细胞实验步骤(2)

水浴或超声助溶，用0.22um微孔滤膜过滤除菌，置于4℃冰箱中避光保存，两周内有效。

清洁液（酸缸）配制：按重铬酸钾120g，浓硫酸200ml，蒸馏水1000ml比例配制。

二 细胞培养

1．实验所需器械及其准备

1ml玻璃吸管，烧杯，培养瓶，10ml离心管，2ml、1.5ml、0.5mlEP管，冻存管、0.22 um微孔滤器，锡纸，封口膜，多孔培养板（24孔，96孔），移液器，橡胶吸头，酒精灯，75%酒精，注射器，黑色塑料袋，饭盒，试管架，量筒，容量瓶等。

2. THP-1的培养

试剂：RPMI1640，胎牛血清(Hyclone)，佛波酯（PMA），DMSO

THP-1细胞的特性：（1）THP-1细胞是悬浮细胞；适合在偏酸的环境中生长。，但也不能让培养基的酸度太重。

（2） 一般不要频繁换液，2-3次换液离心一次（只需要中间补充培养基）。

（3）该细胞特别依赖细胞浓度，ATCC上提及细胞浓度在

5*105-106个/ml，生长比较快。

（4） 一般状态不好时，培养三天后细胞数量仍然不多，

继续培养一天或两天，培养基严重泛黄，细胞数量剧增。

（5）还要注意，传代后切忌常移出培养箱观察，否则会

影响细胞生长。

（6）冻存时密度大一些，最好用血清冻存（90%的血清

+10%DMSO）。

（7）细胞密度较低时，换液后第二天细胞开始抱团，成

小或大葡萄串（“克隆体”）状生长，我自己觉得这时细胞状态还不错，待生长两三天后，细胞密度变大，自然就会成单个生长了。但是值得注意的是：当细胞密度过高时，细胞呈单个生长，部分细胞形态就会有变化，有伸出小突出的（像小伪足），可能是细胞被挤到，因此形态发生变化，换液传代后，将细胞密度调低，生长一两天，细胞形态又恢复正常了。

细胞步骤：（1）观察：肉眼观察（培养液颜色，清澈度，内容物）：细胞状态好时，培养液澄清，细胞密度低时，培养基偏橙色，培养液得3天左右才变黄，若细胞密度高，一两天培养液就变黄，当密度很高时，培养液有一点点混浊感，变黄，这时由于细胞过多而不是污染。这些情况下基本就可传代了。