抗黄瓜花叶病毒RNAi载体的构建及烟草的转化

ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，１１（５）：６９－７２Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ２０１０，ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨＡＡＳ．Ａｌｌｒｉｇｈｔｓｒｅｓｅｒｖｅｄ．

ＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ

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Ａｂｓｔｒａｃｔ　［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］ＡｉｍｅｄｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔＲＮＡｉｖｅｃｔｏｒｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｃｕｃｕｍｂｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓａｎｄｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｔｈｉｓｖｅｃｔｏｒｉｎｔｏｔｏｂａｃｃｏ．［Ｍｅｔｈｏｄ］ＲＴＰＣＲｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏａｍｐｌｉｆｙｃｕｃｕｍｂｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓＮＳ０４ａｎｄｐｒｏｃｅｓｓＲＮＡ２ｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｏｆｔｏｍａｔｏｉｓｏｌａｔｅｓ．ＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓｏｆｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｉｎＲＮＡ２ｅｎｃｏｄｅｄＣＭＶ２ａｈａｄ９８．０％ａｎｄ９６．５％ｈｏｍｏｌｏｇｙｗｉｔｈｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｎｄａｍｉｎｏａｃｉｄｏｆ

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　　Ｃｕｃｕｍｂｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ（ＣＭＶ）ｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｔｏｃａｕｓｅｙｉｅｌｄｒｅｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｅｖｅｎｎｏｈａｒｖｅｓｔｏｆａｖａｒｉｅｔｙｏｆｅｃｏｎｏｍｉｃｃｒｏｐｓ，ｂｕｔｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｎｔｉｖｉｒｕｓｂｒｅｅｄｉｎｇ，ｔｉｓｓｕｅｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｐｅｓｔｉｃｉｄｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｃａｕｓｅｅｎｖｉ

［１］

ｒｏｎｍｅｎｔａｌｐｏｌｌｕｔｉｏｎ，ａｎｄｔｉｍｅｃｏｎｓｕｍｉｎｇ．Ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｔｈｅｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎｏｆｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇｉｓａｃｏｍｍｏｎｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎｅｘｉｓｔｅｄｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｉｆｅ，ｗｈｉｃｈｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｗａｙｏｆｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＴｈｅｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇｏｆＧＭｓｐｅｃｉｆｉｃｃａｎｂｅｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｂｙｇｒａｆｔｉｎｇｆｒｏｍｓｉｌｅｎｔｓｔｏｃｋｔｏｎｏｎｓｉｌｅｎｔｓｃｉｏｎ，ｔｈｅｎｔｈｅｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇｏｆｔｈｉｓｋｉｎｄｏｆｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇｓｉｇｎａｌｆｒｏｍｏｎｅｃｅｌｌｏｒａｔｉｓｓｕｅｔｏａｎｏｔｈｅｒｃｅｌｌｏｒｔｉｓｓｕｅｉｓｄｅｆｉｎｅｄａｓｓｙｓｔｅｍｉｃ

［２－５］

ＲＮＡｉ（ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ）．ＲＮＡｉｈａｓｓｏｍｅａｄｖａｎｔａｇｅｓｗｈｉｃｈａｒｅｄｅｆｉｃｉｅｎｔｉｎｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｔｉｃｒｅｓｅａｒｃｈｍｅｔｈｏｄｓ，ｉｔｈａｓｐｒｏｖｉｄｅｄａｎｅｗｗａｙｔｏｓｔｕｄｙｐｌａｎｔｇｅｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｅｌｅｔａｎｔｃａｎｂｅｃｒｅａｔｅｄｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈａｂｉｔａｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｅｘ

［６］

ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃｇｅｎｅｓ．Ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃ，ｅｆｆｉ

，ＲＮＡｉｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｈａｓａｃｉｅｎｔａｎｄｓｙｓｔｅｍａｔｉｃＲＮＡｉｓｅｑｕｅｎｃｅ

，ｉｔｈａｓｂｅｅｎｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｉｔｓｕｎｉｑｕｅｒｏｌｅｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙｓｐｅｃｉａｌｒｏｌｅ

ｉｎｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｖｉｒｕｓｅｓ，ｗｏｒｍｓａｎｄｈａｒｍｆｕｌ

［７－８］

ｐａｒａｓｉｔｅｓ，ａｓｗｅｌｌａｓｇｒａｆｔｉｎｇｂｒｅｅｄｉｎｇ．

Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｏｎＣＭＶａｒｅｆｏｃｕｓｅｄｏｎｒｅｐｌｉｃａｓｅｐｒｏｔｅｉｎｅｎｃｏｄｅｄｂｙＲＮＡ１ｇｅｎｏｍｅｏｒＣＰｐｒｏｔｅｉｎｅｎｃｏｄｅｄｂｙＲＮＡ３ｓｕｂｇｅｎｏｍｉｃ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｐｒｅｃｌｏｎｅｄＣＭＶＲＮＡ２ｇｅｎｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｔｈｅ２ａｒｅｐｌｉｃａｓｅｐｒｏｔｅｉｎｗｈｉｃｈｗａｓｅｎｃｏｄｅｄｂｙＲＮＡ２ｇｅｎｏｍｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｓｉｇｎＲＮＡｉａｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒ，ｔｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄＲＮＡｉｖｅｃｔｏｒｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｔｏｔｏｂａｃｃｏｔｈｒｏｕｇｈＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄ

，ａｎｄｔｈｅａｎｔｉｖｉｒａｌａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｔｏｂａｃｃｏｐｌａｎｔｓｍｅｔｈｏｄ

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Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：Ｍａｙ２６，２０１０　　Ａｃｃｅｐｔｅｄ：Ｊｕｎｅ２９，２０１０ＳｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｏｐｅｒａｔｉｏｎＰｒｏｇｒａｍ（２００８ＤＦＡ３０５６０）；ＰｒｅｌｉｍｉｎａｒｙＲｅｓｅａｒｃｈＳｐｅｃｉａｌＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆ９７３Ｐｒｏｇｒａｍ（２００８ＣＢ１１７０１８）；ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｊｅｃｔｆｏｒＨｉｇｈＬｅｖｅｌｏｆＴａｌｅｎｔｓｏｆＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＲＣＺＸ２００７３２）．

ｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅｍａｉｌ：ｘｂｃ＠ｓｈｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎＣ

ＭａｔｅｒｉａｌｓａｎｄＭｅｔｈｏｄｓ

Ｍａｔｅｒｉａｌｓ

ｐｉＲＤＧ１２ａｎｄｐＢｉ３５ＳＧ１２ｗｅｒｅｓａｖｅｄｂｙＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｒｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＴＯＰ１０ｃｏｍｐｅｔｅｎｔｃｅｌｌｗａｓｐｕｒｃｈａｓｅｄｆｒｏｍＳｈａｎｇｈａｉＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ；ｐｌａｎｔｔｏｔａｌＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｋｉｔｗａｓｐｕｒｃｈａｓｅｄｆｒｏｍＴｉａｎｇｅｎｇＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｍｐａｎｙ；ＡＭＶｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎ

，ＴＮＡｌｉｇａｓｅ，ａｎｄＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｋｉｔｓｃｒｉｐｔａｓｅ４Ｄ

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Ｔａｂｌｅ１　ＰｒｉｍｅｒａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｆｏｒＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎＰｒｉｍｅｒｎａｍｅＰｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅＣＭＶ２ＳＰ１ＣＭＶ２ＡＳＰ２ＣＭＶ２ＳＰ３ＣＭＶ２ＡＳＰ４ＣＲ２ＢｇＣＲ２ＫｐＣＲ２ＳＢ

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