蛋白质组学答案终稿(4)

山师限选课答案

酸肽段和磷酸化苏氨酸肽段，还可以研究磷酸化酪氨酸肽段。这方法的显著特点是：通过碳化二乙胺的催化作用将胱氨酸加到磷酸基团上，再通过巯基乙胺与碘乙酰树脂柱的共价结合使磷酸化肽得以纯化。但肽的N端首先用叔丁氧羰基保护；C端进行酰胺化保护，以免复杂反应产生。磷

酸肽的洗脱是通过三氟乙酸切割氨基磷酸键完成的。碳化二乙胺方法在质谱分析前，需要多步化学反应和柱纯化过程，所以可能会有大量的样品丢失，而且这种方法只适用于磷酸肽的富集，目前还没有应用于磷酸化蛋白质的富集

7. 原理:质谱是很好的蛋白质鉴定工具，但不同的蛋白质或多肽在质谱中有不同的离子化效率，

所以不能从质谱图中对蛋白质进行定量分析。以稳定同位素为内标，将物理化学性质相同、质量不同的同位素掺入两种样品，混合后不同状态的相同蛋白质因质量差异在质谱图中表现为一对峰，通过比较质谱峰强弱，精确定位出蛋白质不同状态下表达量的变化。这就是基于稳定同位素标签和液相色谱与串联质谱联用技术定量和鉴定蛋白质的理论依据。

8. 线粒体的分离纯化

基本原则：先制备组织或细胞匀浆，然后进行差速离心，低速去除细胞核及细胞碎片；高速离心分离线粒体，有必要还可进行密度梯度离心。

组织细胞的特异性及所要线粒体的实验用途决定了方法的细节。这些细节包括：匀浆器的选择、缓冲液的成分、许可混杂其他细胞器的程度等。通常用Ficoll、Percoll、碘化介质（OptiPrep, Nycodenz, metrizamide）和蔗糖来形成密度梯度进一步纯化线粒体

纯度鉴定：分离线粒体时可能混杂其他细胞器，线粒体的相对纯度可以通过检测线粒体或其他可

能存在的细胞器的标志酶来确定。线粒体纯度最好的方法之一是测定几种标志酶的活性。一方面可检测所分离的线粒体是否保留了其生物学功能，另方面检测其他细胞器污染程度如微粒体、溶酶体等。线粒体组分还可以通过电子显微镜检查。

9. 1. 富集低丰度蛋白质，完善全细胞蛋白质组2. 提供蛋白质的亚细胞定位信息3. 加深对亚

细胞组分的结构功能理解4. 加深对细胞生理分子机制的理解5. 亚细胞蛋白质组的差异表达谱 10. 1. 细胞器的蛋白质组学研究2. 大分子结构体和多蛋白复合物的蛋白质组学研究3. 酵母的

亚细胞蛋白质组学研究4.核蛋白质组的研究

11， 蛋白质组学研究任务

研究目的

分离蛋白，显示差异，将表现型与功能联系起来；