时间分辨荧光免疫分析技术及临床应用(3)

时间分辨荧光免疫分析技术及临床应用

3.1　在免疫学的应用　①测定细胞因子:细胞因子不仅仅参与免疫应答反应,而且在肿瘤、炎症发生和发展过程中起重要作用。因此,准确测定细胞因子含量,对于了解它们病理生理作用是十分重要的。1992年用TEFI A方法测定肿瘤坏死因子(T NF)和白细胞介素6(I L26),在细胞因子测定方面TRFI A逐渐开始取代RI A和EI A;②测定补体:补体成分在多种自身免疫性疾病中起作用,临床上常检测补体C3来评价免疫系统的

功能,1993年出现了检测补体C

3

的TRFI A试剂盒,可测定脑

脊液中补体C

3

。

3.2　在微生物方面的应用　由于TRFI A的方法灵敏度高,在1979年它的理论形成后,研究重点放在试剂开发和利用上,早期主要研制微生物诊断试剂。在1982年研制出用于测定风疹病毒抗体TRFI A的试剂。在1986年开创快速诊断流感的TRFI A方法。S orensen[10]在2002年临床化学杂志发表了关于同时检测弓形体IgM和IgA抗体TRFI A方法,并筛查新生儿弓形体发病情况。

3.3　分子生物学的应用　铕标记的链霉亲合素2生物素探针,则会使核酸杂交整个过程变得快速、简单。目前,稀土元素标记探针技术已用于检测HI V、检测前列腺特异性抗原(PS A)的mRNA、腺病毒DNA、肺炎链球菌DNA和H LA227等位基因,获得了满意的结果。

3.4　在激素方面的应用　S torch等[11]用TRFI A检测人血清胰岛素含量,相继S tenman等[12]用它检测了hCG。Wu等[13]检测了血清中的甲状腺激素等。TRFI A不仅用来检测人血清激素,国外还用它检测动物的激素,例如Ogine等[14]检测了猪的松弛肽。Parra等[15]报道用时间分辨荧光免疫分析检测犬血清中的皮质醇和FT4等。K ohek等[16]用TRFI A分析血清、E D2 T A抗凝血浆和柠檬酸钠抗凝血浆激素(LH、FSH、PR L、T4、G H、Ins、FT4、TSH、TT3等)含量差别,发现只有在分析促甲状腺激

素(TSH)、胰岛素(Ins)、TT

3、雌二醇(E

2

)、T esto(睾酮)和Prog

(孕酮)时柠檬酸钠抗凝血浆与血清有差别。Harma等[17]改进了TRFI A测定PS A的方法。现在TRFI A已经取代RI A、EI A等方法,检测项目涉及甲状腺激素、性腺激素、下丘脑分泌的激素、胰岛素、胃泌素等各个方面。

3.5　其他方面　Qin等[18]报道了一种TRFI A测量尿微量白蛋白的方法,仅仅需要12min。K urog ochi等[19]报道了荧光标记β2半乳糖苷酶机制及其运用。有研究[20]用TRFI A对细胞内的溶酶颗粒中Perforin蛋白进行定量测定。

4　展　望

由于TRFI A技术集酶标记、同位素标记技术的优点于一身:灵敏度高、特异性强、稳定性好,且测定范围更宽,试剂寿命长,操作简便和非放射性等特点,非常适用于生物学、医学上的超微量分析,是一项很有前途的、值得推广的技术,其应用范围不断发展已经成为临床及治疗监测和基础医学研究等方面的重要手段。国外该项技术已经成熟,我国近年来检测项目也不断增多,目前已经推出几十种商品化的试剂盒。随着国内、外对TRFI A深入研究,必将使标记免疫学技术在医学上大放异彩。

(致谢:感谢潘利华老师对本研究工作的指导)参考文献:

[1]　Wu F B,He Y F,Han S Q.M atrix interference in serum total Thyroxin

(T4)time2res olved fluorescence immunoassay(TRFIA)and its elimina2 tion with the use of streptavidin2biotin separation technique[J].Clin

Chim Acta,2001,308(122):1172126.

[2]　S itkiewicz D,G lass A,Renski A.T ime2res olved fluorescence of europi2

um ions and its application for determination of biologically active sub2 stances[J].Endokrynol P ol,1992,43(1):1012110.

