嗜热真菌耐热木聚糖酶的产酶条件和酶谱分析_李(2)

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微生物学通报　　　　　　　　　　　　2004年31(2)

木聚糖酶,高庆义等研究放线菌所产木聚糖酶,但所有这些菌株所产木聚糖酶的活

力都不高,工业化应用前景不大。

嗜热真菌T1lanuginosus是迄今已报道的最好的木聚糖酶的生产菌之一,因其木聚糖酶的高产量以及所产耐热木聚糖酶的潜在的工业应用前景而倍受关注。嗜热真菌

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T1lanuginosus。嗜热真

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菌T1lanuginosusDSM5826及SSBP,但是未见到T1lanuginosusCBS288154发酵产酶研嗜热真菌T1lanuginosusCBS2881542M18,为进一步研究纯酶1　111　菌株

原始菌株嗜热真菌T1lanuginosusCBS288154购于荷兰菌种保藏中心。菌株经甲基磺酸乙酯(EMS)和亚硝基胍(NTG)作为诱变剂,选用青霉素和链霉素作为菌种诱变后的筛选子,所获得的能在抗生素平板上生长,产酶稳定且活力较高的诱变株T1lanu2ginosusCBS2881542M18作为实验菌株。保藏斜面培养基和种子产生培养基均为PDA培养基,pH615,40℃培养5～6d备用。112　试剂

玉米芯木聚糖、棉子壳木聚糖、甘蔗渣木聚糖、稻壳木聚糖等制造方法参考文献[10];桦木木聚糖、低粘度羧甲基纤维素为Sigma产品;大豆蛋白胨、牛肉蛋白胨等购

自北京双旋培养基制造厂;其他试剂为分析纯。113　发酵产酶11311　发酵产酶培养基:玉米芯木聚糖20g,酵母提取物10g,蛋白胨10g,(NH4)2SO42g,MgSO4 7H2O013g,FeSO4013g,CaCl2013g,定容至1L。

11312　培养条件:300mL三角瓶装液量100mL,接入1cm见方的平板培养基上生长5

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～6d的菌丝体,45℃条件下以200rΠmin的转速培养7d,8,000rΠmin离心10min,取上清液测定木聚糖酶活力。11313　发酵产酶条件:在发酵产酶培养基的基础上,上述培养条件下,改变碳源种类,浓度为2%,考察碳源对产酶的影响;最佳碳源确定后,用不同的有机氮源或无机氮源作为唯一氮源,浓度2%,来考察氮源对产酶的影响;在优化的碳氮源基础上确定了培养基初始pH值之后,寻求菌株产酶的最佳温度。114　木聚糖酶活力的测定

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木聚糖酶活力的测定参照DNS法:011mL适当稀释的酶溶液,加入到019mL用0105molΠL、pH615柠檬酸钠缓冲液配制的1%桦木木聚糖(Sigma)底物溶液中,50℃反应10min,用DNS法测定释放的还原糖量,同时以木糖作标准。木聚糖酶活力单位(u)的定义为:在上述条件下,每分钟水解木聚糖生成1μmol木糖所需要的酶量。

纤维素酶活力:方法同上,仅将底物和标准物分别换成低粘度羧甲基纤维素(Sig2ma)和葡萄糖。115　聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS2PAGE)与酶谱分析

SDS2PAGE按照Laemmli(Laemmli1Nature,1970)的方法进行。分离胶1215%,浓