嗜热真菌耐热木聚糖酶的产酶条件和酶谱分析_李(5)

　2004年31(2)　　　　　　　　　　　　微生物学通报 53

发酵7d所得到最终酶活力高达1,834uΠmL。另外该菌在45℃发酵也能得到较高的酶活力,而在30℃和55℃条件下培养该株菌仅能得到最高酶活力的38%和51%。21115　产酶曲线与生长过程:图3是菌株在摇瓶培养条件下的产酶曲线。菌株在优化的发酵条件下,从第2d起培养液中木聚糖酶活力开始升高,在第7d达到高峰值,然后基本保持稳定。培养液的pH。观察菌丝在发酵过程中的变化,发现在培养的前3d,(466uΠmL),从第4d起菌丝开始逐渐老化,到第;4d的684uΠmL的迅速升高至第6d的1,790uΠmL,60%的合成和分泌,并在第7d,Πm,。可以认为,此株菌的木。用前述方法测定酶液的纤维素酶活力,发现该酶

。

图2

　发酵温度对产酶的影响图3产酶曲线

　—■——木聚糖酶活力,　—◆——终

pH值

212　粗酶热稳定性

粗酶液的热稳定性见图4。酶在60℃

和pH615的条件下相当稳定,保温6h以上酶活力几乎无变化(数据未显示);在65℃和pH615的条件下处理,剩余酶活力虽呈现出下降的趋势,但下降速度缓

慢:保温30min酶活力仅损失了4%,1h

图4　粗酶热稳定性

后损失13%,保温2h剩余酶活力仍在

　—■——65℃,　—◆——60℃

70%以上。

同时,在酶活力的测定过程中发现,该酶液在较高温度测定时,活力表现出巨大的增幅:50℃时酶活力是1,834uΠmL,而在65℃测定则高达4,700uΠmL,说明该酶有较

[9]

好的耐热性。Singh等报道嗜热真菌T1lanuginosus的另一株SSBP所产木聚糖酶的最适温度是70℃,且在较宽的pH范围内有优良的热稳定性,因此深入研究该株菌所产木聚糖酶的性质具有实际意义。213　木聚糖酶蛋白的SDS2PAGE和酶谱分析

嗜热真菌ThermomyceslanuginosusCBS2881542M18以玉米芯来源的木聚糖为诱导物所产酶液的SDS2PAGE如图5A所示。从SDS2PAGE上得到酶蛋白的分子量约为26kD。该值高于Anand等报道的嗜热真菌Humicolalanuginose(曾用名)所产的木聚糖酶的分

[9]

子量,其值为2215kD;也稍高于Singh等所报道的嗜热真菌T1lanuginosus的另一株