蛋白质组学答案终稿(5)

山师限选课答案

寻找蛋白质之间的相互作用，动态地反映生物体所处的状态。

12，相互作用网络的研究技术等

样品 样品制备 样品分离 蛋白质点提取鉴定 功能确定 生物信息学 图像分析

13，

1）蛋白质组样品制备基本原则

尽可能提高样品溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失

解除蛋白质之间以及与其它生物大分子的相互作用，使蛋白质完全处于变性状态和还原状态 减少对蛋白质以及蛋白质组的人为修饰（假点）

总之：尽可能简单，减少步骤 14. 一、样品制备的前控制

1. 染色方法的选择

采用双向电泳等方法纯化蛋白质，往往需要染色后才能准确获得用于分析鉴定的样品。染色方法

与蛋白质分析的灵敏度高度相关，染色效果十分重要。

2. 污染的控制(角蛋白)在蛋白质组学分析中，常见a-角蛋白的污染，主要来自实验人员的皮肤

屑和头皮屑。也有b-角蛋白的污染，来自实验人员穿着的毛衣。

2）盐分和去污剂

在进行质谱分析前，应特别注意样品中盐分和去污剂等含量对质谱分析的影响。MALDI-MS分析

技术可以耐受一定量的小分子杂质和盐类物质，但样品中含有表面活性剂或其他难溶盐分，则很难产生好的结晶。

二.样品的制备

操作步骤及注意事项：

（1）切胶和脱色

切胶前用ddH2O洗胶2次，每次15min.

用干净的刀片从胶上切取蛋白点，将胶块切成1mm3大小，放入200ml Eppendorf管内。切胶时

尽量不要超出蛋白点的范围，胶块的大小要适当。胶块太小在以后的抽取步骤中可能被吸掉, 太大不利于脱色、酶切、抽取等步骤。