烟草黑胫病菌0号小种不同条件下培养特性的研究(2)

研究了烟草黑胫病菌0号小种的若干培养性状,为进一步展开与之相关的研究和综合防治提供试验依据。本实验用培养基、光照、菌龄、诱导剂和诱导时间等不同因素来研究烟草黑胫病菌0号小种的生长速度、产孢量和游动孢子释放量等培养特性。结果表明：将0.1%KNO3和1%葡萄糖混合液加入在燕麦培养基上避光培养21d的培养皿中,经26℃恒温培养72h后,突降12℃培养0.5h,最易产生孢子囊和释放游动孢子。

该病迅速传播蔓延，1934 年在山东鉴定出烟草黑胫病[1]。可以侵染烤烟、晾烟、晒烟、白肋烟、香料烟等所有的栽培烟草，破坏性极强[2]，平均发病率为5%-12%，严重田块发病率高达75%，甚至造成绝收。烟草是我国重要的经济作物之一，吸烟是亿万烟民文化生活中不可缺少的一部分，也是国家和地方财税收入的重要来源。研究烟草黑胫病病原菌的生物学特性、病害发生机制等有利于从植物保护、抗病育种和耕作栽培等方面来抑制或减少烟草病害的发生，从而可以减少农药的用量，提高烟叶质量和安全性，同时也有利于环境保护。 1 材料和方法

1.1 供试材料

1.1.1 供试菌株 烟草黑胫病0号小种由中国农业科学院烟草研究所植物保护研究室提供。

1.1.2 供试培养基 燕麦培养基（OA）:燕麦片30 g ，琼脂18 g，去离子水1 000ml；马铃薯培养基(PDA)：马铃薯200g ，葡萄糖15g，琼脂18g，去离子水1 000ml；玉米粉培养基(CMA)：玉米粉200g，琼脂17g，去离子水1 000mL；番茄汁培养基(TJA)：番茄汁50ml，牛肉膏10g，乳糖20g，酵母提取液5g，琼脂17g，蒸馏水1 000ml；烟草汁培养基：新鲜烟叶200g ，琼脂20g ，蒸馏水1 000ml。

1.2 实验设计

1.2.1 不同培养基和光照处理对菌丝生长的影响

（1）接菌培养 将上述5种培养基经121℃高压灭菌20min后，分别倒入无菌培养皿（直径88mm），挑取生长良好的黑胫病菌0号小种0.5cm2大小的菌丝块转接到培养皿中央部位。将转接菌丝的培养皿平均分成两份，分别倒置于光照和黑暗条件下28℃恒温培养。

（2）试验方法 从第24h起，每隔1d测量一次菌落直径（设5个重复求平均值），至菌丝长满培养皿为止。

1.2.2 培养基和菌龄对孢子囊数量的影响

（1）实验方案 用0.1%硝酸钾溶液浸泡培养7d的菌丝，镜检孢子囊数量，此后，第14d、21d、28d、35d、42d各镜检一次。

（2）实验方法 在超净工作台下，向不同菌龄且长满菌丝的培养皿中分别加入6ml无菌的0.1%KNO3溶液，用封口膜封住培养皿，放置于26℃恒温条件下避光培养，分别将培养12、24、48、72h的培养皿转移至温度突然降低12℃的环境下，恒温培养0.5h。然后，吸取50ul的硝酸钾浸泡液转移到干净的载玻片上，挑取有代表性约1cm2大小的菌丝放入载玻片的溶液里，制成孢子囊悬浮液，在显微镜下(10×40)随机观察3个视野，计数每个视野的孢子囊数量。

1.2.3 不同诱导剂和诱导时间对孢子囊和游动孢子数量的影响