抗黄瓜花叶病毒RNAi载体的构建及烟草的转化(3)

ＺＨＡＮＧＹｕｅｔａｌ．ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＲＮＡｉＶｅｃｔｏｒＷｈｉｃｈＲｅｓｉｓｔＣｕｃｕｍｂｅｒＭｏｓａｉｃＶｉｒｕｓａｎｄＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＴｏｂａｃｃｏ７１

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（１１２４８ｂｐ），ａｎｄｔｈｅｆｒａｇｔｈｅｐＢｉ３５ＳＣＲ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ

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Ｔａｂｌｅ３　ＰｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｎｄａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓｏｆＣＭＶ２ａｇｅｎｅｏｆＣＭＶｉｓｏｌａｔｉｏｎｓ

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Ｔｈｅｄｏｗｎｌｅｆｔｉｓｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓ，ｔｈｅｕｐｐｅｒｒｉｇｈｔｉｓａｍｉｎｏａｃｉｄｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓ．１－１９ａｒｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｗｉｔｈｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅＮｏ．ｉｎｔｈｅｌｅｆｔｏｆｆｉｇｕｒｅｆｒｏｍｕｐｔｏｂｏｔｔｏｍ

．

Ｍ：ＤＬ２０００；１：ＣＲ２ＢＫｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ｆｉｇ．３　ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣＲ２Ｂ

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Ｍ：ＤＬ４５００；１：ｐｉＲＤＣＲ２．ＳｗｉｔｈＣｌａＩ．

Ｆｉｇ．５　Ｔｈｅｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓ

ｍｉｄｐｉＲＤＣＲ２．

Ｓ

Ｍ：ＤＬ２０００；１：ＣＲ２ＢＫｓｅｑｕｅｎｃｅ．

Ｆｉｇ．４　ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣＲ２ＳＢ

ＯｂｔａｉｎｉｎｇｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｔｏｂａｃｃｏｐｌａｎｔｓＴｒａｎｓｇｅｎｉｃｔｏｂａｃｃｏｐｌａｎｔｓＤＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｂｙｐｒｉｍｅｒｓＣＲ２Ｋｐ／ＣＲ２ＳＢ

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ｔｈａｔｔｈｅＰＣＲ＿ＣＲ２＿ＢＫｆｒａｇｍｅｎｔｗｉｔｈ６９３ｂｐａｎｄｔｈｅＰＣＲ＿ＣＲ２＿ＳＢｆｒａｇｍｅｎｔｗｉｔｈ７４１ｂｐｗｅｒｅａｍｐｌｉｆｉｅｄ（Ｆｉｇ．７，８）

，

Ｍ：ＤＬ４５００；１：ｐＢｉ３５ＳＣＲ２ｗｉｔｈＢａｍＨⅠ．

Ｆｉｇ．６　Ｔｈｅｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓ

ｍｉｄｐＢｉ３５ＳＣＲ２

ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｔｈａｔｔｈｅｏｂｔａｉｎｅｄｔｏｂａｃｃｏｐｌａｎｔｓｈａｄｂｅｅｎｓｕｃｃｅｓｓ

ｆｕｌｌｙｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏｔｈｅｐＢｉ３５ＳＣＲ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄｍｅｔｈｏｄ．