医学生物学实验及习题整理(4)

够正常着色。

2. 亮绿复染的时间不能太久，宜保持在lmin以内，以避免细胞核也被染成绿色。

4. 乳酸脱氢酶在细胞内定位的分析实验原理是什么？

答：乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase存在于细胞胞质中，在NAD+存在的情况下，可催化乳酸氧化脱氢为丙酮酸，反应中底物分子脱下的氢由乳酸脱氢酶的辅酶NAD+接受，还原为NADH+H+，NADH+H+ 可将氢通过受氢体吩嗪硫酸甲酯(phenazine methosulfate, PMS) 供给四唑盐，将其还原为蓝紫色的双甲臜沉淀，因此在细胞内存在酶活性的部位将呈现蓝紫色的沉淀。

5. PAS反应定性分析糖原在细胞中定位的原理是什么？

答：糖原是动物细胞内贮存能量的多糖物质，在动物的肝脏中尤为丰富。检测糖原的一般方法为过碘酸希夫反应。其原理是利用过碘酸将糖原氧化，把葡萄糖分子中2、3 位碳原子间的键打断，将其上的乙二醇变为二醛基，后者与Schiff试剂反应形成深玫瑰红色化合物，从而显示糖原。

6. 苏丹黑法分析脂类在细胞中定位的原理是什么？

答：苏丹黑染色法属于脂溶性染料显示法。苏丹黑是一种脂溶性染料，可溶于脂类从而使细胞中的脂类显示黑色。

7、甲基绿-派洛宁染DNA\RNA原理

甲基绿 带两个正电荷 染DNA 呈蓝绿色

派洛宁 带一个正电荷 染RNA 呈红色

实验二 蛋白质含量的Folin-酚法测定

1．Folin-酚法测定蛋白质含量的原理是什么？

答：蛋白质分子中含有带酚基的酪氨酸(tyrosine)，在碱性条件下其肽链与Cu2+ 螯合，形成蛋白质-铜复合物，此复合物中酪氨酸极易使酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸还原，生成蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度成正比的关系可绘制标准曲线或用公式，求得样品中蛋白质含量。

2．Lambert和Beer定律阐述了什么？

答：该定律阐明了溶液对单色光吸收的多少与溶液浓度及溶液厚度之间的关系。

4．Folin-酚法测定蛋白质实验中应注意的是什么？

答：各管加酚试剂后迅速摇匀，不应出现混浊。

实验三 血清γ-球蛋白的精细分离与纯度鉴定

1． 离子交换层析法分离纯化蛋白质的原理是什么？

答：血清中含有清蛋白（albumin）和各种球蛋白(α-、β-、γ-球蛋白)，经初步分离提取可得含球蛋白的粗制品。球蛋白粗制品再用DEAE-纤维素柱层析法进一步分离可纯化出γ-球蛋白。DEAE-纤维素为阴离子交换剂（anion exchanger），在pH6.5条件下，带有正电荷，能够吸附带负电荷的清蛋白、α-球蛋白和β-球蛋白(它们的pI分别为4.6、5.06和5.12)，而γ-球蛋白(pI为7.3)不与DEAE-纤维素结合，因而留在溶液中，此时收集所得即为进一步纯化的γ-球蛋白，纯化的产物可用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其纯度。

2．离子交换层析法分离纯化蛋白质的实验步骤是什么？

答：1. DEAE-纤维素处理；2. 装柱; 3．平衡；4. 样品上样与洗脱收集；5. DEAE-纤维素的再生与保存。

3. 如要测定某种蛋白质的分子量，采用何种层析法最好？

答：如要测定某种蛋白质的分子量，采用凝胶层析法最好

4. 离子交换层析法分离纯化蛋白质实验中应注意的是什么？

答：1. 由于乙酸铵是挥发性盐类，故溶液配制时不得加热，配好后必须密封保存，以防pH