发酵法年产5万吨乙醇的工艺设计【毕业设计论文(20)

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3.3.3酵母的培养工艺

乙醇发酵所需酵母的接种量一般为10%，对于大型发酵罐来说，所需的酵母量是很大的。所以必须进行扩大培养才能满足生产的要求。酵母的扩大培养通常可分为两部分进行：第一部分从斜面军中逐级扩大到卡氏罐（或大三角瓶），有的企业一直到小酒母，这一部分是是在纯培养条件下进行，即严格保证该过程不受杂菌的污染；第二部分从小酒母，有时从中酒母开始，一直到大酒母，该过程是在限制杂菌的条件进行，即是杂菌尽可能少进入培养基中，同时创造有利于酵母生长的条件，这个过程称为自然纯培养过程。下面就酵母扩大培养的过程和详细介绍。

1) 纯培养过程 该过程是酵母扩大培养的基础，生产上希望该阶段培养得到细胞健壮，没有杂菌的种子酵母。因此，无菌操作要求严格，酵母培养基的成分也高。一般多采用米曲汁或麦芽汁作为培养基，其中含有丰富的碳、氮及其它营养物质，很适合酵母的生长繁殖，这里先简单介绍培养基的制备。

麦芽汁培养基。将麦芽磨碎后，加水，于55~60℃糖化4h，再过滤，将滤液调整至10~12°Bx。其它做法同米曲汁。米曲汁或麦芽汁的pH一般控制在4~4.5左右。

该阶段的流程表示如下：

斜面菌种 三角瓶培养 卡氏罐培养 液体试管 原始出发菌种

①原始菌种 原始菌种是指保藏的酵母菌种。它们是经过纯种分离的优良酵母菌种。保藏时间长的原菌，应接入新鲜斜面试管进行活化，以便使酵母处于旺盛的生活状态。

②斜面菌种培养 将活化后的酵母菌在无菌的条件下接入新鲜斜面试管，在恒温培养箱中28~30℃下培养3~4天待斜面生长出白色菌苔，即培养成熟。

③ 液体试管培养 在无菌条件下，有接种针自西面菌种试管挑选一环酵母菌体，接入装有10mL米曲汁的液体试管，摇匀后，于28~30℃后恒温培养24h，即培养成熟。

④ 三角瓶培养 三角瓶培养阶段，可视其容量选用不同的培养基。如用250mL，可装入100mL米曲汁，如用3000mL大三角瓶，可装入米曲汁和经过过滤的酵母糖化醪各500mL，灭菌后备用。接种时，应先用乙醇消毒液消毒瓶口，在无菌条件下，将液体试管全部接入三角瓶中，28~30℃条件下保温培养15~20h，即可成熟。

⑤卡氏罐培养 卡氏罐培养也可以用大三角瓶代替。卡氏罐培养基可使用糖化醪，以使酵母逐渐适应培养条件。该接种过程基本同三角瓶培养，在无菌条件下，将三角瓶培养液接入罐内，在28~30℃下培养15~20h即可。

2) 自然纯培养过程 该阶段主要工艺流程如下：

卡氏罐 小酒母罐 大酒母罐 成熟酒母醪

进入该阶段后，要使用大量的培养基，如果 继续使用米曲汁或麦芽汁就不经济了。生产上这一阶段的酒母培养基多采用酒母糖化醪。制造酒母糖化醪的原料以玉米为最好，因为玉米中除了含有大量淀粉外，还含有丰富的蛋白质等，能满足酵母繁殖所需的营养，另外，玉米的无机盐和维生素颔联也很丰富，所以，当用玉米为原料时，不需补加其它营养物质。

此外，还要对糖化醪进行杀菌、调酸处理。糖化醪中存在着产酸的细菌，所以一般糖化醪还要加温至85~90℃杀菌15~30min，以杀死细菌的营养体。生产中常将糖化醪pH调到4.0~4.5，以抑制产酸细菌对酵母的污染。

对菌种的陪培养有几种不同的方法，有间歇培养、半连续培养、连续培养。本文采用间歇培养，并对其进行简单介绍。

间隙培养法分为小酒母罐和大酒母罐两个阶段进行培养。先将酒母罐刷洗干净并对罐体、管道进行杀菌后，将酒母糖化醪打入小酒母培养罐中，并接入上阶段已培养好的酵母菌。通无菌空气，使酒母与醪液混合均匀，并能溶解部分氧气，供酵母增值使用。控制醪液28~30℃进行培养，待糖分降低40%~45%（外观糖测定），其乙醇含量3%~4%（体积分数）左右，并且液体培养CO2冒出，即培养成熟。酒母打出后，洗刷罐体，并杀菌准备下一批酒母培养使用。间隙培养的生产效率低，但酵母质量易于控制，故仍被工厂使用[17]。

3) 成熟酵母质量指标 酵母的扩培不仅要有一定的数量，还要具有很好的质量。成熟酵母质量的好坏，会直接影响乙醇的产率，在实际生产中，除要求细胞形态整齐、健壮、没有杂菌、出芽多、耗糖快外，还要通过下述指标进行检查。

① 酵母细胞数 酵母细胞数是观察酵母繁殖能力的一项指标，也是反应酵母培养成熟的指标。