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如何构建一个大肠杆菌高校表达的分子克隆(2)

发布时间:2021-06-07   来源:未知    
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生物工程

于RNA聚合酶结合于DNA的启动子区域而发生RNA的合成。启动子是一段DNA序列,不同的启动子的效率不同,强的启动子可产生较多的mRNA,弱的则相反。在原核细胞中,有两个地方的DNA序列比较保守。一个是位于转录起点上有10bp的-10bp区域TATAAT序列;另一个地方位于约-35bp区域TTGACA序列。这两个区域对于决定启动子强度是很重要的。虽然大肠杆菌启动子与这些保守序列差不多,但是,事实上很小的差异对启动子知道转录的效率有重大影响,所谓失之毫厘差之千里。强启动子是维持高效率转录的启动子,一般启动子序列于保守序列越接近,启动子越强。很显然的,高效表达的载体需要强的启动子。

此外,两个保守序列之间的DNA对启动子的功能也有影响。各启动子都需

要一些

最适间

隙,间

隙17bp

的启动

子功能

较强。

用的高

强度和

调节方

便的载

体有:Lac启动子、trp启动子、tac启动子、PL启动子。

很显然,基因载体应该有强启动子,这样才可以使克隆的基因高效转录。除少数例外,启动子顺序与共同保守区越接近,启动子就越强。

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