感受态大肠杆菌制备方法(5)

感受态细胞的制备

（500ul）加入到新鲜的50mlLB培养液中，于37℃振荡培养至OD600约为0.4—0.6(培养时间2h40～50min)。冰浴30分钟后4℃,1000g离心10min，弃上清，收获细菌。加入原体积十分之一（这里为5ml）的1×TSS液(冰预冷)悬浮细胞，然后分装成100ul/份，全部冰上操作，－80度保存。

三、转化时取一管（100ul）感受态细菌，（冻寸细胞应置于冰上缓慢融化后立即使用）加入3-5ulDNA（0.1～100ng），轻轻混匀后冰浴30min。加入0.9ml含20mmol/L葡萄糖的LB培养液，37度150r/min温和振荡培养60min，涂布，室温放置约20分钟后放于37度恒温培养箱过夜培养（17-20h）。