[3]　Y uan J,M atsum oto K.A new tetradentateβ2diketonate2europium che2

late that can be covalently bound to proteins for time2res olved fluoroim2 munoassay[J].Anal Chem,1998,70(3):5962601.

[4]　Y uan J,W ang G,K imura H,et al.H ighly sensitive time2res olved flu2

oroimmunoassay of human immunoglobulin E by using a new europium fluoresent chelate as a label[J].Anal Biochem,1997,254(2):2832 287.

[5]　Wu F,Zhang C.A new diketon2europium chelate for ultrasensitive

time2res olved fluorescence immunoassays[J].Anal Chem,2002,311

(1):57267.

[6]　Wu F,Han S Q,Zhang C,et al.Sythnesis of a highly fluorescent beta

diketon2europium chelate and its utility in time2res olved fluoroimmuno2 assay of serum total thyroxine[J].Anal Chem,2002,72(22):58822 5889.

[7]　潘利华,周誓红,孙文伟,等.固相时间分辨荧光免疫标记技术

研究[J].光谱学与光谱分析,2004,24(12):160121604.

[8]　赵吉力,马庆杰,赵伟,等.时间分辨荧光免疫分析螯合剂的制

备及标记方法[J].吉林大学学报(医学版),2003,29(6):8102 812.

[9]　Leinonen J,Lovgren T,V ornanen T,et al.D ouble2label time2res olved

immunofluorometric assay of prostate specific antigen and its com plex withα12antichym otrypsin[J].Clin Chem,1993,39(10):209822103. [10]　S orensen T,S penter J,Jaliashvili I,et al.Automated time2res olved im2

munofluorometric assay for T ox oplasma g ondii2specific IgM and IgA an2 tibodies:study of m ore than130,000filter2paper blood2spot sam ples from newborns[J].Clin Chem,2002,48(11):198121986.

[11]　S torch M J,M arbach P,K erp L.A time2res olved fluoroimmunassay for

human insulin based on tw o m onoclonal antibodies[J].J Immunol

M ethods,1993,157(122):1972201.

[12]　S tenman J,Aljfthan H,S tenman UH.S treptavidin2biotin based time2re2

s olved immunofluorometric assay for direct measurement of high concen2 trations of human chorionic g onadotropin(hCG)[J].J Immunol M eth2 ods,1994,175(2):1612167.

[13]　Wu F,Xu Y,Xu T,et al.T ime2res olved fluorescence immunoassay of

thyroxine in serum:imm obilized antigen approach[J].Anal Biochem,

1999,276(2):1712176.

[14]　Ogine T,K ohsaka T,T aya K.T ime2res olved fluoroimmunoassay(TR2

FIA)of porcine relaxin[J].Exp Clin Endocrinol Diabetes,1999,107

(4):2762280.

[15]　Parra M D,Bernal LJ,Ceron JJ.C ortis ol and free thyroxine determina2

tion bytime2res olved fluorometry in canine serum[J].Can J Vet Res,

2004,68(2):982104.

[16]　K ohek M,Leme C,Nakamura IT,et al.E ffect of E DT A and s odium cit2

rate on horm one measurements by fluorometric and immunofluorometric

methods[J].BMC Clin Pathol,2002,2(2):141221417.

[17]　Harma H,S oukka T,Lovgren T.Europium nanoparticles and time2re2

s olved fluorescence for ultrasensitive detection of prostate2specific anti2 gen[J].Clin Chem,2001,47(3):5612568.

[18]　Qin QP,Peltola O,Peterss on K.T ime2res olved fluorescence res onance

energy trans fer assay for pont2of2care testing of urinary albumin[J].

Clin Chem,2003,49(7):110521113.

[19]　K urog ochi M,Nishimura S,Lee Y C.M echanism2based fluorescent la2

belingofβ2galactosidases[J].J Biol Chem,2004,279(43):447042 44712.

[20]　M aher K J,K limas NG,Hurwitz B,et al.Quantitative fluorescence mea2

sures for determination of intracellular perforin content[J].Clin

Diagn

Lab Immunol,2002,9(6):124821252.

收稿日期:2005210229　修回日期:2006201203・

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・医学综述2006年4月第12卷第7期　M edical Recapitulate,April2006,V ol.12,N o.7© 1994-2006 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.