杆菌高校表达的分子克隆

生物工程

如何构建一个大肠杆菌高校表达的分子克

隆

摘要：基因克隆是把一个外源基因导入生物细胞，并使它得到扩增。但是外源基因DNA片段一般不带有复制子系统及在新的受体细胞中进行功能表达的调控系统。如果要分子克隆在大肠杆菌中高效表达，则需要特殊的载体将克隆基因转入受体细胞，然后运用载体上的复制子和调控系统，进而实现分子克隆的高效表达。

关键词：强启动子，弱启动子，诱导，阻遏

基因克隆的重要环节，就是把一个外源基因导入生物细胞，并使它得到扩增。然而一个外源DNA片段是很难进入受体细胞的，即使进入细胞，一般也不能进行复制和功能的表达。这是因为，所得到的外源DNA一般不带有复制子系统及在新的受体细胞中进行功能表达的调控系统。这样，进行基因克隆是很困难的。在基因工程中，通常是把外源DNA片段利用运载工具送入生物细胞。

载体的本质是DNA。经过人工构建的载体，不但能与外源基因相连，导入受体细胞，还能利用本身的调控系统，使外源基因在新细胞中复制以及功能表达。 克隆基因的表达通常有三个必须条件：（1）基因的密码区不能被插入序列中断；（2）基因必须在启动子的控制之下，而启动子必须能被宿主细胞的RNA多聚酶有效地识别；（3）mRNA必须相当稳定，并且有效地被转译，产生的外源蛋白质必须不被宿主细胞的蛋白酶快速降解。其中第一个条件是保证克隆基因在

转录的时候不至于中

断。第二个条件则要求

克隆基因在启动子之

下，以保证正常开始转

录。第三个条件则要求

翻译的产物能够在宿

主细胞中停留。现就启

动子的问题重点讨论。

DNA的转录起始区 DNA转录是依赖