高效阳离子交换色谱法分离纯化蛋清中的溶菌酶

高效阳离子交换色谱法分离纯化蛋清

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第 2卷第 3期 0 20 02年 5月

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高效阳离子交换色谱法分离纯化蛋清中的溶菌酶李蓉，陈国亮 1 0 9 (西北大学化工系陕西西安 7 0 6 )摘要：建立了用高效阳离子交换色谱分离纯化蛋清中溶苗酶的新方法讨论了纯化的工艺条件。蛋清样品匀浆后用氯化钠初步纯化，然后用弱阳离子交换柱 XIA EWC D C - X分离：结果表明被纯化的溶苗酶和杂蛋白得到很好分离：经活性检测，溶菌酶过柱后的插性回收率为 1 7蛋白的比活为1 6 rg纯化倍数提高了 5 6倍。用尺 0%, 547U/ . a .寸排阻色谱 (E鉴定， S C)得到的溶苗酶呈均一性。该法较传统软基质低压离子交换色谱分离速度快 .纯化效率高。 关键词：高嫂阳离子交换色谱；溶菌酶；蛋清中围分类号： 6 8 0 1 0 5;. 5文献标识码： A文章编号：0 08 1 (0 20—2 90 10—7 3 2 0 )30 5—3

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溶菌酶是一种能够溶解细菌胞壁的碱性蛋白， 在医学上具有重要的应用价值，可用来制

备消炎药， 与抗菌素合用可以治疗溃疡、口腔和鼻腔粘膜炎。 也可以用作食品添加剂。 溶菌酶广泛存在于动植物及微生物体内，鸡蛋清和哺乳动物的乳汁是溶菌酶的重要来源，木瓜、无花果和卷心菜等植物也含丰富的溶菌酶。关于溶菌酶的分离和纯化方法主要有结晶法…离子交换 1、法-和亲和色谱法_, 2 J 3龙泪等_对这些方法的近期 _ 4 J发展作了综述。结晶法操作简单、成本低，适于工业化生产，但得到的产品纯度不高亲和色谱法分离

中分离出溶菌酶。但由于亲和柱造价高、制作困难、 娇脆、柱寿命短等缺点使其应用受到限制离子交换色谱是制备高纯度溶菌酶最常用的方法，常用的 离子交换剂有 Dale -6、 oK 44磷酸纤维素 (C)羧甲 C P、 基纤维素( MC和羧甲基琼脂糖 ( MS等， C ) C )它们对溶菌酶都有较强的吸附能力。由于这些填料剐性小，收缩性大，再生手续麻烦，使其分离速度和效率受到影响，尤其从卵清提取溶菌酶时，色谱柱常被堵塞。为了克服上述弊端，我们用以本室合成的硅胶基质弱阳离子交换剂 XI C - X作为填料制作 DA EWC的色谱，分离纯化了蛋清中的溶菌酶，获得了良好的分离效果。这个方法比传统的软基质离子交换色谱分离法速度快，纯化效率高。该法的建立，不仅为蛋

溶菌酶具有较高的选择性，用溶菌酶分解胞壁的消化产物作配体制成的亲和柱， J有可能直接从蛋清收稿日期：0 11 1 2 9—03

作者摘彳 r李蓉 17年生女 9 1讲师，博士研究生通讯鞋系^:陈国亮副研究员，电话 0 9 8 7 I9 E m i d a l 6 (2 )3 32, - a o dc@2 3 l g基金项目：陕西省科委基金资助 (6砷 )研究成果获 19年陕西省教育委员会科技进步一等奖、0 1 9} 9 99 20年陕西省科技进步三等奖

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色

谱

第2 O卷

清中溶菌酶的色谱分析和实验室制备提供了一个简单、快速、有效的分离方法，也为用制备色谱进行大规模纯化提供了依据。有关该方法的研究目前尚未见报道。

2结果与讨论2 1初步纯化条件的选择 .初步纯化的目的在于除去与目标产物共存的大

1实验部分1 1仪器与试剂 .

量杂质，以减轻深度纯化的柱负担，保

证色谱柱安全可靠使用。常用的初步纯化方法有盐析法、机溶有剂沉淀法、变性法、剂萃取和膜分离法由于有热溶机溶剂沉淀和热变性法易使酶失活，剂萃取纯化溶

L A型高效液相色谱仪( c6日本岛津公司), 72 2型光栅分光光度计 (海第三分析仪器厂)上 …… 此处隐藏：5718字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……