蛋白质两性性质及等电点的测定

关键词：蛋白质蛋白质两性性质等电点两性电解质带电基团酚基巯基胍基咪唑基两性反应 实验原理蛋白质是两性电解质。蛋白质分子中可

以解离的基团除 N 端α―氨基与 C 端α―羧基外，还有肽链上某些氨基酸残基 的侧链基团，如酚基、巯基、胍基、咪唑基等基 团，它们都能解离为带电基团。因此，在蛋白质 溶液中存在着下列平衡：

阳离子两性离子阴离子pH<pIpH=pIpHpI 电场中：移向阴极不移动移向阳极调节溶液 的 pH 使蛋白质分子的酸性解离与碱性解离相等， 即所带正负电荷相等，净电荷为零，此时溶液的 pH 值称为蛋白质的等电点。在等电点时，蛋白质 溶解度最小，溶液的混浊度最大，配制不同 pH 的缓冲液，观察蛋白质在这些缓冲液中的溶解情

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况即可确定蛋白质的等电点。试剂和器材 一、试剂

1mol/L 乙酸：吸取 99.5%乙酸 2.875mL,加 水至 50mL。0.1mol/L 乙酸：吸取 1mol/L 乙酸 5mL,加

水至 50mL。

0.01mol/L 乙酸：吸取 0.1mol/L 乙酸 5mL,加水至 50mL。 0.2mol/LNaOH:称取 NaOH2.000g,加水至

50mL , 配 成 1mol/LNaOH 。 然 后 量 取 1mol/LNaOH10mL , 加 水 至 50mL, 配 成 0.2mol/LNaOH。0.2mol/LHCl:吸取 37.2%HCl4.17mL,加水 至 50mL , 配 成 1mol/LHCl 。 然 后 吸 取

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1mol/LHCl10mL,加水至 50mL,配成 0.2mol/LHCl。0.01%溴甲酚绿指示 剂：称取溴 甲酚绿

0.005g,加 0.29mL1mol/LNaOH,然后加水至 50mL。二、测试样品

0.5%酪蛋白溶液：称取酪蛋白 0.25g 放入50mL 容量瓶中，加入约 20mL 水，再准确加入 1mol/LNaOH5mL,当酪蛋白溶解后，准确加入

1mol/L 乙酸 5mL,最后加水稀释定容至 50mL,充分摇匀。

三、器材试管 1.5×15cm;移液管 1mL,2mL, 10mL;胶头滴管。 操作方法

一、蛋白质的两性反应

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取一支试管，加 0.5%酪蛋白 1mL,再加溴甲酚绿指示剂 4 滴，摇匀。此时溶液呈蓝色，无沉 淀生成。

用胶头滴管慢慢加入 0.2mol/LHCl,边加边摇知道有大量的沉淀生成。此时溶液的 pH 值接 近酪蛋白的等电点。观察溶液颜色的变化。 继续滴加 0.2mol/LHCl,沉淀会逐渐减少以

至消失。观察此时溶液颜色的变化。

滴加 0.2mol/LNaOH 进行中和，沉淀又出现。继续滴加 0.2mol/LNaOH,沉淀又逐渐消失。观察 溶液颜色的变化。

二、酪蛋白等电点的测定取同样规格的试管 7 支，按下表精确地加入 下列试剂：试剂管号 12345671.0mol/L 乙酸 1.60.8000000.1mol/L乙酸00410000.01mol/L

乙 酸 00002.51.250.62H2O2.43.2031.52.753.38溶

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液的 pH3.53.84.14.75.35.65.9 混浊度充分摇匀，然后向以上各试管依次加入 0.5% 酪蛋白 1mL,边加边摇，摇匀后静置 5min,观察

各管的混浊度。用-、+、++、+++等符号表示各管的混浊度。 根据混浊度判断酪蛋白的等电点。最混浊的一管 的 pH 值即为酪蛋白的等电点。

注意事项在测定等电点的实验中，要求各种试剂的浓

度和加入量相当准确。window._bd_share_config={"mon":{"bdSn sKey":{},"bdText":"","bdMini":"2","bdMini List":false,"bdPic":"","bdStyle":"0","bdS ize":"32"},"share":{},"image":{"viewList" :["copy","sqq","qzone","tsina","tqq","ren

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