一个控制水稻叶色白化转绿及多分蘖矮杆性状基(7)

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郭涛等：一个控制水稻叶色白化转绿及多分蘖矮杆性状基因ｈｗ－ｌ（ｔ啪鉴定

ＧＡ，处理对突变体ｈｆａ－Ｉ和亲本第２片叶鞘长度的影响

Ｔｈｅ２ｎｄｌｅａｆｓｈｅａｔｈｅｌｏｎｇａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｕｔａｎｔｙａ－ＩａｎｄｔｈｅｗｉｌｄｔｙｐｅｗｉｔｈＧＡｓｔｒｅａｔｍｅｎｔ

表３

２９

Ｔａｂｌｅ３

表示舔加ＧＡ３：—Ｇ～表示没有添加ＧＡ３。

ｍｅａｎ￥ＧＡｔｒｅａｔｍｅｎｔ；—ＧＡ３ｍｅａｎｓｗｉｔｈｏｕｔＧＡ

ｔｒｅａｔｍｅｎｔ

个白化单株并用标记ＲＭｌ７６０５和ＲＭｌｌｌ３检测。结果在ｈｗ．１（０与ＲＭｌ７６０５之间共检测到５６个重组，而ｈｗ．１（０与ＲＭｌｌｌ３之间存在１１个重组。根据重．组率计算其遗传距离，ｈｗ．１（０与２个标记间的距离

分别为１．５５ｃＭ和０．４４ｃＭ（图７）。

为了进一步缩小ｈｗ．１（０的定位区间，根据粳稻品种日本晴和籼稻品种９３１１的基因组序列差异，在

ＲＭｌ７６０５和ＲＭｌｌｌ４区间内开发３８个ＩｎＤｅｌ标记，

其中７个标记在ｈｆａ．ｊ和０２４２８间存在多态性（表５）。连锁分析发现在Ｆ２（坷ｈ．１ｘ０２４２８）群体中ＨＷ２、

ＨＷ２１、ＨＷｌ５、ＨＷ３、ＨＷ２７、ＨＷ７与ｈｗ一１（０间分

别发生４２、３０、２４、２２、９、７和２重组事件，而ＨＷ３６与ｈｗ．１（０间则出现零重组。根据重组结果，最

终将ｈｗ．１（０定位在ＨＷ２７一ＨＷ７区间内，遗传距离

圈６蛳１．１和亲本ａ－淀粉酶诱导实验

ｌａｔｅａｓｓａｙｏｆⅡ ａｍｙｌａｓｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｎｈｆａ Ｉａｎｄｔｈｅ

分别为０．１８６ｃＭ和０．０５３ｅＭ（图７．ｃ）。

２．９

ｈｗ－１（０定位区域物理图谱构建

ｔｙｐｅ（ｗＤ

ｂ表示舔加ＧＡ¨—Ｇ～表示投有添加ＧＡ３。

ｗｉｌｄ

ｆｌ￥ＧＡ

从Ｇｒａｍｃｎｅ数据库（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｒａｍｅｎｅ．ｏｒ奶下

载ｈｗ．１（０基因所在区域的克隆序列，根据克隆之间

的重叠关系将克隆首尾相连，随后将ＲＭｌ７６０５～

ＲＭＩ

１

ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；—ＧＡ３ｍｅａｎｓｗｉｔｈｏｕｔＧＡｔｒｅａｔｍｅｎｔ．

表４Ｆ２群体白化和绿叶檀株的分离

６０ｒｓ

；ｅｇｒｅｇａＵｏｎｏｆａｌｂｉｎｏａｎｄｇｒｅｅｎｐｈｎｔｓｉｎＢｐｏｐｕｔａ－

１４之间的多态性标记与克隆序列整合，９个与

Ｆ２群体

Ｆ２ｐｏｐａｌａ－

正常表型

Ｎｏｒｍａｌ

突变表型

Ｍｔｔｔａｎｔ

／ｇａ．ｊ座位紧密连锁的多态性标记锚定在ＡＬ６０６９９９、

２

些女壁９壁

瑚¨∞

（ｉｌ）

ＡＬ６０６６４６、ＡＬ６０６６１９和ＡＬ６０６６５２四个克隆上（图

８），其中与ｈｗ．ｊ俐两侧距离最近的标记ＨＷ２７和ＨＷ７分别锚定在克隆ＡＬ６０６６１９的２９．２ｋｂ和７３．１

蚴螂煳蛳蛳哪

啪ｍ詈｜

勰瑚帆

ｋｂ处。最终将ｈｗ一１（０座位界定在ＨＷ２７和ＨＷ７之

间４６．９ｋｂ的物理距离内，对应于日本晴第４染色体序列（５’＿３’）３３

９０２７０８—３３９４９５６９

个池间表现出多态的标记进一步检测Ｆ２群

ｂｐ区间（ｈｕｐ：／／

邑否与ｈｗ．１（０存在连锁关系。结果第４号３５个供试ＳＳＲ标记有２个（ＲＭｌ７６０５和在基因池间表现多态性。进一步用和ＲＭｌｌｌ３检测１２６个Ｆ２白化单株，结果．１（０与ＲＭｌ７６０５存在１５个重组，而与

存在６个重组。ｈｗ．１（０被初步定位在一ＲＭｌｌｌ３区域内（图７）。

ＷＷＷ．ｇｒａｍｅｎｅ．ｏｒｇ／）。

根据禾本科植物基因组自动注释系统（ｈｔｔｐ：／／

ｗｗｗ．ｇｒａｍｅｎｅ．ｏｒ９０预测该区域的基因组序列，得到１３个ＯＲＦ，其中有８个假定的表达蛋Ｉ！ｔ（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ

ｐｒｏ－

ｔｅｉｎ），４个功能未知的表达蛋白和１个假想蛋白

（ｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌｐｒｏｔｅｉｎ）（表６）。功能注释表明ＬＯＣ—

Ｏｓ０４９５７３２０为假定的ＩＭＭＩ丌ＡＮＴＳ蛋白，ｉｍｍｕｔａｎｔｓ

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细定位ｈｗ－１Ⅲ，将Ｆ２作图群体增加至１

（拥）作为拟南芥的典型叶色突变体，其显著特征为叶