牛脂联素基因真核表达载体的构建及鉴定

脂联素

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脂牛素基因联真核表达体载构建的及鉴定黄海龙 王，哲 于健国孙，,佳 (吉.大学林畜牧兽医学院，1吉长林春10;.63022林吉农业大学动科学技物术院，学吉林长春10 1 3)18 图分中号类 8: 32￥文献标识码： 文章编A号：40 04—2 02— )0—43 10 73 0(9 1 000

关键词：;牛脂联素基因；真核表达载摘体：要了构建脂联牛素基真核表达载体因，为试验采用 RT— P方法扩增R牛脂联素 o(iae iC b vd— n pcnB vnD 基N因 o,e t oA, P i)将其克隆到p 1 M D一8T体载中，正序的质确粒经 Eo I和 N测 ctR Io双酶 ,切回收目基的片因将段定其向克隆到pIZ tC o A载体P中，建重质粒组p Z￣I oA P结果表。构 P C Bo vDN A明：克隆基因的序与 G n列 ka Be n布的公序有 10列 0%同源性的；目的基因向正插入，阅读框正确无误 ,说牛明脂联素基因真核表达载体构建功成。Co s ric n d ieat c o fe tkr oi xr s nvi c obfvn d pnc i ee nutt nd ni ai n o a yut ep se o eroto iea oi e t n g oif cH n AG H oig, N h Y u— i e U Na a— l AWG Z e, U G jo n t l, n a .( lCg fi aS i c nee r Menni,nUii ir, hnc u36 C a2 ieooe a S i i nceh go, 1 oeeo m l ec a eV tdia dc eJ iv syn Cag hn 012,h;n. C glf m celea d cnlT y l A n n r yi l e t An l n o iJ gi l rUlie i, hn uc 3 1 8C ia n A i rt a uvnr t C agh n 1 0, h n l) c u s 1Kye r sBoi ;ed pn i c e; u ea ty xr s inv c o yow: vd n ai eo g t

n e kr o i e eps o e t r n eA t abt T o r s cu a t y xrs in v c o bfvn dp nc ei et ef lnlt DAN no i AgPDN oo i ew a pm i e ys r c: o c tnt kr i e op es o t eo ro i e i o aet g n,h u l e g h cue cn e dcn fb vn sal d b ifTR—CRP w hi p cfcp m e .h nt e g n f t t e se i r r T e h e e o hi si ADPN wa ln d t i v eoc s co e not e rtTI . sw bs nl id th u a ty x s r i n c vo h at u c e noo te ek ri eo pe so e rt cpI Z t at rte s qec si e te y d ul e it tn e d nc e s sd g is na d q es cn n lss Th eu t os dt a h CP Ac e h ef u ne w d na i bd o b e r sr i n uo ale i te o ne u n gi aa y i. re sl h w e tthe if ocsg n am ns oe 0%i ett y PA DN hc a en d p se neG n t k adt ae i tn dr c if h b e tee ef ge th w d1 0 r dn i D N Acw hih d b e e o i i d h e B n a as,l a i i t n o oejci t o t b go o e tvg rg n n scr et n is e gme twt o r ce d n r m e Is do t u aa y tx r s i n v o c PI c—A Bve e f me tawa or c dwa ane nic ert ra i gf r ah a t . hew ht ker o i pe es o e t rp CZL c AoDP N h d e b o s rce u scf l .a e nc n t d stc eusl u y研究发现，脂肪织除组存储三酰甘油，外具有 活跃还的内分泌功能… 分，泌的多种激素与细胞 其因

入母基酵因组

、导分泌达表重组牛脂联素定奠了基 础诱。 1材料和方法子参与神经、内泌分与免网疫络调的节，是对其能尤量谢代调的节具 重要有的作 用其中的脂。细胞肪特异因性子——抵素抗e( ii r) s和t脂素联 (pd n sc an ioe .

11菌株和质粒、及要主试剂 .酶

酵母达载体 p表IZ x自购 vrgIn公司； PC A,(n oi et限性制内切酶Eo / o I、 Xac I NR tE Tq酶 a, a公 a司 T KRtn AE可通自分泌过 i、, D ) No旁分泌、分内泌方等式 胞参与机体多种的生理程过，特是对糖别和脂肪代谢 的调节脂联。素是肪脂织组泌分的类肽激之素一，具有增胰强岛素感敏、性血糖高、脂肪节代谢作用的，抗 调是体机脂质谢代血和糖稳态调控网络的中要重调

生产节；D5 L态受细菌、胶回试剂收盒、有寡 H o感凝所核苷酸和引等物，由上生海工生物工技术服务有程 均限司公供提； D一20 0 LMre,春 宝泰公克司生 0 kar长产；大肝肠 D菌 5由￣林吉大学农学部畜牧兽医学 H,c院营代养谢病实验室保存。 12 . R—PTR增扩的目基因C根据已发表的基因序列设 1对计特异性脂联牛素基扩因增引物，义正引物为 5一 C AT C G . A GAr G AG ACA GA G T一3,义 物引为 5 ACTGA反 A一C CG . G C A G垒！垒垒！::’ A AI’ 一3。 ::: ’ A AI Ic I :” I !c’’。 I G A正义引物下划线分部 E为 o酶位切点，义引物 cR I反划下线部分分别为 N t o切位点和肠激酶酶 位切 I酶点。该引物定义全长7 1 b0 p的联素基脂因。 RP反 C条件：4应o i;4 4℃ 9℃,1 nm7℃ 9 C 3 r n 9a 5 5 S i,2 1 m共 n 3 i,O个 环；循 2o1 。i PR产物经 C 70m Cn

因子。围以期产能负量衡平为病理学基 的础酮病和肪脂等肝能量代谢障碍性疾病是 牛奶重 要群的发性常见病。在但这些疾病中，肪细胞特异因子对脂性脂肪员动的控调作用前目还不清楚 _。研究成功

构 2 J建了脂牛联素基因真核表载达，体为进步一其将化

转收稿日期：0— 59—8修回日期0: 9— 21 2 0 0 0;20 0~7金项基目国家：然科学自金项基目 (0 7 5 3:35 16 )吉林农大业学年青动基启项金目

作者介简：海黄龙(9一)3男， 17 ,师讲，博研士生究.讯作通者：王哲 (9一)男 0授，,士 . 15 教，硕

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脂联素

江龙畜牧 医兽技》版黑科08 .%琼脂凝胶糖电泳检测，D A收回剂试盒回收 用N增产扩物 。 M

2 0 09年1 2月 ( ) 上5

31基 因隆与克酶鉴定切.将回产收物与 Dp8 i 线p性粒按照质 M1一TS l m 4:e比1例混，合 1的于 6℃进连接反应行过夜。以连接物产化转 Ec J 0 l在含苄氨西林琼脂的平板 oi .1M9, 进上行蓝白斑选。挑筛取阳性落菌经P R扩后增进 C行鉴定，时小 量抽提质粒 p同MD 1一8TB v— N,D oAP 以 E eo IR N和t 对po I M D18 T一—B DvN重组质 oA P

21

M .L 0一r e;. C D 20 0 Mar1P Rk增扩物产。

进行粒酶双切，琼糖脂凝胶电泳 …… 此处隐藏：5889字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……