聚合酶链式反应技术(PCR)(14)

聚合酶链式反应技术

循环数： PCR 的循环数主要由模板 DNA 的量决定，一般 20~30 次循环数较合适，过多的循环数会增加非特异扩增 产物，具体要多少循环数可通过预试验确定。 PCR 产物积累规律： 反应初期产物以 2n 呈指数形式增加，至一定的循环数后，引物、模板、DNA 聚合酶形成一种平衡，产物 进入一个缓慢增长时期( “停滞效应” ,即“平台期” 到达平台期所需 PCR 循环数与模板量、PCR 扩增效率、 ) 。 聚合酶种类、非特异产物竟争有关。

PCR 扩增仪

聚合酶链式反应技术

PCR常见问题

一.没有扩增产物

1.循环温度：变性温度、退火温度

2.引物设计

3.DNA聚合酶活性

4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)

5、DNA样品

二.非特异产物及电泳呈涂布状

1.Mg2 浓度

2.调整引物、模板、聚合酶的用量

3.适当减少循环数

4.适当提高退火温度，缩短退火或延伸时间

原位杂交组织化学技术的基本方法

信息来源：本站原创 更新时间：2005-10-22 13:04:09

一、核酸分子杂交技术

1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。自此以后，由于分子生物学技术的迅猛发展，特别是70年代末到80年代初，分子克隆">克隆、质粒和噬菌体DNA的构建