盐生杜氏藻软胶囊中β, β-胡萝卜素几何异构体组(2)

盐生杜氏藻软胶囊中β, β-胡萝卜素几何异构体组成的测定

※分析检测食品科学

2008, Vol. 29, No. 06285

ｔｅｎｏｉｄ　Ｓ－５（４．６×２５０ｍｍ）；流动相Ａ：乙腈－甲醇（７５：２５，Ｖ／Ｖ），流动相Ｂ：ＭＴＢＥ，流动相Ａ与Ｂ中分别加入

ａ

０．０５％（Ｖ／Ｖ）三乙胺；线性梯度洗脱：Ｂ在２０ｍｉｎ内由０％增加至８０％，２０～２５ｍｉｎ内Ｂ保持在８０％；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长：４５０ｎｍ；ＰＤＡ光谱收集范围２６０～

ｂ

７００ｎｍ；ＥＬＳＤ信号收集条件：载气压力：０．２１ＭＰａ　（３０Ｐｓｉ），喷雾器温度：４０℃；飘移管温度：４５℃；进样量：２０μｌ。根据其色谱行为和光谱特征对各组分进行鉴定。１．２．４

β，β－胡萝卜素几何异构体的量与其色谱峰面积

的关系

配制不同浓度的几何异构体样品液，在上述色谱和

检测条件下测定各组分在ＰＤＡ和ＥＬＳＤ检测器上的峰面积。回归各异构体含量与其峰面积间的关系。回归同一异构体组分在不同检测器上峰面积间的关系。１．２．５

顺式异构体吸光系数的估算

一般情况下，用于定量分析的吸光系数是指该化合物在λｍａｘ处的吸光系数。β，β－胡萝卜素全反式异构体于４５０ｎｍ处的吸光系数已被报道，如Ａ１％一般在２５００左１ｃｍ右。

在ＰＤＡ检测器上，一种β，β－胡萝卜素顺式异构体的量与其在检测波长处的色谱峰面积呈正线性相关关系，符合朗伯－比尔定律。如果在ＥＬＳＤ检测器上，这种顺式异构体的量与其峰面积间亦存在正线性相关关系，则可回归其在ＰＤＡ和ＥＬＳＤ上峰面积之间的线性相关关系，并计算其斜率。最终，按下列方法估算这种顺式异构体的吸光系数［５］。

　　　　ＫＺ

ＡＺ＝ＡＥ×　——　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（１）

ＫＥ

式中：ＡＺ为顺式异构体吸光系数；ＡＥ为全反式异构体吸光系数；ＫＺ为顺式异构体斜率，即ＰＤＡ峰面积／ＥＬＳＤ峰面积；ＫＥ为全反式异构体斜率，即ＰＤＡ峰面积／ＥＬＳＤ峰面积。１．２．６

几何异构体的定量检测

根据朗伯－比尔定律，按下列公式计算β，β－胡萝

ｃ

ａ．全反式异构体；ｂ．９－顺式异构体；ｃ．１３－顺式异构体。图１　　　β，β－胡萝卜素全反式和常见顺式异构体结构

Fig.1 Molecular structures of all E-β，β-carotene and the most

commonly encountered Z-isomers

胡萝卜素几何异构体组分的电子吸收光谱和质量信号，

由二者峰面积之比推算每个组分的吸光系数，最终实现在Ｃ３０－ＨＰＬＣ－ＰＤＡ系统上β，β－胡萝卜素各几何异构体的定量检测。最终根据其色谱峰面积，可以准确测量出盐生杜氏藻软胶囊中β，β－胡萝卜素几何异构体的组成。１１．１

材料与方法

材料、试剂与仪器

实验用β，β－胡萝卜素标准样品（纯度（９９．９％）　　　　Ｓｉｇｍａ

公司。所检盐生杜氏藻胶囊为（天光牌盐藻胶囊）　　　　天津天光高科技开发有限公司；碘和丙酮（均为分析纯试剂）北京化工厂；用于ＨＰＬＣ分离的乙腈、甲醇和甲基叔丁基醚（ＭＴＢＥ）（均为色谱纯试剂）　　　　迪马公司。

ＹＭＣ　Ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ　Ｓ－５　Ｃ３０柱、ＨＰＬＣ（含１５７５型溶剂输送系统、ＰＤＡ－２９９６型二极管阵列检测器、２４２０型蒸发光散射检测器）　　　　Ｗａｔｅｒｓ公司；ＭｕｌｔｉＳｐｅｃ－１５０１分光光度计　　　　岛津公司。１．２１．２．１

方法

顺式异构体的制备

配制相同浓度（ｍｇ／ｍｌ）的β，β－胡萝卜素－丙酮和碘－丙酮溶液。向β，β－胡萝卜素－丙酮溶液中滴加碘－丙

酮溶液，最终比例为：碘液：β，β－胡萝卜素液＝１：２０（Ｖ／Ｖ）。混合液在日光或距离４０Ｗ日光灯６０ｃｍ处照射１０ｍｉｎ，而后避光保存产物。１．２．２

盐生杜氏菌软胶囊内容物样品溶液的配制

将胶囊壁扎破，收集内容物，称取一定量的内容物溶于丙酮中用于ＨＰＬＣ分析。进样前用０．４５μｍ滤膜过滤。１．２．３

Ｃ３０－ＨＰＬＣ分离几何异构体

碘诱导的β，β－胡萝卜素异构体混合液用Ｃ３０－ＨＰＬＣ－ＰＤＡ－ＥＬＳＤ分离。色谱条件：色谱柱：Ｗａｔｅｒｓ　ＹＭＣ　Ｃａｒｏ－

卜素异构体的含量。

　　　　　　Ａｙ

ｘ＝—————　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（２）

１０００００Ａ１％

式中：ｘ为样品中所含的β，β－胡萝卜素异构体的量（ｇ）；ｙ为样品溶液的体积（ｍｌ）；Ａ为样品中各组分的峰面积（ｍＶ ｓ）；Ａ１％为吸光系数，为在１ｃｍ光程长的比色杯中１％（Ｗ／Ｖ）浓度溶质的理论吸收值，计算β，β－胡

萝卜素全反式异构体含量时采用值为ε＝２５００（４５０ｎｍ）。