燃料乙醇发酵综合实验2

燃料乙醇发酵综合实验

实验2 ：摇瓶中酵母菌细胞计数 一、 实验目的

1. 了解血球计数板的构造和使用方法 2. 学会用血球计数板对酵母细胞进行计数 二、 实验材料

1. 菌种 酿酒酵母液体培养液

2. 其它 显微镜，血球计数板，盖玻片，酒精灯，吸管，滤纸等 三、 方法与步骤

1. 检查血球计数板 在正式计数前，先用显微镜检查计数室，看其是否沾有杂质或菌体，若有污物则需要用脱脂棉蘸取95%酒精轻轻擦洗计数板的计数室，再用蒸馏水冲洗计数板，用滤纸吸干其上的水分，最后再用擦镜纸擦干净；

2. 稀释样品 稀释的目的在于便于计数，稀释后的样品，以每小格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可；

3. 加样 先将盖玻片放在计数室上面，用吸管吸取一滴已稀释好的菌液滴于盖玻片的边缘，让菌液自行渗入，多余的菌液用滤纸吸去，稍等片刻，待酵母细胞全部沉降到计数室底部，再进行技术； 4. 计数 将加好样品的计数板放到显微镜载物台中央，然后按下列步骤寻找计数室并计数

（1） 找计数室 先在低倍镜下寻找计数板大方格网的位置。寻找时，

显微镜的光圈要适当缩小，使视野偏暗，然后顺着大方格线移

动计数板，使计数室位于视野中间；

（2） 转换高倍镜 转至高倍镜后，适当调节光亮度，使菌体和计数室

线条清晰为止，然后将计数室一角的小格移至视野中； （3） 计数 计数时，如用16*25规格的计数板，要按对角线方位，取

左上、右上、左下、右下四个大格内的细胞逐一进行计数；如果使用25*16规格的计数板，计数时要加上中间一格，计五格的细胞数；计数时当遇到位于大格线上的酵母菌时，一般只计此大格的上方及右方线上的细胞（或下方及左方线），每个样品重复计数三次，取其平均值，按下列公式计算细胞数。 5. 计算

（1）16*25型：酵母细胞数/毫升=（100小格内酵母菌细胞总数/100）*400*10*1000*稀释倍数

（2）25*16型：酵母菌细胞数/毫升=（80小格内酵母菌细胞总数/80）*400*10*1000*稀释倍数

6.清洗 计数板使用完毕后，用蒸馏水冲洗，绝不能用硬物洗刷，洗后待其自行晾干或用滤纸吸干，最后用擦镜纸擦干净。 四 实验结果

三次测定结果：每毫升菌液中酵母细胞数平均值为：--------

实验3 酵母菌的活体染色观察及死亡率的测定 一、 实验目的

学会并掌握酵母菌的活体染色方法，能在发酵过程中及时掌握菌体的性能 二、 原理

活的微生物，由于不停的新陈代谢，使细胞内氧化还原值低，且还原能力强，当某种无毒的染色液进入活细胞后，可以被还原脱色；当染料进入死细胞及代谢缓慢的老细胞后，这些细胞因无还原能力或还原能力差而被着色。在中性和弱酸性条件下，活的细胞原生质不能被染色剂着色，若着色则表示细胞已经死亡，故可以此来区别活菌与死菌。 三、 实验材料

1. 菌种 酿酒酵母28度下恒温培养48小时的液体摇瓶

2. 试剂 以pH6.0的0.02mol/l磷酸缓冲溶液配制的0.05%美兰染色液

四、 方法与步骤

取0.05%美兰液一滴，置载玻片中央，然后取酵母液少许加入美兰液中混匀，染色2-3分钟，加盖片，于高倍镜下进行观察，并计数已变蓝的细胞与未变蓝的细胞（可计5-6个视野的细胞数）。 五、 实验结果

酵母死亡率一般用百分数表示，即死亡细胞占总细胞的百分数，在显微镜下数一定视野的死、活细胞数，记录并计算。

死亡率=（死细胞总数/死、活细胞总数）*100%

实验4 酵母菌热死温度的测定 一 实验目的

1.了解酵母菌热死温度测定的原理及意义 2.学习酵母菌热死温度测定的操作技术 二 原理

热死温度是指液态培养的微生物，在某温度下10分钟即被杀死，此温度称为微生物的热死温度；测定酵母的热死温度是掌握酵母性质必须具备的知识之一。酵母的热死温度往往受培养基的含水量、微生物细胞的含水量、培养基的pH值、培养基中氮的含量、细胞的菌龄和是否能形成孢子等影响，为了防止这种缺点，习惯上先将实验酵母移到液体培养基中，在25度培养24小时，或从扩大培养的酵母中采取。

酵母的热死温度除与培养基种类有关外，与加热时间长短也有关，在啤酒厂所选择的温度为40-60度，每个间隔温度为2度，保湿时间多以5-10分钟为度，在啤酒厂习惯用10分钟为测定的保温时间。 三 实验材料 1.菌种 酿酒酵母 2.培养基 PDA培养基

3.其它 恒温水浴箱，恒温箱，无菌移液管，计时表，温度计，酒精灯，酒精棉球。 四 方法与步骤

取盛有5ml的灭菌PDA培养基试管一组，每管用无菌吸管接入用PDA培养24小时后的酵母悬液0.1毫升，取已接种的试管3支浸入40℃水浴中保温，其中1支管中插入温度计，另两只不插，当插温度计的试管温度达到40℃时，开始记录时间，并保持10分钟，立即拿出，放到冷水中冷却，然后用同样的方法测定其它温度，如42℃，44℃，46℃······以至60℃再将各组试管置25℃保温箱中，培养后观察。 五 结果

在一周培养时间内，不能产生发酵现象的最低温度，就是该酵母的热死温度。但通常情况下，则以此测得的最低温度加1-2℃为该酵母的热死温度，如酵母在52℃保温10分钟，培养后 …… 此处隐藏：596字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……