生物工程下游技术期末复习题(10)

老师给的

容量、低的非可逆吸附以及化学稳定性和热稳定性好，完全满足HPLC柱的要求。

7、细胞破碎技术研究的发展方向

细胞破碎技术的目的是释放内含物，其方法很多，按照是否存在外力可分为机械法和非机械法两大类。在实际使用中，不管是机械法还是非机械法，各种方法都有自身的局限性，机械法因高效、价廉、简单而得以工业化应用，但敏感性物质的失活问题，碎片去除以及杂蛋白太多等问题有待解决，因此细胞破碎技术远未完善。总体上看，细胞破碎技术研究的发展方向体现在一下几个方面：

1、 多种破碎方法相结合

化学法与酶法取决于细胞壁的化学组成，机械法取决于细胞结构的机械强度，而化学组成又决定了结构的机械强度，组成的变化必然影响到强度的差异，在实际使用中，化学法或酶法与机械法相结合可以大大提高破碎效果。

2、 与上游过程相结合

在发酵培养中，培养基、生长期、操作参数（如pH、温度、通气量、稀释率）等因素对细胞破碎都有影响，因此细胞破碎与上游培养有关。

另外一方面，用基因工程的方法对菌种进行改造也是非常重要的。这方面的工作包括以下内容。

①克隆噬菌体溶解基因：在细胞内引入噬菌体基因，控制一定条件（如温度等），细胞自内向外溶解，释放出内含物。

② 耐高温产品的基因表达 在破碎和分离过程中，为防止产品失活而消耗的制冷费时相当可观的。如果产品能表达成耐高温型，杂蛋白仍然保持原特性，那么在较高的温度下就可以将产品与杂质分开，这样既可以节省了冷却费用，又简化了分离步骤。

3、 与下游过程相结合

细胞破碎与固-液分离紧密相关，对于可溶性产品来讲，碎片必须除净，否则将造成层析柱和超滤膜的堵塞，缩短设备的寿命。因此，在破碎细胞的同时，要考虑所造成的细胞碎片对后分离的影响。

8、微囊化方法适用于动物细胞必须具备的条件及聚赖氨酸/海藻酸微囊化方法的原理。

自20世纪60年代固定化酶技术问世以来，用微囊化方法包埋生物大分子及细胞的方法很多，但并不是所有的方法都能适合于动物细胞，用于动物细胞的微囊话方法必须具备以下一些条件：

1、 微囊化的过程要温和，快速，不损伤细胞，尽可能在液体状态和生理条件下制备。